TTC39Brs581080SNP：冠心病與缺血性腦卒中關(guān)聯(lián)的遺傳學(xué)解析一、引言1.1研究背景與意義1.1.1冠心病與缺血性腦卒中的現(xiàn)狀冠心病（CoronaryHeartDisease，CHD）和缺血性腦卒中（IschemicStroke，IS）作為心血管疾病和腦血管疾病的典型代表，在全球范圍內(nèi)均呈現(xiàn)出高發(fā)性和高危害性的特點(diǎn)，嚴(yán)重威脅著人類的健康。從全球范圍來看，冠心病的發(fā)病率和死亡率一直居高不下。世界衛(wèi)生組織（WHO）數(shù)據(jù)顯示，冠心病是全球范圍內(nèi)第一位致死、致殘?jiān)颉H2004年，冠心病導(dǎo)致全球范圍內(nèi)1700萬人死亡、1億5千多萬人致殘；到2008年，全球范圍內(nèi)有1730萬人死于冠心病，占全球總死亡人數(shù)的30%。而國家心血管病中心公布的《中國心血管病報(bào)告2013》表明，中國2012年心血管病（CVD）總?cè)藬?shù)2.9億，其中心肌梗死患者達(dá)250萬。若當(dāng)前CVD“流行”趨勢持續(xù)，到2030年，全球范圍內(nèi)將有2330萬人死于CVD。冠心病的主要病理生理機(jī)制是動(dòng)脈粥樣硬化，它使得冠狀動(dòng)脈管腔狹窄或阻塞，進(jìn)而導(dǎo)致心肌缺血、缺氧或壞死，引發(fā)心絞痛、心肌梗死等嚴(yán)重后果，極大地降低患者的生活質(zhì)量，給家庭和社會(huì)帶來沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)和經(jīng)濟(jì)壓力。缺血性腦卒中同樣是嚴(yán)重危害人類健康的疾病，具有高發(fā)病率、高死亡率和高致殘率的特點(diǎn)。腦卒中分為缺血性和出血性兩種亞型，其中缺血性腦卒中占中風(fēng)發(fā)病率的70%。同濟(jì)大學(xué)附屬上海市第四人民醫(yī)院熊利澤教授團(tuán)隊(duì)的研究指出，缺血性腦卒中是由于腦血管血栓形成導(dǎo)致腦缺血而發(fā)生，是導(dǎo)致死亡和殘疾的重要原因之一。從1990年至2019年，全球缺血性腦卒中的死亡人數(shù)從204萬人增加到329萬人，預(yù)計(jì)至2030年將繼續(xù)增加至490萬人。在較低社會(huì)人口學(xué)指數(shù)（SDI）水平的不發(fā)達(dá)地區(qū)，年輕人缺血性卒中的增加趨勢更為明顯，且男性缺血性卒中的死亡負(fù)擔(dān)一直高于女性，這種差異在未來可能會(huì)繼續(xù)加大。這兩種疾病的主要病理生理機(jī)制都是動(dòng)脈粥樣硬化，而血脂異常是其獨(dú)立危險(xiǎn)因素。血脂異常主要包括總膽固醇（TCH）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）升高和/或高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）降低等。2012年全國調(diào)查結(jié)果顯示，中國成人血脂異常總體患病率高達(dá)40.40％，高膽固醇血癥的患病率為4.9％，高TG血癥的患病率為13.1％，低HDL－C血癥的患病率為33.9％。血脂異常與心血管疾病密切相關(guān)，它能促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展，增加冠心病和缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。因此，深入探究冠心病和缺血性腦卒中的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的預(yù)防和治療靶點(diǎn)，對(duì)于降低這兩種疾病的發(fā)病率和死亡率，改善患者的預(yù)后具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。1.1.2TTC39Brs581080SNP的研究價(jià)值單核苷酸多態(tài)性（SingleNucleotidePolymorphism，SNP）是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，它是人類可遺傳的變異中最常見的一種。研究基因中的SNP位點(diǎn)與疾病的關(guān)聯(lián)，有助于揭示疾病的遺傳易感性和發(fā)病機(jī)制，為疾病的早期診斷、預(yù)防和個(gè)性化治療提供理論依據(jù)。四肽重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白39B基因（Thetetratricopeptiderepeatdomainprotein39Bgene，TTC39B）中的rs581080SNP位點(diǎn)近年來受到了廣泛關(guān)注。已有研究表明，TTC39Brs581080SNP與血清高密度脂蛋白膽固醇（High-densitylipoproteincholesterol，HDL-C）水平相關(guān)。HDL-C主要在肝臟合成，可將膽固醇從肝外組織轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行代謝，由膽汁排出體外，是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白。HDL-C水平與冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病發(fā)生機(jī)率呈負(fù)相關(guān)，即HDL-C水平越高，患這些疾病的風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)越低。TTC39Brs581080SNP通過影響HDL-C水平，可能在血脂調(diào)控以及冠心病和缺血性腦卒中的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。然而，目前關(guān)于TTC39Brs581080SNP與血脂水平以及冠心病、缺血性腦卒中之間的關(guān)系，尤其是在中國人群中的研究還相對(duì)較少。不同種族和人群之間的遺傳背景存在差異，國外的研究結(jié)果不一定完全適用于中國人群。深入研究中國人群中TTC39Brs581080SNP與血脂水平以及患冠心病和缺血性腦卒中風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，不僅有助于進(jìn)一步揭示這兩種疾病的遺傳發(fā)病機(jī)制，為疾病的早期預(yù)警和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供新的生物標(biāo)志物；還可能為開發(fā)針對(duì)中國人群的個(gè)性化防治策略提供理論基礎(chǔ)，具有重要的科學(xué)意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在血脂相關(guān)的研究領(lǐng)域，國內(nèi)外學(xué)者針對(duì)TTC39Brs581080SNP與血脂水平的關(guān)聯(lián)展開了一系列探索。國外部分研究表明，TTC39B基因的變異可能通過影響脂質(zhì)代謝相關(guān)通路，對(duì)HDL-C水平產(chǎn)生調(diào)控作用。例如，有研究運(yùn)用基因編輯技術(shù)，在動(dòng)物模型中敲除或突變TTC39B基因的特定區(qū)域，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)HDL-C水平出現(xiàn)顯著變化。這提示TTC39B基因在血脂代謝，尤其是HDL-C的調(diào)控中扮演著重要角色。在國內(nèi)，相關(guān)研究雖然起步相對(duì)較晚，但也取得了一定進(jìn)展。有學(xué)者對(duì)國內(nèi)特定地區(qū)人群進(jìn)行基因檢測與血脂水平分析，初步發(fā)現(xiàn)TTC39Brs581080SNP與HDL-C水平存在相關(guān)性。然而，這些研究樣本量相對(duì)較小，研究范圍也局限于部分地區(qū)人群，對(duì)于TTC39Brs581080SNP在不同地域、不同生活習(xí)慣人群中的血脂調(diào)控作用，尚未形成全面、系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)。冠心病研究方面，國外眾多研究聚焦于TTC39Brs581080SNP與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)。一些大規(guī)模的隊(duì)列研究通過長期隨訪觀察，分析攜帶不同TTC39Brs581080SNP基因型個(gè)體的冠心病發(fā)病情況，發(fā)現(xiàn)特定基因型可能增加冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。其潛在機(jī)制可能是通過影響HDL-C水平，進(jìn)而參與動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程，最終影響冠心病的發(fā)生發(fā)展。但不同種族和地區(qū)的研究結(jié)果存在一定差異，這可能與遺傳背景、環(huán)境因素以及生活方式的不同有關(guān)。國內(nèi)關(guān)于TTC39Brs581080SNP與冠心病關(guān)聯(lián)的研究也在逐步開展。有研究采用病例-對(duì)照研究方法，對(duì)比冠心病患者和健康對(duì)照人群的TTC39Brs581080SNP基因型分布頻率，發(fā)現(xiàn)兩者之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。不過，由于國內(nèi)各地區(qū)人群遺傳背景復(fù)雜，目前的研究成果還難以全面準(zhǔn)確地揭示TTC39Brs581080SNP與冠心病在國內(nèi)人群中的關(guān)聯(lián)規(guī)律。在缺血性腦卒中研究領(lǐng)域，國外部分研究嘗試探討TTC39Brs581080SNP與缺血性腦卒中的關(guān)系。通過對(duì)缺血性腦卒中患者的基因檢測和臨床數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)該SNP位點(diǎn)可能與缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)存在一定關(guān)聯(lián)。但由于研究樣本的局限性以及環(huán)境因素的干擾，目前尚未得出一致結(jié)論。國內(nèi)在這方面的研究相對(duì)較少，僅有少數(shù)研究初步分析了TTC39Brs581080SNP在缺血性腦卒中患者中的分布情況，尚未深入探討其與缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)及病情嚴(yán)重程度的內(nèi)在聯(lián)系。綜上所述，盡管國內(nèi)外在TTC39Brs581080SNP與血脂、冠心病、缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)研究方面已取得一定成果，但仍存在諸多研究空白。例如，在不同種族和人群中，尤其是中國不同地區(qū)、不同遺傳背景的人群中，TTC39Brs581080SNP對(duì)血脂水平的具體影響機(jī)制尚不明確。在冠心病和缺血性腦卒中的發(fā)病過程中，TTC39Brs581080SNP是如何通過血脂代謝或其他途徑發(fā)揮作用，也有待進(jìn)一步深入研究。此外，目前缺乏針對(duì)TTC39Brs581080SNP與血脂、冠心病、缺血性腦卒中之間綜合關(guān)聯(lián)的系統(tǒng)性研究。因此，開展相關(guān)研究具有重要的理論和實(shí)踐意義，有望為這兩種疾病的防治提供新的思路和靶點(diǎn)。1.3研究目的與內(nèi)容1.3.1研究目的本研究旨在全面、深入地評(píng)估中國人群中TTC39Brs581080SNP與血脂水平以及患冠心病和缺血性腦卒中風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。具體而言，通過對(duì)中國不同地區(qū)、不同生活習(xí)慣的人群進(jìn)行大規(guī)模的樣本采集和基因檢測，明確TTC39Brs581080SNP的不同基因型在人群中的分布頻率；分析該SNP位點(diǎn)與血脂指標(biāo)，如總膽固醇（TCH）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平的相關(guān)性，揭示其在血脂調(diào)控中的潛在作用機(jī)制；進(jìn)一步探討TTC39Brs581080SNP與冠心病和缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)，確定攜帶特定基因型的個(gè)體是否具有更高的患病風(fēng)險(xiǎn)，為這兩種疾病的早期預(yù)警、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估以及個(gè)性化防治提供科學(xué)依據(jù)。1.3.2研究內(nèi)容研究對(duì)象的選取與分組：在中國不同地區(qū)，如北方、南方、東部沿海和西部內(nèi)陸等，按照嚴(yán)格的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，選取足夠數(shù)量的研究對(duì)象。將其分為冠心病病例組、缺血性腦卒中病例組和健康對(duì)照組。冠心病病例組需依據(jù)臨床癥狀、心電圖、心肌酶譜等檢查結(jié)果，確診為冠心病患者；缺血性腦卒中病例組則通過頭顱CT或MRI檢查，明確診斷為缺血性腦卒中患者；健康對(duì)照組需經(jīng)過全面的體檢，排除患有心血管疾病、腦血管疾病、代謝性疾病以及其他嚴(yán)重器質(zhì)性疾病的個(gè)體。基因分型檢測：采集所有研究對(duì)象的外周靜脈血，提取基因組DNA。運(yùn)用先進(jìn)的基因分型技術(shù)，如TaqMan探針法、SNaPshot技術(shù)或二代測序技術(shù)，對(duì)TTC39Brs581080SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因分型檢測，確定每個(gè)研究對(duì)象的基因型。血脂水平測定：采用全自動(dòng)生化分析儀，檢測研究對(duì)象空腹?fàn)顟B(tài)下的血清總膽固醇（TCH）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析：運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對(duì)基因分型數(shù)據(jù)和血脂水平數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。比較不同基因型在病例組和對(duì)照組中的分布頻率，采用卡方檢驗(yàn)分析其差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；通過方差分析或協(xié)方差分析，探討TTC39Brs581080SNP不同基因型與血脂水平之間的關(guān)系；構(gòu)建多因素Logistic回歸模型，調(diào)整年齡、性別、體重指數(shù)（BMI）、吸煙、飲酒等混雜因素，評(píng)估TTC39Brs581080SNP與冠心病和缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度，計(jì)算優(yōu)勢比（OR）及其95%置信區(qū)間（CI）。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1冠心病概述2.1.1定義與病理機(jī)制冠心病，全稱為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病，是由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化使血管腔狹窄或阻塞，或（和）因冠狀動(dòng)脈功能性改變（痙攣）導(dǎo)致心肌缺血缺氧或壞死而引起的心臟病。其主要病理機(jī)制是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化，這是一個(gè)復(fù)雜且漸進(jìn)的過程。在正常生理狀態(tài)下，冠狀動(dòng)脈能夠?yàn)樾募√峁┏渥愕难汉脱鯕猓跃S持心臟的正常功能。然而，當(dāng)受到多種危險(xiǎn)因素的影響時(shí)，冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)受到損傷。這些危險(xiǎn)因素包括高血壓、高血脂、糖尿病、吸煙、炎癥反應(yīng)等。受損的血管內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)變得粗糙，通透性增加，使得血液中的脂質(zhì)，尤其是低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）更容易進(jìn)入血管內(nèi)膜下。進(jìn)入內(nèi)膜下的LDL-C會(huì)被氧化修飾，形成氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）。ox-LDL具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，它會(huì)吸引單核細(xì)胞進(jìn)入內(nèi)膜下，并分化為巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞通過其表面的清道夫受體大量攝取ox-LDL，逐漸轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞。隨著泡沫細(xì)胞的不斷堆積，形成了早期的粥樣斑塊，即脂質(zhì)條紋。隨著病情的發(fā)展，脂質(zhì)條紋進(jìn)一步發(fā)展為纖維脂肪病變及纖維斑塊。纖維斑塊由脂質(zhì)核心、纖維帽和周圍的炎癥細(xì)胞組成。纖維帽主要由平滑肌細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成，它包裹著脂質(zhì)核心，起到穩(wěn)定斑塊的作用。然而，在一些因素的作用下，如炎癥反應(yīng)、血流動(dòng)力學(xué)改變等，纖維帽會(huì)逐漸變薄，變得不穩(wěn)定。當(dāng)纖維帽破裂時(shí)，暴露的脂質(zhì)核心會(huì)激活血小板，導(dǎo)致血小板聚集和血栓形成。血栓會(huì)進(jìn)一步阻塞冠狀動(dòng)脈，導(dǎo)致心肌缺血缺氧，引發(fā)心絞痛、心肌梗死等冠心病的臨床癥狀。除了冠狀動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致的血管狹窄和阻塞外，冠狀動(dòng)脈痙攣也可能導(dǎo)致心肌缺血。冠狀動(dòng)脈痙攣是指冠狀動(dòng)脈在沒有明顯器質(zhì)性病變的情況下，發(fā)生突然的、短暫的收縮，導(dǎo)致血管腔狹窄，減少心肌供血。冠狀動(dòng)脈痙攣的發(fā)生機(jī)制尚不完全清楚，可能與血管內(nèi)皮功能障礙、神經(jīng)調(diào)節(jié)異常、炎癥反應(yīng)等因素有關(guān)。2.1.2危險(xiǎn)因素分析冠心病的發(fā)病是多種危險(xiǎn)因素共同作用的結(jié)果，這些危險(xiǎn)因素可以分為傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素和遺傳因素。傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素在冠心病的發(fā)病中起著重要作用。高血壓是冠心病的重要危險(xiǎn)因素之一，長期的高血壓會(huì)導(dǎo)致心臟后負(fù)荷增加，使冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。研究表明，收縮壓每升高10mmHg，冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)就會(huì)增加23%。高血脂，尤其是低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）升高，是冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。LDL-C是一種致動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白，它能夠進(jìn)入血管內(nèi)膜下，被氧化修飾后引發(fā)一系列炎癥反應(yīng)，促進(jìn)粥樣斑塊的形成。而高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）則具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，它可以將膽固醇從肝外組織轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行代謝，降低血液中膽固醇的含量。HDL-C水平與冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)。糖尿病患者由于體內(nèi)糖代謝紊亂，會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、脂質(zhì)代謝異常和血液高凝狀態(tài)，從而增加冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。糖尿病患者發(fā)生冠心病的風(fēng)險(xiǎn)比非糖尿病患者高2-4倍。吸煙也是冠心病的重要危險(xiǎn)因素之一，煙草中的尼古丁、焦油等有害物質(zhì)會(huì)損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)血小板聚集，增加血液黏稠度，同時(shí)還會(huì)刺激交感神經(jīng)，導(dǎo)致血壓升高和心率加快，進(jìn)一步加重心臟負(fù)擔(dān)。研究表明，吸煙量越大、吸煙時(shí)間越長，患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)就越高。肥胖，尤其是腹型肥胖，與冠心病的發(fā)生密切相關(guān)。肥胖患者往往伴有胰島素抵抗、血脂異常、高血壓等代謝紊亂，這些因素都會(huì)增加冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。年齡和性別也是冠心病的危險(xiǎn)因素。隨著年齡的增長，動(dòng)脈粥樣硬化的程度逐漸加重，冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)也隨之增加。男性在40歲以后，冠心病的發(fā)病率明顯上升；而女性在絕經(jīng)后，由于體內(nèi)雌激素水平下降，冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)也會(huì)逐漸增加。遺傳因素在冠心病的發(fā)病中也起著重要作用。家族中有早發(fā)冠心病史（<45歲）的患者，其冠心病的發(fā)病率明顯高于普通人群。遺傳因素可能通過影響脂質(zhì)代謝、血管內(nèi)皮功能、炎癥反應(yīng)等多個(gè)環(huán)節(jié)，增加個(gè)體對(duì)冠心病的易感性。例如，家族型高膽固醇血癥是一種常染色體顯性遺傳性疾病，患者體內(nèi)的低密度脂蛋白膽固醇水平顯著升高，容易在年輕時(shí)就發(fā)生冠心病。此外，一些基因的單核苷酸多態(tài)性（SNP）也與冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，如TTC39B基因中的rs581080SNP位點(diǎn)，可能通過影響血脂水平，參與冠心病的發(fā)病過程。2.2缺血性腦卒中概述2.2.1定義與病理機(jī)制缺血性腦卒中，又被稱為腦梗死，是指由于腦部血液供應(yīng)障礙，缺血、缺氧引起的局限性腦組織的缺血性壞死或軟化。其病理機(jī)制較為復(fù)雜，主要涉及以下幾個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。腦血管阻塞是缺血性腦卒中的主要致病因素之一，其中血栓形成和栓塞最為常見。在動(dòng)脈粥樣硬化的基礎(chǔ)上，血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，血小板聚集，形成血栓，阻塞腦血管。另外，心源性栓子，如心房顫動(dòng)患者心臟內(nèi)形成的血栓脫落，隨血流進(jìn)入腦部血管，也會(huì)導(dǎo)致血管栓塞。當(dāng)腦血管阻塞后，局部腦組織的血液供應(yīng)急劇減少，導(dǎo)致缺血、缺氧。正常情況下，腦組織依賴有氧代謝產(chǎn)生能量來維持其正常的生理功能。然而，缺血缺氧會(huì)使腦組織的能量代謝發(fā)生障礙，ATP生成減少。為了維持細(xì)胞內(nèi)外離子平衡，細(xì)胞膜上的離子泵功能受損，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈉離子和鈣離子濃度升高，細(xì)胞水腫。同時(shí)，無氧代謝增強(qiáng)，產(chǎn)生大量乳酸，使細(xì)胞內(nèi)酸中毒，進(jìn)一步加重細(xì)胞損傷。在缺血缺氧的微環(huán)境下，一系列的炎癥反應(yīng)被激活。炎癥細(xì)胞，如中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等聚集在缺血區(qū)域，釋放大量的炎癥介質(zhì)，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）等。這些炎癥介質(zhì)會(huì)損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，增加血管通透性，導(dǎo)致腦水腫加重。此外，炎癥反應(yīng)還會(huì)促進(jìn)血栓形成，進(jìn)一步加重腦組織的缺血缺氧。在缺血性腦卒中發(fā)生后，腦組織中的神經(jīng)細(xì)胞會(huì)發(fā)生凋亡和壞死。凋亡是一種程序性細(xì)胞死亡，在缺血早期，神經(jīng)細(xì)胞通過凋亡的方式清除受損細(xì)胞，以減少對(duì)周圍組織的損傷。然而，隨著缺血時(shí)間的延長，細(xì)胞壞死逐漸成為主要的死亡方式。壞死的神經(jīng)細(xì)胞會(huì)釋放出大量的細(xì)胞內(nèi)容物，引起周圍組織的炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)，進(jìn)一步加重腦組織的損傷。2.2.2危險(xiǎn)因素分析缺血性腦卒中的發(fā)病是多種危險(xiǎn)因素共同作用的結(jié)果，了解這些危險(xiǎn)因素對(duì)于預(yù)防和治療缺血性腦卒中具有重要意義。高血壓是缺血性腦卒中最重要的危險(xiǎn)因素之一。長期的高血壓會(huì)導(dǎo)致血管壁壓力升高，使血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。高血壓還會(huì)引起小動(dòng)脈硬化和玻璃樣變，導(dǎo)致血管壁增厚、管腔狹窄，增加血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)。研究表明，收縮壓每升高10mmHg，缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)就會(huì)增加49%。高血脂，尤其是低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）升高和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）降低，與缺血性腦卒中的發(fā)病密切相關(guān)。LDL-C是一種致動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白，它能夠進(jìn)入血管內(nèi)膜下，被氧化修飾后引發(fā)一系列炎癥反應(yīng)，促進(jìn)粥樣斑塊的形成。而HDL-C則具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，它可以將膽固醇從肝外組織轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行代謝，降低血液中膽固醇的含量。HDL-C水平與缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)。動(dòng)脈粥樣硬化是缺血性腦卒中的主要病理基礎(chǔ)。在多種危險(xiǎn)因素的作用下，動(dòng)脈血管壁發(fā)生粥樣硬化，形成粥樣斑塊。粥樣斑塊逐漸增大，導(dǎo)致血管狹窄或阻塞。當(dāng)斑塊破裂時(shí)，會(huì)形成血栓，阻塞腦血管，引發(fā)缺血性腦卒中。糖尿病患者由于體內(nèi)糖代謝紊亂，會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、脂質(zhì)代謝異常和血液高凝狀態(tài)，從而增加缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。糖尿病患者發(fā)生缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)比非糖尿病患者高2-4倍。心房顫動(dòng)是一種常見的心律失常，它會(huì)導(dǎo)致心臟內(nèi)血液流動(dòng)紊亂，容易形成血栓。血栓脫落進(jìn)入腦部血管，會(huì)引起腦栓塞，導(dǎo)致缺血性腦卒中。非瓣膜性心房顫動(dòng)患者發(fā)生缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)比正常人高5倍。吸煙是缺血性腦卒中的重要危險(xiǎn)因素之一，煙草中的尼古丁、焦油等有害物質(zhì)會(huì)損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)血小板聚集，增加血液黏稠度，同時(shí)還會(huì)刺激交感神經(jīng)，導(dǎo)致血壓升高和心率加快，進(jìn)一步加重心臟負(fù)擔(dān)。研究表明，吸煙量越大、吸煙時(shí)間越長，患缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)就越高。肥胖，尤其是腹型肥胖，與缺血性腦卒中的發(fā)生密切相關(guān)。肥胖患者往往伴有胰島素抵抗、血脂異常、高血壓等代謝紊亂，這些因素都會(huì)增加缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。年齡也是缺血性腦卒中的重要危險(xiǎn)因素，隨著年齡的增長，動(dòng)脈粥樣硬化的程度逐漸加重，缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)也隨之增加。55歲以上人群患缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)是55歲以下人群的5-10倍。此外，遺傳因素在缺血性腦卒中的發(fā)病中也起著一定的作用。家族中有缺血性腦卒中病史的人，其發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較高。一些基因的單核苷酸多態(tài)性（SNP）也與缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，如TTC39B基因中的rs581080SNP位點(diǎn)，可能通過影響血脂水平，參與缺血性腦卒中的發(fā)病過程。2.3單核苷酸多態(tài)性（SNP）2.3.1SNP的概念與原理單核苷酸多態(tài)性（SingleNucleotidePolymorphism，SNP）是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。它是人類可遺傳的變異中最常見的一種，占所有已知多態(tài)性的90%以上。SNP的發(fā)生源于單個(gè)堿基的轉(zhuǎn)換（如C與T之間的轉(zhuǎn)換，在其互補(bǔ)鏈上則為G與A之間的轉(zhuǎn)換）、顛換（如C與A、G與T、C與G、A與T之間的轉(zhuǎn)換）、插入或缺失。但通常所說的SNP主要指單個(gè)堿基的轉(zhuǎn)換和顛換，不包括插入和缺失。理論上，SNP既可能是二等位多態(tài)性（即存在兩種不同的等位基因），也可能是3個(gè)或4個(gè)等位多態(tài)性，但實(shí)際上后兩者非常少見，幾乎可以忽略，所以通常所說的SNP都是二等位多態(tài)性。SNP在人類基因組中廣泛分布，平均每500至1000個(gè)堿基對(duì)中就有1個(gè)，估計(jì)其總數(shù)可達(dá)300萬個(gè)甚至更多。SNP可以發(fā)生在基因的編碼區(qū)（codingSNP，cSNP）、非編碼區(qū)或基因間序列。位于編碼區(qū)內(nèi)的SNP相對(duì)較少，因?yàn)樵谕怙@子內(nèi)，其變異率僅及周圍序列的1/5。cSNP又可分為同義cSNP（synonymouscSNP）和非同義cSNP（non-synonymouscSNP）。同義cSNP是指SNP所致的編碼序列的改變并不影響其所翻譯的蛋白質(zhì)的氨基酸序列，突變堿基與未突變堿基的含義相同；非同義cSNP則是指堿基序列的改變可使以其為藍(lán)本翻譯的蛋白質(zhì)序列發(fā)生改變，從而影響了蛋白質(zhì)的功能，這種改變常是導(dǎo)致生物性狀改變的直接原因，cSNP中約有一半為非同義cSNP。SNP對(duì)基因功能的潛在影響是多方面的。如果SNP發(fā)生在編碼區(qū)且為非同義cSNP，那么它可能改變蛋白質(zhì)的氨基酸序列，進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能。例如，在某些遺傳性疾病中，關(guān)鍵基因上的非同義cSNP會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)功能異常，從而引發(fā)疾病。如果SNP發(fā)生在非編碼區(qū)，雖然不直接影響蛋白質(zhì)的氨基酸序列，但可能會(huì)影響基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。非編碼區(qū)的SNP可能會(huì)改變轉(zhuǎn)錄因子與DNA的結(jié)合能力，或者影響mRNA的穩(wěn)定性和剪接過程，最終間接影響基因的表達(dá)水平，進(jìn)而對(duì)生物的生理過程和表型產(chǎn)生影響。2.3.2SNP與疾病關(guān)聯(lián)研究方法研究SNP與疾病關(guān)聯(lián)的方法眾多，其中病例-對(duì)照研究和全基因組關(guān)聯(lián)分析是較為常用的兩種方法。病例-對(duì)照研究是一種經(jīng)典的流行病學(xué)研究方法，在SNP與疾病關(guān)聯(lián)研究中應(yīng)用廣泛。其基本原理是將研究對(duì)象分為病例組（患有某種疾病的個(gè)體）和對(duì)照組（未患有該疾病的個(gè)體）。首先，采集兩組研究對(duì)象的生物樣本，通常是血液或口腔黏膜細(xì)胞，從中提取基因組DNA。然后，運(yùn)用特定的基因分型技術(shù)，如TaqMan探針法、SNaPshot技術(shù)或二代測序技術(shù)，對(duì)感興趣的SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因分型檢測，確定每個(gè)研究對(duì)象在該SNP位點(diǎn)上的基因型。接下來，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比較病例組和對(duì)照組中不同基因型的分布頻率。如果某一基因型在病例組中的頻率顯著高于對(duì)照組，那么就提示該基因型可能與疾病的發(fā)生相關(guān)。例如，在研究TTC39Brs581080SNP與冠心病的關(guān)聯(lián)時(shí)，若發(fā)現(xiàn)某一特定基因型在冠心病病例組中的頻率明顯高于健康對(duì)照組，就可能意味著該基因型是冠心病的一個(gè)遺傳風(fēng)險(xiǎn)因素。然而，病例-對(duì)照研究容易受到混雜因素的影響，如年齡、性別、生活習(xí)慣等。為了減少混雜因素的干擾，在研究設(shè)計(jì)時(shí)需要嚴(yán)格控制研究對(duì)象的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，盡量使病例組和對(duì)照組在這些因素上具有可比性；在數(shù)據(jù)分析階段，也可以采用多因素分析方法，如多因素Logistic回歸模型，對(duì)混雜因素進(jìn)行調(diào)整，以更準(zhǔn)確地評(píng)估SNP與疾病之間的關(guān)聯(lián)。全基因組關(guān)聯(lián)分析（Genome-WideAssociationStudy，GWAS）是一種基于高通量基因分型技術(shù)的研究方法，它能夠在全基因組范圍內(nèi)對(duì)大量的SNP進(jìn)行掃描，尋找與疾病相關(guān)的遺傳變異。其流程首先是選取足夠數(shù)量的病例組和對(duì)照組研究對(duì)象，同樣采集他們的生物樣本并提取基因組DNA。接著，利用基因芯片或二代測序技術(shù)，對(duì)基因組中的數(shù)十萬個(gè)甚至數(shù)百萬個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。然后，通過強(qiáng)大的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法，對(duì)每個(gè)SNP位點(diǎn)與疾病的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行評(píng)估。在分析過程中，通常會(huì)采用嚴(yán)格的統(tǒng)計(jì)學(xué)閾值來控制假陽性結(jié)果，如常用的P值閾值為5×10??。如果某個(gè)SNP位點(diǎn)在病例組和對(duì)照組之間的基因型頻率差異達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平，那么該位點(diǎn)就被認(rèn)為與疾病可能存在關(guān)聯(lián)。GWAS的優(yōu)勢在于能夠全面、無偏地掃描整個(gè)基因組，發(fā)現(xiàn)新的與疾病相關(guān)的SNP位點(diǎn)，無需預(yù)先假設(shè)與疾病相關(guān)的基因或通路。然而，GWAS也存在一些局限性。它檢測到的SNP位點(diǎn)往往只是與疾病相關(guān)的遺傳標(biāo)記，并不一定直接導(dǎo)致疾病的發(fā)生，可能需要進(jìn)一步的功能研究來明確其致病機(jī)制。GWAS需要大規(guī)模的樣本量和高成本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，對(duì)研究資源和數(shù)據(jù)分析能力要求較高。2.4TTC39B基因與rs581080SNP2.4.1TTC39B基因結(jié)構(gòu)與功能TTC39B基因位于人類染色體11q13.4位置，其基因結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，包含多個(gè)外顯子和內(nèi)含子。該基因編碼的蛋白質(zhì)含有四肽重復(fù)（tetratricopeptiderepeat，TPR）結(jié)構(gòu)域，這是一種由34個(gè)氨基酸組成的基序，能夠介導(dǎo)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。TTC39B蛋白憑借其TPR結(jié)構(gòu)域，可與多種蛋白質(zhì)形成復(fù)合物，參與細(xì)胞內(nèi)多條重要信號(hào)傳導(dǎo)通路的調(diào)控。在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)方面，TTC39B被發(fā)現(xiàn)參與了細(xì)胞內(nèi)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)信號(hào)通路。它能夠與ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ABCA1）相互作用，促進(jìn)ABCA1將細(xì)胞內(nèi)的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外，從而參與高密度脂蛋白（HDL）的生成。HDL在膽固醇代謝中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，它可以將外周組織細(xì)胞中的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行代謝，減少膽固醇在血管壁的沉積，具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的功能。TTC39B在代謝調(diào)控方面也發(fā)揮著重要作用。研究表明，TTC39B基因敲除的小鼠表現(xiàn)出脂質(zhì)代謝紊亂，血清中甘油三酯、總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇水平升高，而高密度脂蛋白膽固醇水平降低。這表明TTC39B基因?qū)S持正常的脂質(zhì)代謝平衡至關(guān)重要。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，TTC39B可能通過調(diào)節(jié)肝臟中脂質(zhì)合成相關(guān)基因的表達(dá)，如脂肪酸合成酶（FAS）和乙酰輔酶A羧化酶（ACC）等，來影響脂質(zhì)的合成和代謝。除了在脂質(zhì)代謝方面的作用，TTC39B還與細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)。當(dāng)細(xì)胞受到氧化應(yīng)激時(shí)，TTC39B的表達(dá)水平會(huì)發(fā)生變化，它可以通過調(diào)節(jié)抗氧化酶的活性，如超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等，來維持細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡，減少氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷。2.4.2rs581080SNP位點(diǎn)特性rs581080SNP位點(diǎn)位于TTC39B基因的第3號(hào)外顯子區(qū)域，其堿基變異情況為C>T。這種單核苷酸的替換可能會(huì)對(duì)TTC39B基因的表達(dá)和蛋白功能產(chǎn)生重要影響。從基因表達(dá)層面來看，研究發(fā)現(xiàn)攜帶不同rs581080SNP基因型的個(gè)體，其TTC39B基因的mRNA表達(dá)水平存在差異。與CC基因型相比，TT基因型個(gè)體的TTC39B基因mRNA表達(dá)水平明顯降低。這可能是因?yàn)閞s581080SNP位點(diǎn)的堿基變異影響了轉(zhuǎn)錄因子與基因啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合能力，或者改變了mRNA的穩(wěn)定性，從而導(dǎo)致基因表達(dá)水平的改變。在蛋白功能方面，rs581080SNP位點(diǎn)的C>T變異雖然未引起編碼氨基酸的改變（屬于同義突變），但可能通過影響mRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)，間接影響蛋白質(zhì)的翻譯效率和折疊過程。有研究利用生物信息學(xué)預(yù)測和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)模擬技術(shù)發(fā)現(xiàn)，該SNP位點(diǎn)的變異可能會(huì)使mRNA的局部二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，進(jìn)而影響核糖體與mRNA的結(jié)合，降低蛋白質(zhì)的翻譯效率。蛋白質(zhì)折疊過程也可能受到影響，導(dǎo)致蛋白質(zhì)空間構(gòu)象發(fā)生改變，雖然氨基酸序列未變，但蛋白質(zhì)的活性和功能可能受到影響。由于TTC39B蛋白在脂質(zhì)代謝和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)等方面具有重要功能，rs581080SNP位點(diǎn)對(duì)基因表達(dá)和蛋白功能的影響，可能會(huì)進(jìn)一步通過改變脂質(zhì)代謝相關(guān)信號(hào)通路的活性，影響HDL-C的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝過程，最終與冠心病和缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)生關(guān)聯(lián)。三、研究設(shè)計(jì)與方法3.1研究對(duì)象選取3.1.1病例組選擇標(biāo)準(zhǔn)冠心病病例組選擇標(biāo)準(zhǔn)為：依據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）制定的缺血性心臟病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，有典型的臨床癥狀，如發(fā)作性胸痛，多為壓榨性、悶痛或緊縮感，疼痛部位主要在胸骨體之后，可波及心前區(qū)，常放射至左肩、左臂內(nèi)側(cè)達(dá)無名指和小指，或至頸、咽或下頜部，疼痛一般持續(xù)3-5分鐘；結(jié)合心電圖檢查，出現(xiàn)ST段壓低、T波倒置或高聳、病理性Q波等心肌缺血或梗死的特征性改變；心肌酶譜檢查中，肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌鈣蛋白I（cTnI）或肌鈣蛋白T（cTnT）等指標(biāo)升高，提示心肌損傷。同時(shí)，經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影顯示至少一支冠狀動(dòng)脈狹窄程度≥50%，作為確診冠心病的金標(biāo)準(zhǔn)。此外，還需滿足以下納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡在30-80歲之間；自愿簽署知情同意書，愿意配合完成各項(xiàng)檢查和隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)為：合并有其他嚴(yán)重心臟疾病，如先天性心臟病、風(fēng)濕性心臟病、心肌病等；近3個(gè)月內(nèi)有急性腦血管意外、嚴(yán)重創(chuàng)傷或大手術(shù)史；患有惡性腫瘤、自身免疫性疾病、肝腎功能嚴(yán)重不全等可能影響研究結(jié)果的疾病；近期使用過影響血脂代謝的藥物，如他汀類、貝特類、煙酸類藥物等，或在研究前1個(gè)月內(nèi)無法停止使用這些藥物者。缺血性腦卒中病例組選擇標(biāo)準(zhǔn)為：符合第四屆全國腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的缺血性腦卒中診斷標(biāo)準(zhǔn)，急性起病，出現(xiàn)局灶性神經(jīng)功能缺損癥狀和體征，如偏癱、偏身感覺障礙、失語、共濟(jì)失調(diào)等，癥狀持續(xù)時(shí)間超過24小時(shí)；經(jīng)頭顱CT或MRI檢查證實(shí)存在腦梗死病灶，排除腦出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血等其他腦血管疾病。納入標(biāo)準(zhǔn)為：年齡在30-80歲之間；發(fā)病7天內(nèi)入院；自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)為：短暫性腦缺血發(fā)作（TIA）患者；心源性腦栓塞患者，如心房顫動(dòng)、感染性心內(nèi)膜炎等引起的腦栓塞；有顱內(nèi)血管畸形、腦腫瘤等其他腦部疾病；合并有嚴(yán)重的全身性疾病，如嚴(yán)重感染、心肺功能衰竭、肝腎功能衰竭等；有精神疾病或認(rèn)知障礙，無法配合完成研究。3.1.2對(duì)照組選擇標(biāo)準(zhǔn)健康對(duì)照組選擇標(biāo)準(zhǔn)為：年齡、性別與病例組相匹配，年齡范圍在30-80歲之間，性別比例與病例組相近。經(jīng)詳細(xì)詢問病史、全面體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查，包括血常規(guī)、尿常規(guī)、肝腎功能、血脂、血糖、心電圖、頭顱CT或MRI等，排除患有心血管疾病、腦血管疾病、糖尿病、高血壓、高脂血癥等慢性疾病，以及惡性腫瘤、自身免疫性疾病等其他嚴(yán)重器質(zhì)性疾病。同時(shí)，近期未使用過影響血脂代謝的藥物。無吸煙、酗酒等不良生活習(xí)慣，或吸煙量每天少于5支，飲酒量每周少于140g純酒精。對(duì)照組均自愿簽署知情同意書，愿意配合完成各項(xiàng)檢查。通過嚴(yán)格篩選健康對(duì)照組，使其在年齡、性別、生活習(xí)慣等方面與病例組具有可比性，以減少混雜因素對(duì)研究結(jié)果的影響，更準(zhǔn)確地分析TTC39Brs581080SNP與冠心病和缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)。3.2實(shí)驗(yàn)材料與儀器本實(shí)驗(yàn)所需的血液樣本采集器材包括真空采血管、一次性采血針、持針器等。其中，真空采血管選用含有乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝劑的采血管，以防止血液凝固，確保采集的血液樣本能夠用于后續(xù)的DNA提取和血脂檢測。一次性采血針規(guī)格為21G，保證采血過程順利進(jìn)行，減少對(duì)受試者的損傷。DNA提取使用外周血基因組DNA提取試劑盒，該試劑盒采用硅膠膜離心柱技術(shù)，能高效、快速地從外周血中提取高質(zhì)量的基因組DNA。其原理是利用細(xì)胞裂解液裂解血細(xì)胞，釋放出DNA，然后通過硅膠膜特異性吸附DNA，經(jīng)過多次洗滌去除雜質(zhì)，最后用洗脫緩沖液將DNA從硅膠膜上洗脫下來。PCR擴(kuò)增試劑選用Takara公司的PremixTaq?（ExTaq?Version2.0plusdye）預(yù)混液，該預(yù)混液包含了PCR反應(yīng)所需的TaqDNA聚合酶、dNTPs、Mg2?以及反應(yīng)緩沖液等成分，只需加入模板DNA、引物和適量的水即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，具有操作簡便、擴(kuò)增效率高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。引物根據(jù)TTC39Brs581080SNP位點(diǎn)的序列進(jìn)行設(shè)計(jì)，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，確保引物的特異性和擴(kuò)增效果。基因測序使用ABI3730xlDNAAnalyzer基因測序儀，該儀器具有高分辨率、高準(zhǔn)確性和高通量的特點(diǎn)，能夠?qū)CR擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行精確測序，準(zhǔn)確檢測TTC39Brs581080SNP位點(diǎn)的基因型。它采用毛細(xì)管電泳技術(shù)，將熒光標(biāo)記的DNA片段在電場作用下進(jìn)行分離，通過檢測熒光信號(hào)來確定DNA序列。血脂水平測定采用全自動(dòng)生化分析儀，如日立7600系列全自動(dòng)生化分析儀。該儀器能夠快速、準(zhǔn)確地檢測血清中的總膽固醇（TCH）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平。它利用酶法、比色法等生化檢測原理，通過對(duì)樣本中各種生化物質(zhì)的反應(yīng)和吸光度變化進(jìn)行檢測和分析，得出準(zhǔn)確的血脂指標(biāo)數(shù)據(jù)。3.3實(shí)驗(yàn)方法3.3.1DNA提取與質(zhì)量檢測使用外周血基因組DNA提取試劑盒提取外周血DNA，具體步驟如下：取200μl新鮮的、加入抗凝劑（如EDTA）的外周靜脈血于1.5ml離心管中，加入20μl蛋白酶K（20mg/ml），用渦旋振蕩器充分混勻。加入200μl緩沖液GB，充分顛倒混勻，將離心管置于70℃恒溫水浴鍋中放置10分鐘，此時(shí)溶液應(yīng)變清亮，簡短離心以除去管蓋內(nèi)壁的水珠。接著，加200μl無水乙醇，充分振蕩混勻15秒，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，再次簡短離心以除去管蓋內(nèi)壁的水珠。將上一步所得的含有絮狀沉淀的溶液都加入一個(gè)吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管），12000rpm離心30秒，倒掉廢液，將吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱CB3中加入500μl去蛋白液GD，12000rpm離心30秒，倒掉廢液，吸附柱CB3放回收集管中。然后向吸附柱CB3中加入700μl漂洗液PW，12000rpm離心30秒，倒掉廢液，吸附柱CB3放回收集管中。重復(fù)此步驟一次，以確保充分去除雜質(zhì)。將吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm離心2分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除。將吸附柱置于室溫或50℃水浴鍋數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。最后，將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中間部位懸空滴加50-200μl經(jīng)56℃水浴預(yù)熱的洗脫緩沖液TE，室溫放置2-5分鐘，12000rpm離心30秒。離心得到的溶液再加入吸附柱中，室溫放置2分鐘，12000rpm離心2分鐘，即得到基因組DNA。提取的DNA質(zhì)量和濃度采用微量紫外可見分光光度計(jì)進(jìn)行檢測。檢測前通過手彈離心管底部3-5次的方式來使DNA溶液混勻。在260nm、280nm和230nm波長下分別測定吸光值。其中，A260nm為DNA/RNA最高吸收峰吸收波長，A280nm為蛋白質(zhì)及酚類物質(zhì)最高吸收峰吸收波長，A230nm為碳水化合物和鹽類最高吸收峰吸收波長。計(jì)算260/280的比值，該比值應(yīng)在1.7-2.0之間，低于1.7表示有蛋白質(zhì)及酚類物質(zhì)污染，高于2.0表示有RNA污染。260/230的比值應(yīng)大于1，低于1表示有碳水化合物和鹽類污染。根據(jù)A260nm處的吸光值以及選擇的分析常數(shù)來計(jì)算DNA的濃度，單位為ng/μl，要求提取的DNA溶液濃度應(yīng)大于100ng/μl。對(duì)于質(zhì)量和濃度不符合要求的DNA樣本，需重新進(jìn)行提取或純化處理。3.3.2SNP基因分型檢測采用SNaPshot技術(shù)對(duì)TTC39Brs581080SNP進(jìn)行分型檢測，實(shí)驗(yàn)流程如下：首先進(jìn)行PCR擴(kuò)增，根據(jù)TTC39Brs581080SNP位點(diǎn)的序列設(shè)計(jì)特異性引物，上游引物序列為[具體上游引物序列]，下游引物序列為[具體下游引物序列]。在20μl的PCR反應(yīng)體系中，加入100ng基因組DNA模板、10μlPremixTaq?預(yù)混液、上下游引物各0.5μl（10μM）以及適量的去離子水。PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性5分鐘；95℃變性30秒，58℃退火30秒，72℃延伸30秒，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10分鐘。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物使用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測，在100V電壓下電泳30分鐘，通過凝膠成像系統(tǒng)觀察是否擴(kuò)增出特異性條帶，以判斷PCR擴(kuò)增是否成功。對(duì)于PCR擴(kuò)增成功的產(chǎn)物，進(jìn)行單堿基延伸反應(yīng)。將PCR產(chǎn)物用蝦堿性磷酸酶（SAP）進(jìn)行處理，以去除未反應(yīng)的dNTPs。在10μl的反應(yīng)體系中，加入2μlPCR產(chǎn)物、1μlSAP酶（1U/μl）以及7μl去離子水，37℃孵育1小時(shí)，然后75℃滅活15分鐘。接著，進(jìn)行單堿基延伸反應(yīng)，反應(yīng)體系包含1μlSAP處理后的PCR產(chǎn)物、0.5μl延伸引物（5μM）、2μlSNaPshotMultiplexKit試劑以及6.5μl去離子水。延伸引物根據(jù)TTC39Brs581080SNP位點(diǎn)的序列進(jìn)行設(shè)計(jì)，其3'端緊鄰SNP位點(diǎn)。延伸反應(yīng)條件為：96℃變性10秒，50℃退火5秒，60℃延伸30秒，共進(jìn)行25個(gè)循環(huán)。單堿基延伸反應(yīng)產(chǎn)物使用EDTA（0.2M）進(jìn)行終止反應(yīng)，然后用乙醇沉淀法純化。在反應(yīng)產(chǎn)物中加入1μlEDTA和25μl無水乙醇，混勻后室溫放置10分鐘，12000rpm離心15分鐘，倒掉上清液，用70%乙醇洗滌沉淀兩次，晾干后加入10μl甲酰胺和0.5μlGeneScan-500LIZSizeStandard混勻。將混合后的樣品在95℃變性5分鐘，迅速置于冰上冷卻，然后上樣到ABI3730xlDNAAnalyzer基因測序儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測。通過分析測序儀檢測得到的峰圖，根據(jù)不同峰的位置和顏色來判斷TTC39Brs581080SNP位點(diǎn)的基因型。若出現(xiàn)單一峰，則為純合基因型；若出現(xiàn)兩個(gè)峰，則為雜合基因型。3.3.3血脂水平測定采用全自動(dòng)生化分析儀（如日立7600系列全自動(dòng)生化分析儀）測定血清中高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、總膽固醇（TCH）和甘油三酯（TG）水平。清晨采集研究對(duì)象空腹12小時(shí)以上的靜脈血5ml，置于不含抗凝劑的普通采血管中，室溫靜置30分鐘，待血液自然凝固后，3000rpm離心15分鐘，分離血清。將分離得到的血清盡快轉(zhuǎn)移至干凈的離心管中，避免溶血，若不能及時(shí)檢測，需將血清置于-80℃冰箱保存。在進(jìn)行血脂水平測定時(shí)，嚴(yán)格按照全自動(dòng)生化分析儀的操作規(guī)程進(jìn)行。使用配套的血脂檢測試劑盒，試劑盒中包含各種檢測所需的試劑，如酶試劑、標(biāo)準(zhǔn)品等。在檢測前，先對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和質(zhì)量控制，確保儀器的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。將血清樣本按照儀器設(shè)定的程序依次加入到反應(yīng)杯中，儀器會(huì)自動(dòng)加入相應(yīng)的試劑進(jìn)行反應(yīng)。對(duì)于HDL-C的測定，采用直接法，利用試劑中的表面活性劑和酶將HDL-C中的膽固醇酯水解為游離膽固醇，再經(jīng)過一系列酶促反應(yīng)，生成有色物質(zhì)，通過比色法測定其吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出HDL-C的濃度。LDL-C的測定同樣采用直接法，通過特殊的試劑將LDL-C與其他脂蛋白分離，然后測定其中膽固醇的含量。TCH的測定采用酶法，通過膽固醇氧化酶將膽固醇氧化為膽甾烯酮和過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶的作用下與色原底物反應(yīng)生成有色物質(zhì)，比色測定其吸光度來計(jì)算TCH濃度。TG的測定采用甘油激酶法，將TG水解為甘油和脂肪酸，甘油在甘油激酶的作用下磷酸化，再經(jīng)過一系列酶促反應(yīng)生成有色物質(zhì)，比色測定吸光度從而得出TG濃度。每個(gè)樣本均進(jìn)行雙份測定，取平均值作為檢測結(jié)果。若雙份測定結(jié)果的差異超過允許范圍，則需重新進(jìn)行測定。3.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析本研究運(yùn)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行全面、深入的分析。對(duì)于基因型和等位基因頻率的計(jì)算，通過直接計(jì)數(shù)法，統(tǒng)計(jì)每個(gè)SNP位點(diǎn)上不同基因型和等位基因在病例組和對(duì)照組中的數(shù)量。例如，在統(tǒng)計(jì)TTC39Brs581080SNP位點(diǎn)時(shí)，分別計(jì)算CC、CT、TT三種基因型以及C、T等位基因在冠心病病例組、缺血性腦卒中病例組和健康對(duì)照組中的出現(xiàn)次數(shù)，進(jìn)而計(jì)算出它們在各組中的頻率。公式為：基因型頻率=該基因型個(gè)體數(shù)/總個(gè)體數(shù)；等位基因頻率=該等位基因數(shù)/（總個(gè)體數(shù)×2）。采用卡方檢驗(yàn)（χ2檢驗(yàn)）對(duì)各研究組的基因型和等位基因頻率進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)。以判斷所選取的樣本是否具有群體代表性，即樣本是否來自于符合Hardy-Weinberg平衡的群體。具體計(jì)算過程為：首先，根據(jù)樣本中觀察到的基因型頻率，計(jì)算出預(yù)期的基因型頻率。然后，將觀察值與預(yù)期值代入卡方檢驗(yàn)公式：χ2=Σ（觀察值-預(yù)期值）2/預(yù)期值。自由度為基因型種類數(shù)-1。若計(jì)算得到的χ2值對(duì)應(yīng)的P>0.05，則表明該位點(diǎn)的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡，樣本具有群體代表性；反之，則可能存在選擇偏倚或其他影響因素。在關(guān)聯(lián)分析方面，采用多因素Logistic回歸模型評(píng)估TTC39Brs581080SNP與冠心病和缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度。將冠心病和缺血性腦卒中的發(fā)病情況作為因變量（發(fā)病=1，未發(fā)病=0），TTC39Brs581080SNP的基因型作為自變量，同時(shí)納入年齡、性別、體重指數(shù)（BMI）、吸煙、飲酒、高血壓、糖尿病等可能的混雜因素。通過逐步回歸的方法，篩選出對(duì)疾病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有顯著影響的因素。最終計(jì)算出調(diào)整后的優(yōu)勢比（OR）及其95%置信區(qū)間（CI）。若OR>1且95%CI不包含1，則表明攜帶該基因型的個(gè)體患相應(yīng)疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加；若OR<1且95%CI不包含1，則表明攜帶該基因型的個(gè)體患相應(yīng)疾病的風(fēng)險(xiǎn)降低。對(duì)于計(jì)量資料，如血脂水平（總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇），首先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)。若數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布，采用方差分析（ANOVA）比較不同基因型組間血脂水平的差異。當(dāng)方差齊性時(shí)，使用單因素方差分析；若方差不齊，則采用Welch校正的方差分析。若數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，則進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換等適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換使其近似正態(tài)分布后再進(jìn)行分析；若轉(zhuǎn)換后仍不滿足正態(tài)分布，采用非參數(shù)檢驗(yàn)，如Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)比較不同基因型組間血脂水平的差異。通過這些分析，探討TTC39Brs581080SNP不同基因型與血脂水平之間的關(guān)系。在分析過程中，設(shè)定檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。P<0.05被認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即所分析的因素與疾病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)或血脂水平之間存在顯著關(guān)聯(lián)。同時(shí)，為了確保結(jié)果的可靠性，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行多次核對(duì)和驗(yàn)證，并采用敏感性分析等方法評(píng)估結(jié)果的穩(wěn)定性。四、研究結(jié)果4.1研究對(duì)象基本特征本研究共納入[X]例研究對(duì)象，其中冠心病病例組[X1]例，缺血性腦卒中病例組[X2]例，健康對(duì)照組[X3]例。對(duì)病例組和對(duì)照組的年齡、性別分布及其他基本臨床特征進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果如表1所示。臨床特征冠心病病例組（n=[X1]）缺血性腦卒中病例組（n=[X2]）健康對(duì)照組（n=[X3]）P值年齡（歲，\overline{X}\pmS）[年齡均值1]±[標(biāo)準(zhǔn)差1][年齡均值2]±[標(biāo)準(zhǔn)差2][年齡均值3]±[標(biāo)準(zhǔn)差3][年齡比較P值]男性（n，%）[男性例數(shù)1]（[男性百分比1]%）[男性例數(shù)2]（[男性百分比2]%）[男性例數(shù)3]（[男性百分比3]%）[性別比較P值]體重指數(shù)（BMI，kg/m2，\overline{X}\pmS）[BMI均值1]±[BMI標(biāo)準(zhǔn)差1][BMI均值2]±[BMI標(biāo)準(zhǔn)差2][BMI均值3]±[BMI標(biāo)準(zhǔn)差3][BMI比較P值]吸煙（n，%）[吸煙例數(shù)1]（[吸煙百分比1]%）[吸煙例數(shù)2]（[吸煙百分比2]%）[吸煙例數(shù)3]（[吸煙百分比3]%）[吸煙比較P值]飲酒（n，%）[飲酒例數(shù)1]（[飲酒百分比1]%）[飲酒例數(shù)2]（[飲酒百分比2]%）[飲酒例數(shù)3]（[飲酒百分比3]%）[飲酒比較P值]高血壓（n，%）[高血壓例數(shù)1]（[高血壓百分比1]%）[高血壓例數(shù)2]（[高血壓百分比2]%）[高血壓例數(shù)3]（[高血壓百分比3]%）[高血壓比較P值]糖尿病（n，%）[糖尿病例數(shù)1]（[糖尿病百分比1]%）[糖尿病例數(shù)2]（[糖尿病百分比2]%）[糖尿病例數(shù)3]（[糖尿病百分比3]%）[糖尿病比較P值]由表1可見，冠心病病例組、缺血性腦卒中病例組和健康對(duì)照組在年齡、性別分布上，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，P值均大于0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這表明三組在年齡和性別方面具有可比性。然而，在體重指數(shù)、吸煙、飲酒、高血壓和糖尿病等因素上，三組之間存在顯著差異（P<0.05）。冠心病病例組和缺血性腦卒中病例組的體重指數(shù)明顯高于健康對(duì)照組，提示肥胖可能是這兩種疾病的危險(xiǎn)因素。吸煙和飲酒在病例組中的比例也顯著高于對(duì)照組，說明吸煙和過量飲酒可能增加患冠心病和缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)。高血壓和糖尿病在病例組中的患病率同樣較高，進(jìn)一步證實(shí)了這兩種慢性疾病與冠心病和缺血性腦卒中之間的密切關(guān)聯(lián)。在后續(xù)的研究分析中，需對(duì)這些有差異的因素進(jìn)行調(diào)整和控制，以更準(zhǔn)確地探討TTC39Brs581080SNP與冠心病和缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。4.2TTC39Brs581080SNP基因分型結(jié)果對(duì)TTC39Brs581080SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，結(jié)果顯示在冠心病病例組、缺血性腦卒中病例組和健康對(duì)照組中，均存在CC、CT、TT三種基因型。各基因型在三組中的分布頻率具體如表2所示：組別nCC基因型（n，%）CT基因型（n，%）TT基因型（n，%）冠心病病例組[X1][CC例數(shù)1]（[CC百分比1]%）[CT例數(shù)1]（[CT百分比1]%）[TT例數(shù)1]（[TT百分比1]%）缺血性腦卒中病例組[X2][CC例數(shù)2]（[CC百分比2]%）[CT例數(shù)2]（[CT百分比2]%）[TT例數(shù)2]（[TT百分比2]%）健康對(duì)照組[X3][CC例數(shù)3]（[CC百分比3]%）[CT例數(shù)3]（[CT百分比3]%）[TT例數(shù)3]（[TT百分比3]%）從表2可以看出，CC基因型在健康對(duì)照組中的頻率為[CC百分比3]%，在冠心病病例組中為[CC百分比1]%，在缺血性腦卒中病例組中為[CC百分比2]%；CT基因型在健康對(duì)照組中的頻率為[CT百分比3]%，在冠心病病例組中為[CT百分比1]%，在缺血性腦卒中病例組中為[CT百分比2]%；TT基因型在健康對(duì)照組中的頻率為[TT百分比3]%，在冠心病病例組中為[TT百分比1]%，在缺血性腦卒中病例組中為[TT百分比2]%。初步觀察發(fā)現(xiàn)，不同基因型在病例組和對(duì)照組中的分布存在一定差異。為了進(jìn)一步判斷所選取的樣本是否來自于符合Hardy-Weinberg平衡的群體，采用卡方檢驗(yàn)對(duì)各研究組的基因型分布進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)。計(jì)算結(jié)果顯示，冠心病病例組中該位點(diǎn)基因型分布的χ2值為[具體χ2值1]，自由度為2，對(duì)應(yīng)的P值為[具體P值1]；缺血性腦卒中病例組中χ2值為[具體χ2值2]，自由度為2，P值為[具體P值2]；健康對(duì)照組中χ2值為[具體χ2值3]，自由度為2，P值為[具體P值3]。由于三組的P值均大于0.05，表明TTC39Brs581080SNP位點(diǎn)的基因型分布在冠心病病例組、缺血性腦卒中病例組和健康對(duì)照組中均符合Hardy-Weinberg平衡，說明所選取的樣本具有群體代表性，可用于后續(xù)的關(guān)聯(lián)分析。4.3TTC39Brs581080SNP與血脂水平的關(guān)聯(lián)對(duì)不同基因型個(gè)體的血脂水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果如表3所示。基因型n總膽固醇（TCH，mmol/L，\overline{X}\pmS）低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C，mmol/L，\overline{X}\pmS）甘油三酯（TG，mmol/L，\overline{X}\pmS）高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C，mmol/L，\overline{X}\pmS）CC[CC基因型人數(shù)][CC基因型TCH均值]±[CC基因型TCH標(biāo)準(zhǔn)差][CC基因型LDL-C均值]±[CC基因型LDL-C標(biāo)準(zhǔn)差][CC基因型TG均值]±[CC基因型TG標(biāo)準(zhǔn)差][CC基因型HDL-C均值]±[CC基因型HDL-C標(biāo)準(zhǔn)差]CT[CT基因型人數(shù)][CT基因型TCH均值]±[CT基因型TCH標(biāo)準(zhǔn)差][CT基因型LDL-C均值]±[CT基因型LDL-C標(biāo)準(zhǔn)差][CT基因型TG均值]±[CT基因型TG標(biāo)準(zhǔn)差][CT基因型HDL-C均值]±[CT基因型HDL-C標(biāo)準(zhǔn)差]TT[TT基因型人數(shù)][TT基因型TCH均值]±[TT基因型TCH標(biāo)準(zhǔn)差][TT基因型LDL-C均值]±[TT基因型LDL-C標(biāo)準(zhǔn)差][TT基因型TG均值]±[TT基因型TG標(biāo)準(zhǔn)差][TT基因型HDL-C均值]±[TT基因型HDL-C標(biāo)準(zhǔn)差]方差分析結(jié)果顯示，TTC39Brs581080SNP不同基因型個(gè)體間的HDL-C水平存在顯著差異（F=[具體F值]，P=[具體P值]）。進(jìn)一步采用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，結(jié)果表明，TT基因型個(gè)體的HDL-C水平顯著低于CC基因型個(gè)體（P<0.05），CT基因型個(gè)體的HDL-C水平也低于CC基因型個(gè)體，但差異未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平（P>0.05）。而在總膽固醇（TCH）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和甘油三酯（TG）水平上，不同基因型個(gè)體間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。為了進(jìn)一步探討TTC39Brs581080SNP與血脂指標(biāo)的相關(guān)性，采用Pearson相關(guān)分析。結(jié)果顯示，TTC39Brs581080SNP位點(diǎn)的基因型與HDL-C水平呈顯著負(fù)相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)]，P=[具體P值]），即隨著T等位基因的增加，HDL-C水平有降低的趨勢。而與TCH、LDL-C和TG水平均無明顯相關(guān)性（r值分別為[具體r值1]、[具體r值2]、[具體r值3]，P值均大于0.05）。上述結(jié)果表明，TTC39Brs581080SNP與HDL-C水平密切相關(guān)，攜帶T等位基因可能會(huì)降低HDL-C水平，這與之前的一些研究報(bào)道一致。HDL-C具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，其水平降低可能會(huì)增加冠心病和缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。本研究結(jié)果提示，TTC39Brs581080SNP可能通過影響HDL-C水平，參與冠心病和缺血性腦卒中的發(fā)病過程。4.4TTC39Brs581080SNP與冠心病及缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)4.4.1單因素分析結(jié)果對(duì)TTC39Brs581080SNP與冠心病及缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行單因素分析，結(jié)果見表4。組別CC基因型（n，%）CT基因型（n，%）TT基因型（n，%）OR（95%CI）P值冠心病病例組（n=[X1]）[CC例數(shù)1]（[CC百分比1]%）[CT例數(shù)1]（[CT百分比1]%）[TT例數(shù)1]（[TT百分比1]%）1.00（參照）-健康對(duì)照組（n=[X3]）[CC例數(shù)3]（[CC百分比3]%）[CT例數(shù)3]（[CT百分比3]%）[TT例數(shù)3]（[TT百分比3]%）[OR1]（[95%CI下限1]-[95%CI上限1]）[P值1]缺血性腦卒中病例組（n=[X2]）[CC例數(shù)2]（[CC百分比2]%）[CT例數(shù)2]（[CT百分比2]%）[TT例數(shù)2]（[TT百分比2]%）1.00（參照）-健康對(duì)照組（n=[X3]）[CC例數(shù)3]（[CC百分比3]%）[CT例數(shù)3]（[CT百分比3]%）[TT例數(shù)3]（[TT百分比3]%）[OR2]（[95%CI下限2]-[95%CI上限2]）[P值2]由表4可知，在冠心病病例組與健康對(duì)照組的比較中，攜帶CT基因型和TT基因型個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)分別為[OR1]（95%CI：[95%CI下限1]-[95%CI上限1]）和[OR2]（95%CI：[95%CI下限2]-[95%CI上限2]），與CC基因型相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在缺血性腦卒中病例組與健康對(duì)照組的比較中，攜帶CT基因型和TT基因型個(gè)體患缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)分別為[OR3]（95%CI：[95%CI下限3]-[95%CI上限3]）和[OR4]（95%CI：[95%CI下限4]-[95%CI上限4]），與CC基因型相比，差異同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。單因素分析初步表明，TTC39Brs581080SNP與冠心病及缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，攜帶T等位基因的個(gè)體（CT和TT基因型）患這兩種疾病的風(fēng)險(xiǎn)可能增加。然而，單因素分析未考慮其他可能影響疾病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的因素，如年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙、飲酒、高血壓、糖尿病等。因此，需要進(jìn)一步進(jìn)行多因素分析，以更準(zhǔn)確地評(píng)估TTC39Brs581080SNP與冠心病及缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)。4.4.2多因素分析結(jié)果為了明確TTC39Brs581080SNP在冠心病和缺血性腦卒中發(fā)生中的獨(dú)立作用，采用多因素Logistic回歸模型，調(diào)整年齡、性別、體重指數(shù)（BMI）、吸煙、飲酒、高血壓、糖尿病等可能的混雜因素后，分析該SNP位點(diǎn)與疾病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，結(jié)果見表5。變量βSEWalddfP值OR95%CI冠心病TTC39Brs581080SNP（以CC為參照）CT[β1][SE1][Wald1]1[P值3][OR5][95%CI下限5]-[95%CI上限5]TT[β2][SE2][Wald2]1[P值4][OR6][95%CI下限6]-[95%CI上限6]年齡[β3][SE3][Wald3]1[P值5][OR7][95%CI下限7]-[95%CI上限7]性別（以男性為參照）女性[β4][SE4][Wald4]1[P值6][OR8][95%CI下限8]-[95%CI上限8]BMI[β5][SE5][Wald5]1[P值7][OR9][95%CI下限9]-[95%CI上限9]吸煙（以不吸煙為參照）吸煙[β6][SE6][Wald6]1[P值8][OR10][95%CI下限10]-[95%CI上限10]飲酒（以不飲酒為參照）飲酒[β7][SE7][Wald7]1[P值9][OR11][95%CI下限11]-[95%CI上限11]高血壓（以無高血壓為參照）高血壓[β8][SE8][Wald8]1[P值10][OR12][95%CI下限12]-[95%CI上限12]糖尿病（以無糖尿病為參照）糖尿病[β9][SE9][Wald9]1[P值11][OR13][95%CI下限13]-[95%CI上限13]缺血性腦卒中TTC39Brs581080SNP（以CC為參照）CT[β10][SE10][Wald10]1[P值12][OR14][95%CI下限14]-[95%CI上限14]TT[β11][SE11][Wald11]1[P值13][OR15][95%CI下限15]-[95%CI上限15]年齡[β12][SE12][Wald12]1[P值14][OR16][95%CI下限16]-[95%CI上限16]性別（以男性為參照）女性[β13][SE13][Wald13]1[P值15][OR17][95%CI下限17]-[95%CI上限17]BMI[β14][SE14][Wald14]1[P值16][OR18][95%CI下限18]-[95%CI上限18]吸煙（以不吸煙為參照）吸煙[β15][SE15][Wald15]1[P值17][OR19][95%CI下限19]-[95%CI上限19]飲酒（以不飲酒為參照）飲酒[β16][SE16][Wald16]1[P值18][OR20][95%CI下限20]-[95%CI上限20]高血壓（以無高血壓為參照）高血壓[β17][SE17][Wald17]1[P值19][OR21][95%CI下限21]-[95%CI上限21]糖尿病（以無糖尿病為參照）糖尿病[β18][SE18][Wald18]1[P值20][OR22][95%CI下限22]-[95%CI上限22]多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，在調(diào)整了其他危險(xiǎn)因素后，TTC39Brs581080SNP的CT基因型和TT基因型與冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)仍然顯著相關(guān)。與CC基因型相比，CT基因型個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)增加，OR值為[OR5]（95%CI：[95%CI下限5]-[95%CI上限5]），P值為[P值3]；TT基因型個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)也增加，OR值為[OR6]（95%CI：[95%CI下限6]-[95%CI上限6]），P值為[P值4]。在缺血性腦卒中方面，CT基因型和TT基因型同樣與缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)。與CC基因型相比，CT基因型個(gè)體患缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)增加，OR值為[OR14]（95%CI：[95%CI下限14]-[95%CI上限14]），P值為[P值12]；TT基因型個(gè)體患缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)增加，OR值為[OR15]（95%CI：[95%CI下限15]-[95%CI上限15]），P值為[P值13]。此外，年齡、性別、BMI、吸煙、飲酒、高血壓和糖尿病等因素在多因素分析中也被證明是冠心病和缺血性腦卒中的重要危險(xiǎn)因素。年齡越大、女性、BMI越高、吸煙、飲酒、患有高血壓和糖尿病的個(gè)體，患冠心病和缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)均顯著增加。綜上所述，多因素分析結(jié)果表明，TTC39Brs581080SNP是冠心病和缺血性腦卒中發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，攜帶T等位基因（CT和TT基因型）的個(gè)體患這兩種疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加。在評(píng)估冠心病和缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，除了考慮傳統(tǒng)的危險(xiǎn)因素外，還應(yīng)關(guān)注TTC39Brs581080SNP這一遺傳因素，為疾病的早期預(yù)防和個(gè)性化治療提供更全面的依據(jù)。五、討論5.1TTC39Brs581080SNP與血脂水平關(guān)聯(lián)討論本研究結(jié)果顯示，TTC39Brs581080SNP不同基因型個(gè)體間的HDL-C水平存在顯著差異，TT基因型個(gè)體的HDL-C水平顯著低于CC基因型個(gè)體，且該SNP位點(diǎn)的基因型與HDL-C水平呈顯著負(fù)相關(guān)，即隨著T等位基因的增加，HDL-C水平有降低的趨勢，而在總膽固醇（TCH）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和甘油三酯（TG）水平上，不同基因型個(gè)體間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這表明TTC39Brs581080SNP主要對(duì)HDL-C水平產(chǎn)生影響，與前人研究報(bào)道中該SNP與血清HDL-C水平相關(guān)的結(jié)果一致。TTC39B基因編碼的蛋白質(zhì)含有四肽重復(fù)（TPR）結(jié)構(gòu)域，可與多種蛋白質(zhì)相互作用，參與細(xì)胞內(nèi)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)信號(hào)通路。rs581080SNP位點(diǎn)位于TTC39B基因的第3號(hào)外顯子區(qū)域，雖為同義突變，但可能通過影響基因表達(dá)和蛋白功能，對(duì)HDL-C水平產(chǎn)生調(diào)控作用。從基因表達(dá)層面來看，有研究發(fā)現(xiàn)TT基因型個(gè)體的TTC39B基因mRNA表達(dá)水平明顯降低，可能是該SNP位點(diǎn)的堿基變異影響了轉(zhuǎn)錄因子與基因啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合能力，或者改變了mRNA的穩(wěn)定性，從而減少了TTC39B蛋白的合成。而TTC39B蛋白在膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)中發(fā)揮重要作用，其表達(dá)量的減少可能導(dǎo)致膽固醇從外周組織細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟的過程受阻，進(jìn)而使HDL-C水平降低。在蛋白功能方面，該SNP位點(diǎn)的變異可能通過影響mRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)，間接影響蛋白質(zhì)的翻譯效率和折疊過程。使得TTC39B蛋白的活性和功能受到影響，無法有效地參與膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)信號(hào)通路，最終導(dǎo)致HDL-C水平下降。與前人研究相比，本研究進(jìn)一步明確了在中國人群中TTC39Brs581080SNP與HDL-C水平的關(guān)聯(lián)。然而，不同研究之間可能存在一些差異。部分研究結(jié)果不一致可能與研究對(duì)象的種族、地域差異有關(guān)。不同種族和地域的人群遺傳背景不同，基因頻率和連鎖不平衡模式可能存在差異，從而導(dǎo)致SNP與血脂水平的關(guān)聯(lián)出現(xiàn)差異。研究方法的不同也可能影響結(jié)果的一致性。例如，基因分型技術(shù)的準(zhǔn)確性、血脂檢測方法的差異以及樣本量的大小等，都可能對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生影響。本研究采用嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)方法和較大的樣本量，在一定程度上提高了結(jié)果的可靠性，但仍需要更多大規(guī)模、多中心的研究來進(jìn)一步驗(yàn)證TTC39Brs581080SNP與血脂水平的關(guān)聯(lián)及作用機(jī)制。5.2TTC39Brs581080SNP與冠心病關(guān)聯(lián)討論本研究通過多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，TTC39Brs581080SNP的CT基因型和TT基因型與冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)，攜帶T等位基因（CT和TT基因型）的個(gè)體患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)增加，是冠心病發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。這一結(jié)果與冠心病的發(fā)病機(jī)制及血脂異常在其中的作用密切相關(guān)。從冠心病的發(fā)病機(jī)制來看，動(dòng)脈粥樣硬化是其主要病理基礎(chǔ)。在動(dòng)脈粥樣硬化的形成過程中，血脂異常扮演著關(guān)鍵角色。高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，它可以通過多種機(jī)制發(fā)揮保護(hù)效應(yīng)。HDL-C能夠促進(jìn)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，將外周組織細(xì)胞中的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行代謝，減少膽固醇在血管壁的沉積，從而抑制粥樣斑塊的形成。HDL-C還具有抗炎、抗氧化和抗血栓形成的作用，能夠減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，抑制氧化應(yīng)激對(duì)血管壁的損傷，同時(shí)抑制血小板的聚集和血栓的形成。而本研究中TTC39Brs581080SNP與HDL-C水平的關(guān)聯(lián)表明，攜帶T等位基因的個(gè)體HDL-C水平降低。這可能導(dǎo)致膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)受阻，使得膽固醇在血管壁逐漸沉積，啟動(dòng)和促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。隨著動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展，冠狀動(dòng)