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單元三抗生素類藥物的發酵生產項目三四環素的發酵生產

任務二四環素的發酵生產（一）發酵生產流程（二）種子制備1.孢子制備麩皮斜面砂土管→母斜面→子斜面→種子罐→發酵罐控制要點（1）進行簡單的自然分離，（2）節約砂土管的用量。影響因子：水、麩皮目前生產中為了保證水質穩定，一般是在蒸餾水中添加0.005%MgSO4，0.01%KH2PO4，0.015%(NH4)2HPO4等無機鹽，溶解形成的水再用于配制培養基，所培養的菌落豐滿，孢子層厚，孢子質量穩定，還能縮短孢子的成熟期。麩皮的質量要求為含糖6.5%，含氮2%，含磷0.6%左右，水分小于12%。加工麩皮用的小麥品種、產地與加工方法要穩定。另外溫度和培養環境也應嚴格控制。2.種子制備培養基：蛋白胨、花生餅粉、淀粉培養條件：30～32℃，24～27h標志：菌絲形態處于第二期末或第三期初；菌體處于代謝旺盛階段，C、N源明顯被利用；pH值下降后又上升，達到pH＝6.0左右；培養液因菌絲增加而粘稠，色澤逐漸帶黃色，有少量四環素出現影響因子：通氣、攪拌（二）發酵工藝控制四環素生產一般采用二級或三級發酵方式1.培養基

N源：花生餅粉，黃豆餅粉，棉籽餅粉，硫酸銨，氯化銨，硝酸銨，尿素等

C源：淀粉，可溶性淀粉，葡萄糖，糖蜜，油脂等

無機鹽影響磷酸鹽對菌體生長和抗生素的合成有很大影響；鎂鹽、鈣鹽促進四環素生物合成；鐵離子及其他無機離子（如硼、鈷、鋰、鋅、鉬、鎢、鋁等），抑制四環素的生物合成;培養基中的CaCO3能與菌體合成的四環素結合成四環素鈣鹽（水中溶解度很低），從而降低了水中可溶性四環素的濃度，促進菌絲體進一步分泌四環素。消沫劑:植物油、動物油抑氯劑抑氯劑的作用是抑制氯原子進入四環素分子結構，抑制金霉素的合成，增加四環素的產量。生產中加入的溴化鈉主要是讓溴和氯競爭，來抑制氯的活性。但抑氯效果不高，通常還要加入促進劑M（2-巰基苯并噻唑），溴化鈉一起作用，抑制氯進入四環素分子，使金霉素的產量低于5%。此外，還有2，5-巰基-1，3，4-噻二唑等有效抑氯劑。各種抑氯劑的用量約為0.0001%～0.05%2.培養溫度培養溫度不僅影響四環素的產量，而且會改變金色鏈霉菌生物合成的方向。35℃以上時，只合成四環素。降低溫度，則金霉素的合成加強。一般四環素發酵溫度采用28～32℃。3.pH值的影響金色鏈霉菌生長的最適pH值為6.0～6.8，而生物合成四環素的最適pH值為5.8～6.0，在發酵不同階段可用加入葡萄糖或淀粉和氨水等來控制所需的pH值。4.溶氧的影響

培養12～60h的階段中菌絲量顯著增加，菌絲的攝氧率達到高峰，溶解氧水平為發酵全程中的最低值。此階段一旦出現任何導致溶解氧降低的因素，能明顯改變菌體的正常代謝，影響四環素的生物合成。因此在整個發酵期間要不斷通入無菌空氣，并加以攪拌，滿足菌體對溶解氧的要求。5.補料四環素發酵過程中需不斷補充碳源，以供給金色鏈霉菌生長和合成四環素的需求。用加氨水的方

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