【免疫學實驗】流式CBA多因子檢測詳解

CBA原理詳細介紹

CytometricBeadArray(CBA),即細胞因子微球檢測技術。是

一種基于流式細胞檢測系統的多重蛋白定量檢測方法，它能夠同時對

單個樣品中的多個指標進行檢測。BD公司利用流式細胞儀可對熒光信

號進行級數放大的特性，將受檢的可溶性因子附著于一些具有近似細

胞直徑的微粒上，即可對受檢樣品中的各種可溶性因子進行檢測。

CBA的基本原理近似于ELISA的檢測，即利用微小、分散的顆粒捕獲

液體待測物，并利用流式細胞儀檢測類似〃三明治”的顆粒——待測

物復合體所散發的熒光，從而測定待測物的數量。

CaptureAbCaptureBead

詳細原理介紹

每個CBA微球大小一致，具有特定的熒光強度，包被有適用于特

定分析(如其它抗體或者可溶性蛋白)的恃異性捕獲抗體(Capture

Antibody)，提供了類似ELISA孔板的捕獲表面。當微球和待測樣品

溶液混合后，微球上的特異性抗體就與樣品(血清、血漿或者細胞培

養液)中相應的抗原或蛋白結合，然后加入熒光標記的檢測抗體，就

會形成"三明治〃夾心復合物。最后通過流式細胞儀對特異性目的蛋

白進行檢測。CBA的每種微球攜帶有不同強度的紅色熒光，在流式細

胞儀的FL3通道通過檢測微球熒光強度的差異對目的蛋白定性；檢測

抗體帶有PE熒光素標記，在流式細胞儀的FL2通道檢測，通過檢測抗

體的PE熒光強度定量目的蛋白。

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CBA技術特點

CBA具有FCM的寬范圍熒光檢測特點,對樣本需求量更少，檢測

更快速、更準確。下面我們介紹一下CBA主要的技術特點：

1.輕松實現多重檢測。最多可同時對一個樣本中的75個目的蛋

白進行精確定量。

2、樣本需要量小。僅需要50HL溶液就可進行一次檢測。

3、更高的靈敏度。分析靈敏度高達2.8pg/mL。

4.更高的靈敏度.更寬的檢測范圍和更好的重復性。CBA技術

使蛋白定量的分析靈敏度高達pg/ml級別，檢測范圍達0?5000pg/ml,

所有分析只需一組標準曲線。根據抗體的熒光強度對目的蛋白定量，

排除了ELISA反應中酶聯放大產生的假陽性。

5、檢測對象的靈活組合一BDCBAFlexSet。CBAkit是同時檢

測試劑盒配好的6個指標，形式比較固定。為滿足不同客戶的實際需

要和研究興趣，于年初推出了它改變了

BD2005CBAFlexseto

CBAkit的固定形式，成為自由組合.靈活搭配的〃自助餐〃。您可以

根據需要組合不同的捕獲微球來檢測多個指標，最多能同時檢測75個

指標。除了擁有CBAkit的優勢外，FlexSet還配有獨立的軟件分析

系統(CBAFlexSetAnalysisSoftware)，并且可以在BD

FACSArrayBioanalyzer上，直接用96孑L和384孔板進行操作。

CBAFlexset賦予研究者更靈活.更自由，更大的選擇空間，而且進

一步豐富了CBA產品線。種類涉及免疫、細胞信號傳導、細胞凋亡等

許多領域的蛋白定量分析。

6、操作簡單，省時省力。CBA技術采用芯片式集成測定，所有

檢測只需一組標準曲線，就可計算出每種待測蛋白濃度；操作簡單，

整個流程只需要3.5小時，對待測樣本可做實時分析，縮短檢測了時

間，提高了檢測效率。

7、強大的軟件分析系統。BDCBA軟件具有強大的數據處理能力，

直接將目標蛋白的檢測結果換算成標準濃度；除了為用戶提供待測物

的計數結果外，還能提供可視輪廓或信號圖形以幫助用戶獲得更多的

信息。有用于Macintosh和Microsoft系統兩種版本供您選擇。和

傳統的液相蛋白定量技術相比，CBA技術是一種〃多元“和“同步〃

的檢測技術。

革新的CBA技術與傳統的蛋白定量相比有下列優點:

流式CBA檢測技術

檢測指標一個樣本同時做到多參數檢測

所需樣本量樣本用量少F50ul

平臺流式儀器，幾乎適用丁?所有流式儀器，操作力.便，節省時間

實驗時間不需要孵育過夜.流式細胞儀白動檢測.標準曲倏白動冽1定,專用軟件白動計算

,幅爐

?*

1QBA8n吸

CBA檢測對象

血清、血漿、眼淚、房水、唾液、體腔灌洗液、細胞培養液上清、

細胞裂解物等。

CBA應用領域

a炎癥因子的水平的分析

a腫瘤研究及腫瘤疾病的輔助診斷、療效和預后監測

a凋亡相關蛋白分析

A系統性紅斑狼瘡（SLE）和新生兒膿血癥等免疫疾病的監控

a干細胞研究和干細胞治療監測

A免疫學研究和免疫疾病的輔助診斷和監控

A感染疾病的研究及輔助診斷和療效評價

?免疫功能監測

?藥效評價，藥物研發、疫苗研究

A細胞信號傳導中磷酸化蛋白、凋亡相關蛋白定量分析

CBA指標檢測明細:

1、CBA指標

目相產品說明檢測指標

557800Non-humanPrimateTh1/Th2CytokineKitIL-2,IL-4,IL-5,IL-6,TNF,IFN-y

560485MouseTh1/Th2/Th17CytokineKitIL-2,IL-4,IL-6.IFN-Y.TNF.IL-17A,IL-10

551287MouseTh1/Th2CytokineKitIL-2,IL-4,IL-5,IFN-y.TNF

552364MouseInflammationKitIL-6,IL-10.MCP-1,IFN-y.TNF.IL-12p70

HeavyandlightchainisotypesofmouselgG1,

550026MouseImmunoglobulinIsotypingKit

lgG2a,lgG2b.lgG3,IgA.IgM.andIgE

560484HumanTh1/Th2/Th17KitIL-2,IL-4,IL-6,IL-10,TNF,IFN-y,IL-17A

550749HumanTh1/Th2CytokineKitIL-2,IL-4,IL-5,IL-10,TNF.IFN-g

551809HumanTh1/Th2CytokineKitIIIL-2,IL-4,IL-6.IL-10,TNF,IFN-g

551811HumanInflammatoryCytokineKitIL-8,IL-1P,IL-6,IL-10,TNF,IL-12p70

552990HumanChemokineKitIL-8,RANTES,MIG.MCP-1.IP-10

3、CBAFlexSet信號轉導指標

PhosphoAkt1(S473)PhosphoAkt2(S474)

PhosphoBLNK(Y84)Phosphop120Cat?nin(Y228)

PhosphoBtk(Y551)PhosphoMEK1/2(S222)

PhosphoeNOS(S1177)PhosphoPaxillin(Y118)

PhosphoERK1/2(T202/Y204)PhosphoPyk2(Y402)

PhosphoItk(Y511)PhosphoSLP-76(Y145)

PhosphoJNK1/2(T183/Y185)Phosphoc-jun(S63)

Phosphop38(T180/Y182)Phosphostat3

PhosphoPLCg(Y783)