檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì),一.實驗原理： 某些化學(xué)試劑能夠使生物組織中的有關(guān)有機化合物產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。如：.還原性糖的鑒定：還原性糖+.脂肪的鑒定： 脂肪+ 脂肪+ .蛋白質(zhì)的鑒定：蛋白質(zhì)+淀粉 +,斐林試劑,磚紅色沉淀,蘇丹染液,橘黃色,蘇丹染液,紅色,雙縮脲試劑,紫色,碘,藍色,2,二.目的要求： 嘗試用化學(xué)試劑檢測生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì),1、還原糖的檢測和觀察： 選材 應(yīng)該選擇含 量高.顏色為,糖,白色或近于白色,制備組織樣液：,制漿 過濾 取液,三.實驗過程:,用一層紗布,的植物組織，,3,以蘋果.梨為最好。,可溶性還原糖與斐林試劑在加熱的過程中生成磚紅色沉淀，說明植物組織樣液中含有還原糖。,注入2mL蘋果組織樣液,注入1mL剛配制好的斐林試劑,水浴加熱約2min,呈色反應(yīng),變成磚紅色,50-650C的溫水,甲乙液等量混勻現(xiàn)配現(xiàn)用,振蕩、混合搖勻呈現(xiàn)藍色,4,還原糖有 。 試劑： . （甲液：0.1g/ml 的 , 乙液：0.05g/ml的 .）甲乙液必須 后再加入樣 液中， 。 必須 。,葡萄糖，果糖，麥芽糖,用水浴加熱,斐林試劑,NaOH,CuSO4,等量混合均勻,現(xiàn)配現(xiàn)用,注意事項：,顏色變化：,淺藍色,棕色,磚紅色,5,思考：1.為什么加入斐林試劑甲液和斐林試劑乙液時必須混合后再加入？,6,因為若先加入NaOH溶液，還原性糖中的還原性半縮醛羥基易被氧化而失去還原性，再加入CuSO4溶液后不能產(chǎn)生Cu2O磚紅色沉淀，只有將其先配成Cu(OH)2懸濁液，才可產(chǎn)生磚紅色沉淀。,7,2.斐林試劑甲液和乙液既然混合后使用，為什么不能在實驗前配制好，一定要使用時臨時配制？,8,由一分析可知，鑒定試劑實質(zhì)上是Cu(OH)2懸濁液，很不穩(wěn)定，容易生成藍色Cu(OH)2沉淀，所以應(yīng)將甲液、乙液分別配制儲存，使用時再臨時配制。,9,2、淀粉的檢測和觀察： 取材：,馬鈴薯勻漿,檢測,組織樣液2mL,碘液2滴,說明組織樣液中存在淀粉。,注意：常用材料：馬鈴薯 試劑： 。顏色變化： 。,碘液,變藍,搖勻后變成藍色,10,3、脂肪的檢測和觀察：,圓形小顆粒呈橘黃色，說明有脂肪存在。,方法一：待測組織樣液+蘇丹染液橘黃色,取材：,花生種子(浸泡34h），將子葉削成薄片,方法二：制作子葉臨時切片，用顯微鏡觀察 子葉細(xì)胞的著色情況。,取最理想的薄片在薄片上滴蘇丹染液（23min）去浮色（用50酒精） 制成臨時裝片,低倍鏡下尋找到已著色的圓形小顆粒，然后用高倍鏡觀察,11,注意事項： 切片要薄，如厚薄不均就會導(dǎo)致觀察時有的地方清晰有的地方模糊。 酒精的作用是： 。 需使用顯微鏡觀察 使用不同的染色劑染色時間不同顏色變化： 。,洗去浮色,橘黃色或紅色,12,3.花生種子浸泡的時間是否越長越好？用染色的花生仁切片，在顯微鏡下觀察脂肪微粒顏色時，制片滴加的水一定要用蒸餾水，為什么不能用自來水？,13,花生種子浸泡時間短了，不容易切片；浸泡時間過長，切下的薄片不容易成型，所以一般是提前浸泡34小時。自來水中含有Ca離子，Mg離子等，易與染色劑發(fā)生交換吸附，使染色退去，從而不易觀察脂肪粒被染色的情況。,14,4、蛋白質(zhì)的檢測和觀察： 選材 應(yīng)該選擇含 豐富 的豆?jié){或雞蛋清溶液（避免材料自身的顏色對實 驗變化顏色的掩蓋）,蛋白質(zhì),黃豆?jié){濾液或蛋清稀釋液,制備組織樣液,呈色反應(yīng),組織樣液2mL,雙縮脲試劑A液1mL,雙縮脲試劑B液4滴,搖勻后變成紫色,說明組織樣液中存在蛋白質(zhì)。,15,（3）注意事項： 試劑： （ A液：0.1g/ml的 ； B液： 0.01g/ml的 ） 先加 ，再加 。 注意：先加入試劑A，造成堿性環(huán)境，而只有在堿性環(huán)境中，蛋白質(zhì)才容易與Cu離子發(fā)生顏色反應(yīng)，形成紫色的絡(luò)合物。 B液要求量適中，否則多余的B液將會與A液發(fā)生反應(yīng)生成大量藍色Cu(OH)2沉淀而遮蓋試驗中所產(chǎn)生的紫色。同樣為了防止生成較Cu(OH)2沉淀遮蔽實驗結(jié)果，在配制溶液時，雙縮脲試劑B比斐林試劑乙液濃度小得多，這也是斐林試劑和雙縮脲試劑不能互換使用的道理。 鑒定前，留出一部分組織樣液，以便對比。 用于蛋白質(zhì)鑒定的蛋清必須稀釋，以免實驗后粘住試管壁，不易洗刷,雙縮脲試劑,A液1ml,B液4滴,NaOH,CuSO4,蛋白質(zhì)的檢測結(jié)果,16,斐林試劑與雙縮脲試劑的比較：,A液:0.1g/mLNaOHB液:0.01g/mLCuSO4,甲液:0.1g/mLNaOH乙液:0.05g/mLCuSO4,紫色物質(zhì)生成,磚紅色沉淀,先加A液，再加B液，不需加熱,甲液與乙液先混再用，且現(xiàn)配現(xiàn)用，需加熱,蛋白質(zhì),還原性糖,17,2.下列關(guān)于實驗操作步驟的敘述中，正確的是用于鑒定可溶性還原糖的斐林試劑甲液和乙液，可直接用于蛋白質(zhì)的鑒定.脂肪的鑒定需要用顯微鏡才能看到被染成橘黃色的脂肪滴 C.鑒定可溶性還原糖時，要加入斐林試劑甲液搖勻后，再加入乙液用于鑒定蛋白質(zhì)的雙縮脲試劑A液與B液要混合均勻后，再加入含樣品的試管中，且必須現(xiàn)配現(xiàn)用,（ ）,18,1、實驗原理：,還原性糖+斐林試劑磚紅色沉淀還原性糖：葡萄糖、麥芽糖、果糖非還原性糖：蔗糖、淀粉等,+,2、配制斐林試劑：,實驗一：還原性糖的鑒定,19,3、材料用具：,如果植物組織中積累的成分是淀粉和蔗糖，那就無法檢測到還原性糖。有些植物盡管含有較多的還原性糖，但如果本身含有葉綠素或其他色素，這些色素就會影響實驗現(xiàn)象起到遮蓋作用。這些都不適宜做實驗材料。,蘋果和梨是比較理想的實驗材料。,20,蘋果、研缽、小刀,斐林試劑A液、斐林試劑B液、二氧化硅,量筒、試管架、吸管、試管夾、試管、滴管,漏斗、紗布,火柴、酒精燈、三腳架、石棉網(wǎng)、燒杯,21,4、實驗步驟：,取一個洗凈的蘋果切下一塊，去皮，然后切成小塊，取一部分切成小塊的蘋果放在研缽中，加入少許二氧化硅（石英砂），然后研磨，將研缽中加入少量水繼續(xù)研磨。,將玻璃漏斗插入試管中，在漏斗上墊一層紗布，將組織研磨液進行過濾，得到蘋果的組織樣液。,用量筒取兩毫升組織樣液，再用量筒取兩毫升新配制好的斐林試劑。,22,取一只試管，將量好的蘋果組織樣液倒入試管中，然后將量好的斐林試劑倒入試管中，震蕩試管使溶液混合均勻，我們可以看到此時溶液呈藍色。,將這只試管放入盛有開水的大燒杯中，用酒精燈加熱煮沸。,溶液的顏色開始是藍色，然后慢慢變成磚紅色。,23,這個實驗就證明了，蘋果中含有還原性糖的存在。,5、實驗現(xiàn)象：,溶液的顏色從藍色-棕色磚紅色。,6、結(jié)論：,蘋果中含有還原性的糖。,24,還原糖有 。 試劑： . （甲液：0.1g/ml 的 , 乙液：0.05g/ml的 .）甲乙液必須 后再加入樣 液中， 。 必須 。,葡萄糖，果糖，麥芽糖,用水浴加熱,斐林試劑,NaOH,CuSO4,等量混合均勻,現(xiàn)配現(xiàn)用,注意事項：,顏色變化：,淺藍色,棕色,磚紅色,25,實驗一：脂肪的鑒定,1、實驗原理：,脂肪+蘇丹橘黃色脂肪+蘇丹紅色,取少量脂肪樣液，加入蘇丹，震蕩，可看到溶液呈了橘黃色，本實驗我們用蘇丹做染液。,2、材料用具：,芝麻，脂肪含量豐富，但種子顆粒太小，不利于切片制作。玉米，脂肪含量較少，種子顆粒也較小，因此也不適合做實驗材料。,花生是比較理想的實驗材料我們選用花生,顯微鏡、鑷子、毛筆、吸水紙、刀片、載玻片、蓋玻片、培養(yǎng)皿,50%的酒精、蘇丹、清水,3、實驗步驟：,取一粒浸泡過的花生種子，去皮，分開兩片子葉，將子葉切成薄片，然后用毛筆將這些材料放入盛有清水的培養(yǎng)皿中。,取一片載玻片，用紗布擦凈，用毛筆取一片最薄的材料，放在載玻片中央。,用滴管在花生種子薄片上滴幾滴蘇丹染液，染色2至3分鐘，用吸水紙吸去花生種子薄片周圍的染液。,在薄片上滴1至2滴體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精，洗去附色，用吸水紙洗去花生子葉周圍的酒精。,在薄片上滴一滴清水，蓋上蓋玻片，制成臨時裝片。,在低倍鏡下尋找花生種子薄片的最薄處，將這部分移至視野中央。,用顯微鏡觀察花生種子薄片。,我們可以看到細(xì)胞中一個個圓形的小顆粒，這就是脂肪顆粒。,低倍鏡下觀察,高倍鏡下觀察,顯微鏡下觀察結(jié)果,31,4、實驗現(xiàn)象：,5、結(jié)論：,顯微鏡下觀察到橘黃色的顆粒。,花生種子細(xì)胞中含有脂肪。,實驗一：蛋白質(zhì)的鑒定,1、實驗原理：,蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑紫色絡(luò)合物,2、材料用具：,豆?jié){、蛋清、牛奶都是很好的實驗材料。,本實驗我們用蛋清做實驗材料，在用蛋清做實驗材料時，要注意將蛋清稀釋，如果稀釋不夠，反應(yīng)后的產(chǎn)物會粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不容易徹底。,試管架、試管、吸管,蛋清稀釋液,雙縮脲試劑A液、雙縮脲試劑B液、量筒,3、實驗步驟：,用量筒量取兩毫升的蛋清稀釋液。再用脲尿試劑A液,將量取的蛋清液和雙縮脲試劑A液分別倒入到試管中，震蕩均勻，此時可見試管內(nèi)仍然是透明的。,再向試管中加入1至2滴雙縮脲試劑B液。,震蕩均勻，此時可見試管內(nèi)溶液呈紫色嗎，這就表明蛋清液中含有蛋白質(zhì)。,4、實驗現(xiàn)象：,蛋清液呈紫色。,5、結(jié)論：,蛋清液中含有蛋白質(zhì)。,四種物質(zhì)顏色反應(yīng)的對比,還原糖,蛋白質(zhì),淀粉,脂肪,37,1、鑒定還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)所用的試劑和所出現(xiàn)的顏色分別是（ ）A、斐林試劑（磚紅色）、雙縮脲試劑（紫色）、蘇丹III染液（橘黃色）B、雙縮脲試劑（紫色）、斐林試劑（磚紅色）、蘇丹III染液（橘黃色）C、蘇丹III染液（橘黃色）、雙縮脲試劑（紫色）、斐林試劑（磚紅色）D、斐林試劑（磚紅色）、蘇丹III染液（橘黃色）、雙縮脲試劑（紫色）2、生物組織中普遍存在可溶性還原糖，試回答有關(guān)鑒定實驗的問題：（1）實驗材料的選擇，下面哪一組較為適宜（ ）A、西瓜和甜菜B、甘蔗和甜橙C、蘋果和梨子D、淀粉和蛋清（2）下述糖類物質(zhì)中，不能與斐林試劑發(fā)生作用生成磚紅色沉淀的是（ ）A、葡萄糖B、果糖 C、麥芽糖 D、蔗糖（3）用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時，溶液的顏色變化過程是（ ）A、淺綠色棕色磚紅色（沉淀）B、淺藍色棕色磚紅色（沉淀）C、棕色淺藍色磚紅色（沉淀）D、棕色淺綠色磚紅色（沉淀）,38,3、在做脂肪鑒定的實驗中用到50%的酒精溶液，其作用是（ ）A、消毒B、作為染色的輔助劑C、便于觀察D、洗去切片的浮色4、蛋白質(zhì)鑒定時，事先留出一些黃豆組織樣液的目的是（ ）A、與反應(yīng)后物顏色做對比B、失敗后重做一遍C、鑒定可溶性還原糖D、留下次實驗用5、（多選）花生子葉薄片用蘇丹III染色后，為觀察更清楚，需用高倍鏡換高倍鏡并調(diào)好焦距后，發(fā)現(xiàn)視野太暗，此時應(yīng)（ ）A、將反光鏡由平面換為凹面B、將反光鏡由凹面換為平面C、將小光圈換成大光圈D、將大光圈換成小光圈6.用班氏試劑鑒別健康人的下列四種液體，出現(xiàn)紅黃色沉淀的是（ ）A血