pcr核酸考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)的三個(gè)步驟依次為（）A.變性、退火、延伸B.退火、變性、延伸C.延伸、變性、退火D.變性、延伸、退火答案：A2.以下哪種酶是PCR反應(yīng)所必需的（）A.逆轉(zhuǎn)錄酶B.解旋酶C.TaqDNA聚合酶D.RNA聚合酶答案：C3.PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供起始的3'-OHB.提供起始的5'-OHC.解開雙鏈DNAD.合成RNA答案：A4.在PCR反應(yīng)中，退火溫度主要取決于（）A.模板的長(zhǎng)度B.引物的長(zhǎng)度和GC含量C.Taq酶的活性D.dNTP的濃度答案：B5.PCR反應(yīng)體系中，dNTP的作用是（）A.提供能量B.構(gòu)建新的DNA鏈C.穩(wěn)定反應(yīng)體系D.激活Taq酶答案：B6.下列關(guān)于PCR的說法錯(cuò)誤的是（）A.可以在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因B.特異性強(qiáng)C.不需要模板D.靈敏度高答案：C7.PCR產(chǎn)物的特異性取決于（）A.引物與模板的特異性結(jié)合B.Taq酶的特異性C.dNTP的特異性D.反應(yīng)緩沖液的特異性答案：A8.一般PCR反應(yīng)中，循環(huán)次數(shù)通常為（）A.10-20次B.20-30次C.30-40次D.40-50次答案：C9.PCR反應(yīng)中，變性溫度一般為（）A.90-95℃B.80-85℃C.70-75℃D.60-65℃答案：A10.如果PCR沒有得到預(yù)期的產(chǎn)物，可能的原因不包括（）A.引物設(shè)計(jì)錯(cuò)誤B.模板有雜質(zhì)C.反應(yīng)體系中酶量過多D.反應(yīng)溫度過低答案：D二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)可應(yīng)用于以下哪些方面（）A.基因克隆B.基因診斷C.法醫(yī)學(xué)鑒定D.基因表達(dá)調(diào)控研究答案：ABCD2.影響PCR反應(yīng)的因素包括（）A.引物B.模板C.Taq酶D.反應(yīng)溫度和時(shí)間答案：ABCD3.以下關(guān)于引物設(shè)計(jì)的原則正確的是（）A.引物長(zhǎng)度一般為15-30bpB.GC含量在40%-60%C.避免引物內(nèi)部形成二級(jí)結(jié)構(gòu)D.引物之間不能互補(bǔ)答案：ABCD4.PCR反應(yīng)體系的基本成分包括（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTP答案：ABCD5.在PCR產(chǎn)物分析中，可采用的方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.核酸測(cè)序D.熒光定量分析答案：ABCD6.以下哪些是Taq酶的特點(diǎn)（）A.熱穩(wěn)定性高B.具有5'-3'聚合酶活性C.缺乏3'-5'外切酶活性D.對(duì)dNTP具有一定的特異性答案：ABCD7.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，防止污染的措施有（）A.分區(qū)操作B.使用一次性耗材C.嚴(yán)格遵守操作規(guī)程D.定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔和消毒答案：ABCD8.下列關(guān)于PCR擴(kuò)增特異性的說法正確的是（）A.引物特異性影響很大B.退火溫度合適可提高特異性C.模板純度影響特異性D.反應(yīng)體系中各成分比例影響特異性答案：ABCD9.對(duì)于長(zhǎng)片段PCR，需要注意（）A.選擇合適的酶B.優(yōu)化反應(yīng)條件C.設(shè)計(jì)較長(zhǎng)的引物D.增加循環(huán)次數(shù)答案：ABC10.與傳統(tǒng)的基因克隆方法相比，PCR的優(yōu)勢(shì)在于（）A.操作簡(jiǎn)便B.快速C.對(duì)模板要求低D.特異性強(qiáng)答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)不需要模板就可以進(jìn)行擴(kuò)增。（）答案：錯(cuò)誤2.Taq酶具有3'-5'外切酶活性。（）答案：錯(cuò)誤3.引物的長(zhǎng)度越長(zhǎng)越好。（）答案：錯(cuò)誤4.退火溫度越高，引物與模板結(jié)合越特異。（）答案：正確5.PCR反應(yīng)只能擴(kuò)增DNA，不能擴(kuò)增RNA。（）答案：錯(cuò)誤6.在PCR反應(yīng)中，dNTP的濃度越高越好。（）答案：錯(cuò)誤7.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯(cuò)誤8.引物與模板的互補(bǔ)程度越高，特異性就越高。（）答案：正確9.PCR反應(yīng)中，循環(huán)次數(shù)越多，產(chǎn)物量就一定越多。（）答案：錯(cuò)誤10.反應(yīng)體系中如果存在抑制Taq酶活性的物質(zhì)，可能會(huì)導(dǎo)致PCR失敗。（）答案：正確四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的基本原理。答案：PCR反應(yīng)基于DNA的半保留復(fù)制原理。在反應(yīng)體系中加入模板DNA、引物、dNTP、Taq酶等成分。通過高溫變性使模板DNA雙鏈解開，然后降溫退火使引物與模板特異性結(jié)合，最后在適宜溫度下由Taq酶催化dNTP按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的DNA鏈，經(jīng)過多次循環(huán)實(shí)現(xiàn)目的基因的大量擴(kuò)增。2.請(qǐng)簡(jiǎn)要說明引物設(shè)計(jì)時(shí)需要考慮的因素。答案：引物設(shè)計(jì)需考慮長(zhǎng)度（15-30bp）、GC含量（40%-60%），避免引物內(nèi)部形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，引物之間不能互補(bǔ)，還要確保引物與模板特異性結(jié)合等因素。3.寫出PCR反應(yīng)體系中各成分的作用（至少三種成分）。答案：模板DNA為擴(kuò)增提供目標(biāo)序列；引物提供起始的3'-OH用于新鏈合成；Taq酶催化dNTP合成新的DNA鏈；dNTP是構(gòu)建新DNA鏈的原料。4.簡(jiǎn)述PCR產(chǎn)物的分析方法有哪些？答案：常見的有瓊脂糖凝膠電泳，可根據(jù)條帶位置和大小判斷產(chǎn)物；聚丙烯酰胺凝膠電泳分辨率更高；核酸測(cè)序確定產(chǎn)物準(zhǔn)確序列；熒光定量分析可定量檢測(cè)產(chǎn)物。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論在PCR實(shí)驗(yàn)中如何提高產(chǎn)物的特異性。答案：提高引物特異性，保證其與模板特異結(jié)合；優(yōu)化退火溫度，合適溫度可減少非特異結(jié)合；提高模板純度，減少雜質(zhì)影響；優(yōu)化反應(yīng)體系各成分比例。2.請(qǐng)討論P(yáng)CR技術(shù)在疾病診斷中的應(yīng)用前景。答案：PCR可快速檢測(cè)病原體核酸用于疾病早期診斷；可檢測(cè)基因變異輔助遺傳病診斷；在腫瘤診斷中可檢測(cè)癌基因等，應(yīng)用前景廣闊。3.闡述PCR實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果