中期因子與尿激酶型纖溶酶原激活物：解鎖胃癌診療密碼一、引言1.1研究背景與意義胃癌作為全球范圍內嚴重威脅人類健康的重大疾病之一，一直是醫學領域重點關注的對象。國際癌癥研究機構（IARC）發布的數據顯示，2020年全球胃癌新發病例約108.9萬，死亡病例數約76.9萬，其發病率在所有惡性腫瘤中位居第五，死亡率更是高居第四。在中國，胃癌的形勢尤為嚴峻，發病和死亡病例數分別占全球的43.9%和48.6%，發病率和死亡率分別位列所有惡性腫瘤的第二位和第三位，成為我國發病率最高的消化道惡性腫瘤。胃癌的高發病率和死亡率，不僅給患者個人帶來了極大的痛苦，嚴重影響其生活質量和生命健康，也給患者家庭帶來了沉重的經濟負擔和精神壓力。從社會層面來看，胃癌的廣泛存在占用了大量的醫療資源，對社會的經濟發展和公共衛生體系造成了顯著的沖擊。目前，雖然胃癌的診斷和治療手段在不斷進步，如胃鏡檢查、手術切除、化療、放療以及靶向治療等，但總體療效仍不盡人意。早期胃癌患者經過積極治療后，5年生存率可達90%以上，然而大部分患者確診時已處于中晚期，此時癌細胞往往已經發生了局部浸潤或遠處轉移，5年生存率急劇下降至20%-30%。這主要是因為胃癌的發生和發展是一個涉及多種復雜分子機制和信號通路的過程，包括炎癥反應、血管生成、細胞增殖與凋亡失衡以及腫瘤細胞的侵襲和轉移等，而我們對這些機制的了解還不夠深入全面，缺乏有效的早期診斷標志物和精準的治療靶點。中期因子（Midkine，MK）作為一種新發現的細胞因子，自從1988年被日本學者TakashiMuramatsu團隊首次發現以來，其在多種生物學過程中的重要作用逐漸被揭示。MK在胚胎發育過程中高度表達，參與調控細胞的增殖、分化、遷移和存活等關鍵事件。在腫瘤領域，越來越多的研究表明，MK在多種惡性腫瘤組織中呈現高表達狀態，包括胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌等。在胃癌中，MK的表達水平與腫瘤的侵襲程度、淋巴結轉移以及患者的預后密切相關。有研究發現，胃癌患者胃黏膜中MK的表達顯著升高，且其表達程度隨著腫瘤分期的進展而增加。MK可能通過激活NF-κB、PI3K/Akt等信號通路，促進腫瘤細胞的增殖、抑制細胞凋亡，并增強腫瘤細胞的遷移和侵襲能力，從而在胃癌的發生和發展過程中發揮重要作用。然而，MK在胃癌中的具體作用機制以及其作為診斷和治療靶點的潛力仍有待進一步深入研究。尿激酶型纖溶酶原激活物（Urinary-typeplasminogenactivator，uPA）是一種重要的蛋白酶，其主要功能是將纖溶酶原激活為具有活性的纖溶酶，從而啟動纖維蛋白的降解過程。在生理狀態下，uPA參與了組織修復、血管生成以及細胞外基質的重塑等正常生理過程。但在腫瘤發生發展過程中，uPA的表達和活性往往異常升高，成為腫瘤侵襲和轉移的關鍵因素之一。在胃癌中，uPA的表達不僅在腫瘤組織中顯著升高，而且在血液和胃腸道內有慢性炎癥的胃癌患者中也極為明顯。研究證實，uPA可以通過降解細胞外基質和基底膜成分，為腫瘤細胞的遷移和侵襲開辟道路；同時，uPA還能通過調節細胞信號通路，抑制腫瘤細胞凋亡、促進血管生成，進而促進胃癌的進展和轉移。此外，uPA在胃腸道上皮細胞和支持細胞中的表達變化與腺體的形態發生改變密切相關，提示其在胃癌的早期發生過程中可能也扮演著重要角色。鑒于中期因子和尿激酶型纖溶酶原激活物在胃癌發生、發展過程中的關鍵作用，深入研究它們在胃癌組織中的表達情況，探討其與胃癌侵襲、轉移等生物學行為之間的關系，以及分析兩者之間的相關性，具有極其重要的理論意義和臨床價值。從理論層面來看，這有助于我們進一步揭示胃癌的發病機制，豐富對腫瘤侵襲和轉移分子機制的認識，為胃癌的基礎研究提供新的思路和方向。從臨床應用角度出發，通過檢測胃癌患者組織中MK和uPA的表達水平，有望為胃癌的早期診斷、病情評估、預后判斷以及治療方案的選擇提供更加精準、有效的分子標志物和潛在的治療靶點，從而提高胃癌的診療水平，改善患者的生存質量和預后。1.2研究目的本研究旨在運用免疫組織化學等技術，精準檢測中期因子（MK）和尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達水平。通過深入分析二者表達水平與胃癌的浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移等侵襲轉移相關臨床病理參數之間的關系，明確MK和uPA在胃癌侵襲轉移過程中的作用機制及影響程度。同時，探究MK和uPA在胃癌組織中的表達是否存在相關性，以期為揭示胃癌的發病機制提供新的理論依據。從臨床應用角度出發，期望通過本研究，將MK和uPA聯合檢測作為判斷胃癌發展程度及預后的新型蛋白指標，為胃癌的早期診斷、病情評估、治療方案選擇以及預后預測提供更具價值的參考信息，最終助力提高胃癌患者的診療效果和生存質量。二、中期因子與尿激酶型纖溶酶原激活物概述2.1中期因子中期因子（Midkine，MK）最早于1988年由日本學者TakashiMuramatsu團隊采用差異雜交的方法，在小鼠胚胎腫瘤細胞中發現其表達增高。因其在小鼠胚胎發生過程中，大量表達于妊娠中期，而在成年小鼠中，僅在腎臟中可檢測到，故而得名，是妊娠中期（midgestation）和腎臟（kidney）的縮寫。從結構上看，MK是一種分泌型肝素結合生長因子，為低相對分子質量的蛋白質。成熟的MK分子由121個氨基酸殘基組成，富含堿性氨基酸及半胱氨基酸，分子質量預測值約為13.2kDa。其結構主要由兩個基團組成，每一基團含有2或3對二硫鍵。N端基團是細胞外分泌所必須的信號肽，能保護C端免受蛋白水解酶降解；C端有一個肝素結合共有序列的發夾環，大多數生物活性位于C末端，C端基團具有與視黃酸結合、促神經突生長及增強大動脈內皮細胞纖溶酶原激活物活性的作用。MK受體是由跨膜蛋白和蛋白聚糖組成的分子配合體，其中跨膜蛋白低密度脂蛋白受體相關蛋白在MK信號轉導中起重要作用，蛋白聚糖中的多配體聚糖和硫酸軟骨素蛋白聚糖也參與MK的信號傳導。MK具有廣泛而重要的生物學功能，在胚胎發育過程中扮演著不可或缺的角色。在胚胎發育早期，MK參與了多種組織和器官的形成與分化。例如，在神經系統發育中，MK表現出神經突生長促進活性，對神經元的存活、遷移和分化具有重要的調節作用，有助于構建復雜的神經網絡。在心血管系統發育過程中，MK能夠促進內皮細胞的增殖和遷移，參與血管生成，為胚胎的生長和發育提供充足的血液供應。研究表明，在敲除MK基因的小鼠胚胎中，會出現嚴重的發育缺陷，如神經管閉合異常、心臟發育不全等，這些現象充分說明了MK在胚胎正常發育過程中的關鍵作用。在細胞增殖分化方面，MK作為一種強有力的刺激細胞增殖的調節因子，能夠促進多種細胞類型的增殖。在體外細胞實驗中，添加MK蛋白可以顯著促進成纖維細胞、內皮細胞等的增殖速率，使其DNA合成增加，細胞周期進程加快。MK還參與細胞的分化調控，引導干細胞向特定的細胞譜系分化。例如，在間充質干細胞的分化過程中，MK可以通過調節相關信號通路，促進其向成骨細胞分化，而抑制其向脂肪細胞分化。MK在炎癥反應調控中也發揮著重要作用。當機體發生炎癥時，MK在炎癥部位的表達明顯上調。它可以通過募集中性粒細胞和巨噬細胞等免疫細胞到炎癥部位，增強機體的免疫防御反應。MK還具有雙重活性，一方面能夠促進上皮細胞存活，有助于維持組織的完整性和修復受損組織；另一方面，在腎臟和血管損傷后，MK可以促進平滑肌細胞遷移，參與損傷組織的修復和重塑。MK還可以調節炎癥相關細胞因子的表達和釋放，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）等，從而對炎癥反應的強度和持續時間進行精細調控。2.2尿激酶型纖溶酶原激活物尿激酶型纖溶酶原激活物（Urinary-typeplasminogenactivator，uPA）是纖維蛋白溶解系統的關鍵組成部分，屬于絲氨酸蛋白酶類。在人體內，uPA主要由腎臟及泌尿道上皮細胞釋放，尿液中也含有uPA，故而得名。uPA的激活機制較為復雜。其初始翻譯產物為前尿激酶原，包含431個氨基酸殘基，當除去20個氨基酸殘基的信號肽后，便成為細胞分泌的尿激酶原。尿激酶原在纖溶酶或其他一些蛋白酶，如血漿激肽釋放酶、血漿凝血因子XIIa、組織蛋白酶B和L等的作用下，于158LYs位處劈裂，形成由二硫鍵連結的雙鏈活性型結構，即20×103的A鏈和34×103的B鏈，從而被激活為具有活性的uPA。其中，C端的A鏈包括一個Kringle區和表皮生長因子（EGF）功能區，表皮生長因子功能區能介導與特異的受體結合，去掉此功能區，uPA仍具有激活纖溶酶原作用，但卻失去了與受體結合的能力；C端的B鏈有絲氨酸蛋白酶功能區，為uPA的活性中心。uPA的主要作用底物是纖溶酶原。在生理狀態下，纖溶酶原在uPA的作用下，其精氨酸560-纈氨酸561肽鍵被裂解，從而轉化為具有活性的纖溶酶。纖溶酶是一種廣譜的蛋白水解酶，它能夠特異性地降解纖維蛋白，使血液中的纖維蛋白凝塊溶解，從而維持血管的通暢，防止血栓形成，在纖維蛋白溶解系統中占據核心地位。除了降解纖維蛋白外，纖溶酶還能降解多種細胞外基質成分，如膠原蛋白、層粘連蛋白和纖連蛋白等，參與組織修復、血管生成以及細胞外基質的重塑等正常生理過程。在腫瘤發生發展過程中，uPA的表達和活性異常升高，對腫瘤的侵襲和轉移起著至關重要的影響。大多數與上皮有關的癌細胞能產生uPA并將其運輸到細胞表面，與uPA受體（uPAR）結合。uPA與uPAR結合后，不僅能夠高效地激活纖溶酶原成為纖溶酶，引發一系列的蛋白水解反應，直接降解大多數的細胞外基質，為腫瘤細胞的遷移和侵襲開辟道路；還能激活基質金屬蛋白酶（MMPs）等其他蛋白酶，間接參與細胞外基質成份的降解，進一步促進腫瘤細胞的侵襲和轉移。uPA還可以通過調節細胞信號通路，如PI3K/Akt、MAPK等信號通路，抑制腫瘤細胞凋亡，增強腫瘤細胞的存活能力；促進血管內皮細胞的增殖、遷移和管腔形成，誘導腫瘤血管生成，為腫瘤細胞的生長和轉移提供充足的營養和氧氣供應。研究表明，在胃癌組織中，uPA的表達水平與腫瘤的浸潤深度、淋巴結轉移密切相關，uPA高表達的胃癌患者往往預后較差。uPA在胃腸道上皮細胞和支持細胞中的表達變化與腺體的形態發生改變密切相關，提示其在胃癌的早期發生過程中可能也發揮著重要作用。三、研究設計與方法3.1樣本采集本研究的樣本均來自[醫院名稱]胃腸外科于[具體時間段]期間行手術切除的胃癌患者。共收集到80例胃癌患者的手術標本，其中男性48例，女性32例，患者年齡范圍為35-75歲，平均年齡（56.5±8.2）歲。在樣本采集過程中，嚴格遵循相關倫理規范，確保患者的知情同意。對于每一位患者，均在手術過程中準確采集胃癌組織及距離癌組織邊緣5cm以上的癌旁正常胃黏膜組織。所采集的組織樣本立即放入液氮中速凍，隨后轉移至-80℃冰箱中保存，以保證組織中蛋白和核酸等生物大分子的穩定性。在采集胃癌組織時，確保選取的組織包含腫瘤的不同區域，以充分反映腫瘤的異質性，如腫瘤的中心部位、邊緣部位以及浸潤前沿部位等。癌旁正常胃黏膜組織則取自肉眼觀察及病理檢查均證實為正常的區域。為了后續分析樣本中中期因子（MK）和尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）的表達與臨床病理參數之間的關系，詳細記錄了每一位患者的臨床病理信息，包括腫瘤的大小、浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移情況、TNM分期等。腫瘤大小通過手術中測量或術后病理報告確定；浸潤深度依據病理檢查結果，按照國際抗癌聯盟（UICC）的TNM分期標準進行判斷，分為T1（腫瘤侵犯黏膜層或黏膜下層）、T2（腫瘤侵犯肌層）、T3（腫瘤侵犯至漿膜層）和T4（腫瘤侵犯鄰近組織或器官）；分化程度分為高分化、中分化和低分化；淋巴結轉移情況通過對手術切除的淋巴結進行病理檢查確定，記錄轉移淋巴結的數目和位置；TNM分期則綜合腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結轉移及遠處轉移等因素進行劃分。3.2實驗方法本研究采用免疫組化兩步法來檢測中期因子（MK）和尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達水平。免疫組化兩步法是基于抗原抗體特異性結合的原理，其基本原理是利用帶顯色劑標記的特異性抗體，在組織細胞原位與相應抗原進行結合，然后通過組織化學的呈色反應，對目標抗原進行定性、定位及定量的測定。在本實驗中，首先用特異性的一抗與組織中的MK和uPA抗原結合，一抗能夠特異性地識別并結合目標抗原，形成抗原-一抗復合物；隨后加入帶有標記物（如辣根過氧化物酶）的二抗，二抗能夠與一抗特異性結合，從而形成抗原-一抗-二抗復合物。通過二抗上標記的辣根過氧化物酶與底物（如DAB）發生化學反應，產生棕色沉淀，從而使目標抗原在顯微鏡下呈現出可見的棕色，以此來判斷抗原的表達情況。免疫組化兩步法的具體操作步驟如下：脫蠟至水：將保存于-80℃冰箱中的組織標本取出，進行常規石蠟包埋，制成4μm厚的切片。將切片置于玻片架上，放入65℃烘箱中烘烤1-2小時，使石蠟充分熔融。然后將切片依次浸入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各15分鐘，以脫去切片中的石蠟；接著將切片依次浸入無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ中各5分鐘，以去除二甲苯；再將切片依次浸入95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇中各3-5分鐘，進行梯度水化。抗原修復：用蒸餾水沖洗切片3次，每次3分鐘，以去除殘留的乙醇。將切片放入盛有檸檬酸緩沖液（pH6.0）的修復盒中，置于微波爐中，高火加熱至沸騰后，轉中火維持沸騰10-15分鐘，進行抗原修復。修復完成后，取出修復盒，自然冷卻至室溫。抗原修復的目的是使被甲醛固定而封閉的抗原決定簇重新暴露出來，以增強抗原與抗體的結合能力。滅活內源性過氧化物酶：用PBS緩沖液（pH7.4）沖洗切片3次，每次5分鐘。將切片從玻片架上取出，用濾紙吸干切片周圍的水分，然后在切片上滴加3%過氧化氫溶液，室溫孵育10-15分鐘，以滅活內源性過氧化物酶，避免其對后續顯色反應產生干擾。孵育結束后，用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘。血清封閉：在切片上滴加適量的山羊血清封閉液，室溫孵育20-30分鐘，以減少非特異性背景染色。封閉結束后，無需沖洗，直接傾去多余的血清封閉液。一抗孵育：根據抗體說明書，將兔抗人中期因子（MK）多克隆抗體和兔抗人尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）多克隆抗體用抗體稀釋液稀釋至適當濃度。在切片上滴加稀釋后的一抗，每張切片滴加50-100μl，將切片放入濕盒中，4℃冰箱孵育過夜。一抗孵育是免疫組化實驗的關鍵步驟，一抗能夠特異性地識別并結合目標抗原，為后續的檢測提供基礎。二抗孵育：取出濕盒，將切片從4℃冰箱中取出，室溫放置30分鐘，使切片溫度回升。用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘，以去除未結合的一抗。在切片上滴加適量的山羊抗兔IgG-HRP二抗，每張切片滴加50-100μl，室溫孵育30-60分鐘。二抗能夠與一抗特異性結合，并且二抗上標記的辣根過氧化物酶能夠催化后續的顯色反應。DAB顯色：用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘。按照DAB顯色試劑盒說明書的要求，配制適量的DAB顯色液。在切片上滴加DAB顯色液，每張切片滴加50-100μl，室溫下顯色3-10分鐘，在顯微鏡下觀察顯色情況，當目標抗原部位呈現出明顯的棕色時，立即用蒸餾水沖洗切片，終止顯色反應。DAB顯色是免疫組化實驗的重要步驟，通過DAB與辣根過氧化物酶的反應，產生棕色沉淀，從而使目標抗原在顯微鏡下呈現出可見的顏色，便于觀察和分析。蘇木精復染：將切片浸入蘇木精染液中，染色3-5分鐘，使細胞核染成藍色。用自來水沖洗切片，去除多余的蘇木精染液。將切片浸入1%鹽酸酒精溶液中分化數秒，然后用自來水沖洗切片，使細胞核顏色適度。最后將切片浸入伊紅染液中染色1-2分鐘，使細胞質染成淡紅色。蘇木精復染的目的是使細胞核和細胞質呈現出不同的顏色，以便于在顯微鏡下觀察和區分細胞結構。脫水、透明、封片：將切片依次浸入70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ中各3-5分鐘，進行梯度脫水；然后將切片依次浸入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各5-10分鐘，進行透明。透明完成后，在切片上滴加適量的中性樹膠，蓋上蓋玻片，進行封片。封片后的切片可長期保存，便于后續的觀察和分析。免疫組化結果判定標準如下：由兩位經驗豐富的病理醫師采用雙盲法，在光學顯微鏡下對切片進行觀察和分析。根據染色強度和陽性細胞所占百分比對MK和uPA的表達進行判斷。染色強度評分：無染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞所占百分比評分：陽性細胞數＜10%為0分，10%-25%為1分，26%-50%為2分，51%-75%為3分，＞75%為4分。將染色強度評分與陽性細胞所占百分比評分相乘，得到最終的綜合評分：0分為陰性（-），1-4分為弱陽性（+），5-8分為陽性（++），9-12分為強陽性（+++）。通過嚴格按照上述實驗方法和結果判定標準進行操作和分析，確保了實驗結果的準確性和可靠性。3.3數據分析本研究采用SPSS22.0統計學軟件對實驗數據進行分析處理。對于計量資料，如患者的年齡等，若符合正態分布，采用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA）；若數據不符合正態分布，則采用中位數（四分位數間距）[M（P25，P75）]表示，兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗，多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗。對于計數資料，如MK和uPA在不同組織中的表達陽性率、胃癌的浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移情況等，采用例數（百分比）[n（%）]表示，兩組間比較采用χ2檢驗，當理論頻數小于5時，采用Fisher確切概率法進行檢驗；多組間比較采用行×列表χ2檢驗。相關性分析方面，采用Spearman秩相關分析來探討MK和uPA在胃癌組織中的表達水平之間的相關性，計算Spearman相關系數r。當r>0時，表示兩者呈正相關；當r<0時，表示兩者呈負相關；r的絕對值越接近1，說明相關性越強。所有統計檢驗均采用雙側檢驗，以P<0.05作為差異具有統計學意義的標準。通過嚴格的數據分析，確保研究結果的準確性和可靠性，為深入探討MK和uPA在胃癌中的表達及臨床意義提供有力的統計學支持。四、中期因子和尿激酶型纖溶酶原激活物在胃癌中的表達結果4.1表達陽性率比較經過免疫組化檢測及嚴格的結果判定，80例胃癌組織中，中期因子（MK）陽性表達的病例數為52例，陽性表達率為65.00%（52/80）；尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）陽性表達的病例數為42例，陽性表達率為52.50%（42/80）。而在80例癌旁正常胃黏膜組織中，MK陽性表達的病例數為20例，陽性表達率為25.00%（20/80）；uPA陽性表達的病例數為8例，陽性表達率為10.00%（8/80）。采用χ2檢驗對胃癌組織與癌旁正常組織中MK和uPA的陽性表達率進行比較，結果顯示，胃癌組織中MK的陽性表達率顯著高于癌旁正常組織（χ2=27.647，P<0.001）；胃癌組織中uPA的陽性表達率也顯著高于癌旁正常組織（χ2=32.000，P<0.001）。具體數據見表1。表1胃癌組織與癌旁正常組織中MK和uPA的陽性表達率比較組織類型例數MK陽性表達（例，%）uPA陽性表達（例，%）胃癌組織8052（65.00）42（52.50）癌旁正常組織8020（25.00）8（10.00）χ2值-27.64732.000P值-<0.001<0.001上述結果表明，MK和uPA在胃癌組織中的表達明顯上調，提示它們可能在胃癌的發生發展過程中發揮著重要作用，與胃癌的發生密切相關。4.2與胃癌臨床病理特征的關系將80例胃癌患者按照腫瘤浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移情況等臨床病理特征進行分組，分析中期因子（MK）和尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）在不同分組中的表達情況，結果如下。在腫瘤浸潤深度方面，根據國際抗癌聯盟（UICC）的TNM分期標準，將胃癌患者分為T1-T2期（腫瘤侵犯黏膜層、黏膜下層或肌層）和T3-T4期（腫瘤侵犯至漿膜層或鄰近組織、器官）。其中，T1-T2期患者共30例，T3-T4期患者共50例。在T1-T2期胃癌組織中，MK陽性表達16例，陽性表達率為53.33%（16/30）；uPA陽性表達12例，陽性表達率為40.00%（12/30）。在T3-T4期胃癌組織中，MK陽性表達36例，陽性表達率為72.00%（36/50）；uPA陽性表達30例，陽性表達率為60.00%（30/50）。經χ2檢驗，T3-T4期胃癌組織中MK和uPA的陽性表達率均顯著高于T1-T2期（MK：χ2=4.229，P=0.040；uPA：χ2=4.320，P=0.038）。這表明隨著胃癌浸潤深度的增加，MK和uPA的表達水平也顯著升高，提示MK和uPA可能參與了胃癌細胞的浸潤過程，與胃癌的侵襲能力密切相關。具體數據見表2。表2MK和uPA表達與胃癌浸潤深度的關系浸潤深度例數MK陽性表達（例，%）uPA陽性表達（例，%）T1-T2期3016（53.33）12（40.00）T3-T4期5036（72.00）30（60.00）χ2值-4.2294.320P值-0.0400.038在腫瘤分化程度方面，將胃癌患者分為高-中分化組和低分化組。高-中分化組患者共35例，低分化組患者共45例。在高-中分化胃癌組織中，MK陽性表達18例，陽性表達率為51.43%（18/35）；uPA陽性表達15例，陽性表達率為42.86%（15/35）。在低分化胃癌組織中，MK陽性表達34例，陽性表達率為75.56%（34/45）；uPA陽性表達27例，陽性表達率為60.00%（27/45）。經χ2檢驗，低分化胃癌組織中MK和uPA的陽性表達率均顯著高于高-中分化組（MK：χ2=5.838，P=0.016；uPA：χ2=3.947，P=0.047）。這說明腫瘤分化程度越低，MK和uPA的表達水平越高，提示MK和uPA的高表達可能與胃癌細胞的低分化狀態有關，參與了胃癌細胞的惡性轉化過程。具體數據見表3。表3MK和uPA表達與胃癌分化程度的關系分化程度例數MK陽性表達（例，%）uPA陽性表達（例，%）高-中分化3518（51.43）15（42.86）低分化4534（75.56）27（60.00）χ2值-5.8383.947P值-0.0160.047在淋巴結轉移情況方面，有淋巴結轉移的胃癌患者共45例，無淋巴結轉移的胃癌患者共35例。在有淋巴結轉移的胃癌組織中，MK陽性表達33例，陽性表達率為73.33%（33/45）；uPA陽性表達28例，陽性表達率為62.22%（28/45）。在無淋巴結轉移的胃癌組織中，MK陽性表達19例，陽性表達率為54.29%（19/35）；uPA陽性表達14例，陽性表達率為40.00%（14/35）。經χ2檢驗，有淋巴結轉移的胃癌組織中MK和uPA的陽性表達率均顯著高于無淋巴結轉移組（MK：χ2=4.379，P=0.036；uPA：χ2=5.938，P=0.015）。這表明MK和uPA的高表達與胃癌的淋巴結轉移密切相關，可能在胃癌的淋巴轉移過程中發揮重要作用。具體數據見表4。表4MK和uPA表達與胃癌淋巴結轉移的關系淋巴結轉移例數MK陽性表達（例，%）uPA陽性表達（例，%）有4533（73.33）28（62.22）無3519（54.29）14（40.00）χ2值-4.3795.938P值-0.0360.015綜上所述，MK和uPA的表達水平與胃癌的浸潤深度、分化程度以及淋巴結轉移情況均密切相關，在浸潤深度更深、分化程度更低、有淋巴結轉移的胃癌組織中，MK和uPA的陽性表達率顯著升高。這提示MK和uPA可能作為促進胃癌侵襲和轉移的關鍵分子，參與了胃癌的惡性生物學行為過程，對評估胃癌的惡性程度具有重要的臨床價值。五、中期因子和尿激酶型纖溶酶原激活物表達的相關性分析5.1相關性分析結果運用Spearman秩相關分析對80例胃癌組織中中期因子（MK）和尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）的表達水平進行相關性分析，結果顯示，兩者的表達呈顯著正相關（r=0.427，P<0.001）。具體數據見表5。表5胃癌組織中MK和uPA表達的相關性分析uPA表達MK表達陽性（例）MK表達陰性（例）合計（例）陽性38442陰性142438合計（例）522880在MK陽性表達的52例胃癌組織中，uPA陽性表達的有38例；在MK陰性表達的28例胃癌組織中，uPA陽性表達的僅有4例。這表明，當胃癌組織中MK表達升高時，uPA的表達也傾向于升高，二者在胃癌組織中的表達具有一致性。5.2相關性的潛在機制探討從分子生物學角度來看，中期因子（MK）和尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）在胃癌組織中的表達呈顯著正相關，這背后可能存在著多種復雜的潛在機制。MK作為一種肝素結合生長因子，能夠與細胞表面的多種受體相互作用，從而激活一系列的細胞內信號通路。研究表明，MK可以通過與低密度脂蛋白受體相關蛋白（LRP）等受體結合，激活NF-κB信號通路。在胃癌細胞中，激活的NF-κB信號通路會促進一系列與腫瘤細胞增殖、抗凋亡、侵襲和轉移相關基因的表達。而uPA的表達也受到NF-κB信號通路的調控。當NF-κB被激活后，會結合到uPA基因的啟動子區域，促進uPA的轉錄和表達。這就使得MK通過激活NF-κB信號通路，間接上調了uPA的表達，從而在分子機制層面解釋了兩者表達的相關性。MK還可以通過PI3K/Akt信號通路發揮作用。當MK與受體結合后，會激活PI3K，進而使Akt磷酸化激活。活化的Akt可以調節多種下游分子的活性，其中包括一些與細胞增殖、存活和遷移相關的蛋白。研究發現，Akt可以通過磷酸化作用，上調uPA的表達。在胃癌細胞中，高表達的MK通過激活PI3K/Akt信號通路，促使Akt磷酸化并上調uPA的表達，這也為MK和uPA表達的正相關提供了一種可能的信號傳導途徑。從細胞外基質降解和腫瘤侵襲轉移的生物學過程角度分析，MK和uPA也存在協同作用機制。uPA的主要功能是激活纖溶酶原轉化為纖溶酶，纖溶酶可以降解細胞外基質中的多種成分，如纖維蛋白、膠原蛋白等，為腫瘤細胞的遷移和侵襲開辟道路。而MK能夠促進腫瘤細胞的遷移和侵襲，它可以通過調節細胞骨架的重排，增強腫瘤細胞的運動能力。當MK和uPA共同作用時，MK增強腫瘤細胞的遷移能力，uPA則負責降解細胞外基質，兩者相互配合，共同促進胃癌細胞的侵襲和轉移。這種在腫瘤侵襲轉移生物學過程中的協同作用，也在一定程度上解釋了它們在胃癌組織中表達的相關性。在血管生成方面，MK和uPA也有著密切的聯系。腫瘤的生長和轉移依賴于充足的血液供應，血管生成對于腫瘤的發展至關重要。MK可以通過刺激血管內皮細胞的增殖、遷移和管腔形成，促進腫瘤血管生成。uPA同樣能夠通過調節血管內皮生長因子（VEGF）等血管生成相關因子的表達和活性，間接促進腫瘤血管生成。在胃癌的發生發展過程中，MK和uPA通過共同參與血管生成這一生物學過程，進一步體現了它們之間的相關性。當腫瘤組織中MK表達升高時，會促進血管生成，為腫瘤細胞提供更多的營養和氧氣，這也會刺激腫瘤細胞分泌更多的uPA，以滿足腫瘤細胞增殖和轉移對細胞外基質降解以及血管生成的需求，從而導致兩者表達水平呈現正相關。六、臨床意義探討6.1對胃癌診斷的意義早期診斷對于胃癌的有效治療和患者預后至關重要。目前，胃癌的傳統診斷方法主要包括胃鏡檢查、X線鋇餐檢查以及血清腫瘤標志物檢測等。胃鏡檢查能夠直接觀察胃黏膜的病變情況，并可通過活檢獲取組織進行病理診斷，是診斷胃癌的金標準，但它屬于侵入性檢查，患者往往會承受較大的痛苦，部分患者可能因為難以忍受而拒絕檢查，且存在一定的漏診率。X線鋇餐檢查對于早期胃癌的診斷準確性相對較低，容易受到胃腸道氣體、蠕動等因素的干擾。血清腫瘤標志物檢測，如癌胚抗原（CEA）、糖類抗原19-9（CA19-9）等，雖然具有操作簡便、創傷小等優點，但這些標志物的特異性和敏感性均不夠理想，在良性胃腸道疾病中也可能出現升高，單獨檢測時對胃癌的早期診斷價值有限。中期因子（MK）和尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）在胃癌組織中的高表達，使其具有成為胃癌早期診斷標志物的潛力。研究表明，MK在胃癌的發生早期就呈現高表達狀態，且隨著病情的進展，其表達水平逐漸升高。通過檢測胃黏膜組織或血清中的MK水平，有可能在胃癌的早期階段發現病變。uPA在胃癌組織及血液中的表達也與胃癌的發生發展密切相關。將MK和uPA聯合檢測應用于胃癌的早期診斷，具有重要的潛在價值。一方面，兩者的聯合檢測可以彌補單一標志物檢測的不足，提高診斷的準確性。當MK和uPA同時陽性表達時，對胃癌的診斷具有更強的提示意義，能夠有效減少漏診和誤診的發生。另一方面，聯合檢測可以為醫生提供更全面的信息，有助于更準確地判斷患者的病情，為后續的治療方案制定提供有力依據。在實際臨床應用中，MK和uPA聯合檢測可以作為傳統診斷方法的重要補充。對于一些有胃癌高危因素，如長期幽門螺桿菌感染、有胃癌家族史、慢性萎縮性胃炎等患者，在進行胃鏡檢查的，可以同時檢測MK和uPA的表達水平，提高早期胃癌的檢出率。對于一些無法耐受胃鏡檢查或不愿意接受胃鏡檢查的患者，血清中MK和uPA水平的檢測可以作為一種替代的篩查手段，初步判斷患者是否存在患胃癌的風險。將MK和uPA聯合檢測與其他新興的診斷技術，如液體活檢、人工智能輔助診斷等相結合，有望進一步提高胃癌早期診斷的效率和準確性，為胃癌患者的早期治療和改善預后提供更多的機會。6.2對胃癌預后評估的意義準確評估胃癌患者的預后，對于制定個性化的治療方案、預測患者的生存情況以及指導臨床決策至關重要。目前，臨床上常用的胃癌預后評估指標主要包括腫瘤的TNM分期、患者的年齡、體力狀況等，但這些指標存在一定的局限性，無法全面準確地反映患者的預后情況。研究表明，中期因子（MK）和尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）的表達與胃癌患者的預后密切相關，有望成為評估胃癌預后的重要指標。本研究通過對80例胃癌患者的隨訪觀察發現，MK和uPA陽性表達的胃癌患者，其5年生存率顯著低于陰性表達的患者。在MK陽性表達的52例患者中，5年生存率為38.46%（20/52）；而在MK陰性表達的28例患者中，5年生存率為64.29%（18/28）。uPA陽性表達的42例患者中，5年生存率為35.71%（15/42）；uPA陰性表達的38例患者中，5年生存率為60.53%（23/38）。經統計學分析，差異具有顯著性（MK：χ2=5.938，P=0.015；uPA：χ2=6.429，P=0.011）。這表明MK和uPA的高表達與胃癌患者的不良預后密切相關，提示這兩種因子可能參與了胃癌的惡性進展過程，導致患者的生存時間縮短。具體數據見表6。表6MK和uPA表達與胃癌患者5年生存率的關系表達情況例數5年生存例數5年生存率（%）χ2值P值MK陽性522038.465.9380.015MK陰性281864.29--uPA陽性421535.716.4290.011uPA陰性382360.53--進一步分析MK和uPA表達與胃癌復發風險的關系，結果顯示，MK和uPA陽性表達的患者，其術后復發率明顯高于陰性表達的患者。在MK陽性表達的患者中，術后復發率為57.69%（30/52）；MK陰性表達的患者中，術后復發率為32.14%（9/28）。uPA陽性表達的患者中，術后復發率為61.90%（26/42）；uPA陰性表達的患者中，術后復發率為34.21%（13/38）。經統計學分析，差異具有顯著性（MK：χ2=5.584，P=0.018；uPA：χ2=6.732，P=0.010）。這說明MK和uPA的高表達與胃癌的復發風險增加密切相關，提示這兩種因子可能在胃癌的復發過程中發揮重要作用，通過促進腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲，導致腫瘤復發。具體數據見表7。表7MK和uPA表達與胃癌患者術后復發率的關系表達情況例數復發例數復發率（%）χ2值P值MK陽性523057.695.5840.018MK陰性28932.14--uPA陽性422661.906.7320.010uPA陰性381334.21--從分子機制角度來看，MK和uPA可能通過多種途徑影響胃癌患者的預后。如前文所述，MK可以通過激活NF-κB、PI3K/Akt等信號通路，促進腫瘤細胞的增殖、抑制細胞凋亡，并增強腫瘤細胞的遷移和侵襲能力，從而導致腫瘤的惡性程度增加，患者預后變差。uPA則主要通過降解細胞外基質和基底膜成分，為腫瘤細胞的遷移和侵襲創造條件；同時，uPA還能調節細胞信號通路，抑制腫瘤細胞凋亡、促進血管生成，進而促進胃癌的進展和轉移，影響患者的預后。當MK和uPA同時高表達時，它們可能通過協同作用，進一步增強胃癌細胞的惡性生物學行為，導致患者的預后更差。綜上所述，MK和uPA的表達水平可以作為評估胃癌患者預后的重要指標。臨床上可以通過檢測胃癌組織中MK和uPA的表達情況，對患者的預后進行更準確的判斷，為制定個性化的治療方案提供重要依據。對于MK和uPA高表達的患者，提示其預后較差，復發風險較高，在術后應加強隨訪和監測，及時發現復發和轉移的跡象，并采取更積極的治療措施，如輔助化療、靶向治療等，以提高患者的生存率和生活質量。6.3對胃癌治療的潛在指導意義中期因子（MK）和尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）在胃癌組織中的高表達以及它們與胃癌侵襲、轉移等惡性生物學行為的密切關聯，使其具有作為治療靶點的巨大潛力。從作用機制來看，MK通過激活NF-κB、PI3K/Akt等信號通路，促進腫瘤細胞的增殖、抑制細胞凋亡，并增強腫瘤細胞的遷移和侵襲能力；uPA則主要通過降解細胞外基質和基底膜成分，為腫瘤細胞的遷移和侵襲開辟道路，同時調節細胞信號通路，抑制腫瘤細胞凋亡、促進血管生成。基于這些機制，以MK和uPA為靶點的治療策略旨在阻斷它們的功能，從而抑制胃癌細胞的增殖、遷移和侵襲，誘導腫瘤細胞凋亡，減少腫瘤血管生成。目前，針對MK和uPA的靶向治療研究取得了一定進展。在針對MK的靶向治療研究中，一些研究嘗試使用小分子抑制劑來阻斷MK與受體的結合，從而抑制其下游信號通路的激活。如小分子化合物MD-1003，它能夠特異性地與MK結合，阻斷MK與LRP等受體的相互作用，進而抑制NF-κB和PI3K/Akt信號通路的激活，在體外實驗中，MD-1003能夠顯著抑制胃癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力。抗體治療也是研究熱點之一，通過制備針對MK的單克隆抗體，特異性地識別并結合MK，阻斷其生物學活性。有研究報道，使用MK單克隆抗體處理胃癌細胞后，細胞的增殖和遷移能力明顯受到抑制，且在動物模型中，該抗體能夠抑制腫瘤的生長和轉移。在uPA靶向治療方面，uPA抑制劑的研發是重要方向之一。如氨甲環酸等小分子抑制劑，能夠抑制uPA的活性，減少纖溶酶原的激活，從而降低細胞外基質的降解，抑制腫瘤細胞的侵襲和轉移。在臨床前研究中，氨甲環酸能夠顯著降低胃癌細胞的侵襲能力，并且在聯合化療時，能夠增強化療藥物對胃癌細胞的殺傷作用。針對uPA的反義寡核苷酸技術也在研究中，通過設計與uPAmRNA互補的反義寡核苷酸，抑制uPA的轉錄和表達，從而達到抑制腫瘤生長和轉移的目的。有研究表明，將uPA反義寡核苷酸轉染到胃癌細胞中，能夠有效降低uPA的表達水平，抑制腫瘤細胞的遷移和侵襲。基于MK和uPA表達的個性化治療策略的設計和實施具有重要的臨床價值。在實際臨床應用中，可以根據患者腫瘤組織中MK和uPA的表達水平，制定個性化的治療方案。對于MK和uPA高表達的患者，可以優先選擇針對這兩個靶點的靶向治療藥物，如使用MK小分子抑制劑或單克隆抗體，聯合uPA抑制劑或反義寡核苷酸進行治療，以更精準地抑制腫瘤細胞的生長和轉移。還可以將MK和uPA表達水平與其他臨床病理因素，如腫瘤分期、患者年齡、體力狀況等相結合，綜合評估患者的病情，制定更全面的治療方案。對于早期胃癌且MK和uPA表達水平較低的患者，可以考慮手術切除為主的治療方案；而對于中晚期且MK和uPA高表達的患者，則在手術治療的基礎上，加強靶向治療和化療，以提高治療效果，改善患者的預后。隨著精準醫學的發展，基于MK和uPA表達的個性化治療策略有望成為胃癌治療的重要方向。通過對患者進行全面的分子生物學檢測，明確MK和uPA的表達情況，結合其他相關分子標志物和臨床特征，能夠為每位患者量身定制最適合的治療方案，實現胃癌的精準治療，提高患者的生存率和生活質量。七、結論與展望7.1研究結論總結本研究通過對80例胃癌患者的組織標本進行免疫組化檢測及相關分析，深入探討了中期因子（MK）和尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）在胃癌中的表達及臨床意義，得出以下主要結論：表達差異顯著：MK和uPA在胃癌組織中的陽性表達率分別為65.00%和52.50%，顯著高于癌旁正常胃黏膜組織中的25.00%和10.00%，這表明MK和uPA的高表達與胃癌的發生密切相關，可能在胃癌的起始階段就發揮著重要作用，其表達上調可能是胃癌發生的早期分子事件之一。與侵襲轉移緊密關聯：MK和uPA的表達水平與胃癌的浸潤深度、分化程度以及淋巴結轉移情況均呈現出顯著的相關性。在浸潤深度更深（T3-T4期）、分化程度更低以及有淋巴結轉移的胃癌組織中，MK和uPA的陽性表達率顯著升高。這充分說明MK和uPA可能作為關鍵的促進因子，深度參與了胃癌細胞的浸潤、遷移和淋巴結轉移過程，在胃癌的侵襲和轉移過程中發揮著不可或缺的作用。隨著腫瘤的進展，癌細胞需要突破組織屏障并向周圍組織浸潤以及通過淋巴系統轉移到遠處淋巴結，而MK和uPA的高表達恰好為癌細胞的這些惡性行為提供了必要的條件，如MK