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儀器分析主講老師：李術艷情境二紫外-可見分光光度法的應用任務5掌握可見分光光度法的應用知識點2分光光度法的定量分析

分光光度法的定量分析定量分析基本原理：通過測定溶液對一定波長入射光的吸光度，依據朗伯-比耳定律，求出溶液中物質的濃度。應用范圍：單組分、多組分。

分光光度法的定量分析1.單組分的定量分析

在測定條件下，如果待測組分的吸光系數已知，可以測定溶液的吸光度，直接根據朗伯-比爾定律，求出組分的濃度或含量。吸光系數法（絕對法)

分光光度法的定量分析

【例1-4】已知維生素B12的在361nm處的質量吸光系數為20.7L·g-1·cm-1。稱取樣品30.0mg，加水溶解后稀釋至1000ml，在該波長處用1.00cm吸收池測定溶液的吸光度為0.618，計算樣品溶液中維生素B12的質量分數。解：根據朗伯-比爾定律：

分光光度法的定量分析標準對照法預先配制濃度已知的標準溶液，要求其濃度Cs與待測試液濃度Cx接近。在相同條件下，平行測定試樣溶液和標準溶液的吸光度Ax和As。由Cs可計算試樣溶液中被測物質的濃度CxAx=εbCxAs=εbCs

分光光度法的定量分析標準曲線法配制一系列不同濃度的標準溶液。測定標準系列溶液的吸光度。繪制吸光度－濃度曲線，稱為標準曲線（工作曲線或校正曲線）。在相同條件下測定試樣溶液的吸光度，從校正曲線上找出與之對應的未知組分的濃度。

分光光度法的定量分析【例1-4】以鄰二氮菲為顯色劑，采用標準曲線法測定微量Fe2+。實驗得到標準溶液和樣品的濃度及吸光度數據，試確定樣品的濃度。溶液標1標2標3標4標5

標6樣品濃度c×105（mol/L）1.002.003.004.006.008.00cx吸光度A0.1130.2120.3360.4340.6690.8680.712

分光光度法的定量分析解：得到回歸方程為：

分光光度法的定量分析二、多組分的定量分析

依據：吸光度具有加和性。測定試樣中各種純組分的吸收光譜，對比其最大吸收波長，并計算出對應的吸光系數。解方程，分別求各組分的含量。

分光光度法的定量分析1.兩組分吸收光譜不重疊（互不干擾）兩組分在各自λmax下不重疊→分別按單組分定量

分光光度法的定量分析2.兩組分吸收光譜部分重疊λ1→測A1→y組分不干擾→按單組分定量測Cxλ

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