pcr培訓考試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR的中文名稱是（）A.聚合酶鏈反應B.基因克隆技術C.核酸雜交技術D.基因測序技術答案：A2.PCR反應體系中，起模板作用的是（）A.dNTPB.引物C.模板DNAD.Taq酶答案：C3.Taq酶的作用是（）A.合成引物B.提供能量C.催化DNA合成D.解開DNA雙鏈答案：C4.PCR反應中，引物的作用是（）A.起始DNA合成B.終止DNA合成C.穩定DNA結構D.提供反應底物答案：A5.以下哪種物質不是PCR反應的基本成分（）A.Mg2?B.蛋白酶C.模板D.引物答案：B6.PCR反應的變性溫度一般是（）A.90-95℃B.50-60℃C.70-75℃D.30-40℃答案：A7.PCR反應的退火溫度主要取決于（）A.模板長度B.引物的Tm值C.Taq酶活性D.dNTP濃度答案：B8.PCR反應中延伸溫度一般為（）A.72℃B.94℃C.55℃D.37℃答案：A9.進行PCR反應時，循環次數一般為（）A.1-5次B.10-15次C.20-30次D.50-60次答案：C10.在PCR反應中，引物濃度過高可能導致（）A.產量增加B.非特異性擴增C.反應速度加快D.提高特異性答案：B二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術的應用包括（）A.基因克隆B.遺傳病診斷C.法醫鑒定D.腫瘤研究答案：ABCD2.影響PCR反應的因素有（）A.模板質量B.引物設計C.Taq酶活性D.dNTP濃度答案：ABCD3.以下關于引物設計的原則正確的是（）A.長度合適B.避免二級結構C.特異性強D.GC含量適中答案：ABCD4.PCR反應的污染來源可能有（）A.標本間交叉污染B.試劑污染C.擴增產物污染D.實驗室氣溶膠污染答案：ABCD5.在PCR反應中，Mg2?的作用包括（）A.影響Taq酶活性B.影響引物退火C.影響產物特異性D.參與dNTP磷酸基團轉移答案：ABC6.以下屬于PCR衍生技術的是（）A.反轉錄PCRB.實時熒光定量PCRC.巢式PCRD.多重PCR答案：ABCD7.實時熒光定量PCR的優點包括（）A.定量準確B.靈敏度高C.可檢測低拷貝數基因D.可實時監測反應進程答案：ABCD8.巢式PCR的特點有（）A.提高特異性B.增加靈敏度C.需要兩對引物D.反應時間長答案：ABC9.多重PCR可以（）A.同時擴增多個基因片段B.節省時間和樣品C.提高檢測效率D.降低成本答案：ABC10.PCR反應中，防止污染的措施有（）A.嚴格分區操作B.使用一次性耗材C.反應后產物及時處理D.規范操作流程答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應可以無限循環，以獲得更多產物。（）答案：錯誤2.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應。（）答案：錯誤3.引物的3'端可以隨意設計。（）答案：錯誤4.提高退火溫度一定能提高PCR特異性。（）答案：錯誤5.PCR反應中，dNTP濃度越高越好。（）答案：錯誤6.只要有模板和引物，PCR反應就能成功。（）答案：錯誤7.實時熒光定量PCR只能用于定量檢測。（）答案：錯誤8.巢式PCR的第一對引物和第二對引物可以隨意設計。（）答案：錯誤9.多重PCR對引物設計要求不高。（）答案：錯誤10.PCR反應中，Taq酶不需要鎂離子激活。（）答案：錯誤四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應的基本原理。答案：PCR反應是一種體外模擬體內DNA復制過程的技術。以DNA為模板，在Taq酶的作用下，以dNTP為原料，按照堿基互補配對原則，在引物的引導下，經過變性（使模板DNA雙鏈解開）、退火（引物與模板結合）、延伸（合成新的DNA鏈）三個步驟的循環，使目的DNA片段得到大量擴增。2.簡述引物設計的主要注意事項。答案：引物長度一般為18-30bp；避免引物自身形成二級結構；引物間不能互補；引物3'端要嚴格配對；GC含量在40%-60%；特異性要強，與非目的序列不能有較多互補。3.說明PCR反應中污染的主要類型及防止污染的關鍵措施。答案：污染類型主要有標本間交叉污染、試劑污染、擴增產物污染、實驗室氣溶膠污染。關鍵措施包括嚴格分區操作、使用一次性耗材、反應后產物及時處理、規范操作流程等。4.簡述實時熒光定量PCR相對普通PCR的優勢。答案：實時熒光定量PCR可實時監測反應進程；定量準確；靈敏度高；能檢測低拷貝數基因，而普通PCR主要是定性檢測，在定量和靈敏度方面相對較差。五、討論題（每題5分，共4題）1.如何優化PCR反應條件以提高特異性？答案：可提高退火溫度，使其接近引物的Tm值；優化引物設計，保證引物特異性；降低引物濃度；調整Mg2?濃度；減少循環次數等。2.在PCR實驗中，如何保證模板的質量？答案：選擇合適的樣本采集方法；及時處理樣本防止降解；正確提取和純化模板DNA，去除雜質和抑制物。3.討論巢式PCR在實際應用中的意義。答案：巢式PCR提高了特異性和靈敏度，可用于檢測低拷貝數的目的基因，在病原體檢測、