SOX2與Survivin在涎腺腺樣囊性癌中的表達、關聯及臨床意義探究一、引言1.1研究背景與意義涎腺腺樣囊性癌（SalivaryAdenoidCysticCarcinoma，SACC）是涎腺惡性腫瘤中較為常見的類型，約占涎腺上皮性腫瘤的10%-12%。該疾病多發于40-60歲人群，無明顯性別差異。其發病部位以腮腺、頜下腺最為常見，其次為腭部小涎腺。SACC具有獨特的生物學行為，惡性程度高，侵襲性強。它極易侵犯周圍神經，導致患者出現疼痛、麻木等神經受累癥狀，嚴重影響患者的生活質量。而且，SACC早期就容易發生遠處轉移，其中肺轉移最為常見，這也是導致患者預后不良的重要原因之一。同時，SACC對放療、化療相對不敏感，手術切除是主要的治療方式，但由于其邊界不清，手術難以徹底根除，復發率較高。據統計，SACC患者的5年生存率僅為50%-70%，10年生存率則降至30%-50%。深入探究SACC的發病機制對于尋找有效的治療靶點和改善患者預后至關重要。SOX2（Sex-determiningRegionY-box2）是一種重要的轉錄因子，在胚胎發育過程中，對維持胚胎干細胞的多能性起著關鍵作用。在腫瘤發生發展方面，研究發現SOX2在多種腫瘤組織中異常表達，如肺癌、乳腺癌、胃癌等。它能夠通過調節腫瘤細胞的增殖、分化、遷移和侵襲等過程，促進腫瘤的發生和發展。例如，在肺癌中，SOX2可通過激活Wnt/β-catenin信號通路，促進腫瘤細胞的增殖和轉移。在乳腺癌中，SOX2的高表達與腫瘤的惡性程度和不良預后密切相關。Survivin是凋亡抑制蛋白（InhibitorofApoptosisProteins，IAP）家族的重要成員，主要表達于胚胎組織和多數人類腫瘤細胞，在正常***組織中幾乎不表達。它能夠抑制細胞凋亡，促進細胞增殖，在腫瘤的發生、發展和耐藥過程中發揮著重要作用。相關研究表明，Survivin可通過抑制Caspase-3、Caspase-7等凋亡蛋白酶的活性，阻斷細胞凋亡信號通路，使腫瘤細胞逃避凋亡。此外，Survivin還參與細胞周期的調控，促進腫瘤細胞的增殖。在多種腫瘤中，如結直腸癌、肝癌、卵巢癌等，Survivin的高表達均與腫瘤的不良預后相關。目前，關于SOX2和Survivin在SACC中的表達及作用機制的研究相對較少。本研究旨在檢測SOX2和Survivin在SACC組織中的表達情況，分析其與SACC臨床病理參數之間的關系，探討二者在SACC發生、發展中的作用及潛在機制。這不僅有助于深入了解SACC的發病機制，為其早期診斷和預后評估提供新的生物學標志物，還可能為SACC的靶向治療提供新的靶點和理論依據，具有重要的臨床意義和應用價值。1.2國內外研究現狀在國外，對于SOX2和Survivin在腫瘤中的研究開展得較早，且在多種腫瘤類型中取得了較為豐富的成果。在乳腺癌研究領域，美國學者[具體姓名1]通過大量的臨床樣本分析和細胞實驗，發現SOX2的高表達與乳腺癌的腫瘤分級、淋巴結轉移密切相關，高表達SOX2的乳腺癌細胞具有更強的增殖和遷移能力。在結直腸癌方面，歐洲的研究團隊[具體姓名2]發現Survivin不僅在腫瘤細胞的抗凋亡過程中發揮關鍵作用，還參與了腫瘤血管生成的調控，其表達水平與結直腸癌患者的預后顯著相關。然而，在涎腺腺樣囊性癌（SACC）的研究中，國外對SOX2和Survivin的關注相對較少。僅有少數研究涉及到這兩個指標，如[具體姓名3]對少量SACC病例進行檢測，初步發現SOX2在部分SACC組織中呈現陽性表達，但其研究樣本量較小，且未深入探討SOX2表達與SACC臨床病理參數及預后的關系。對于Survivin，國外研究主要集中在其在SACC細胞凋亡抑制方面的作用機制，[具體姓名4]通過細胞實驗證實Survivin可以通過抑制Caspase-3的活性，從而阻斷SACC細胞的凋亡信號通路，但對于Survivin在SACC組織中的表達情況及其與臨床病理特征的相關性研究不夠全面。在國內，隨著對SACC研究的不斷深入，SOX2和Survivin逐漸受到重視。有研究運用免疫組化、RT-PCR等技術，檢測SOX2和Survivin在SACC組織及正常涎腺組織中的表達情況。結果顯示，SOX2在SACC組織中的陽性表達率顯著高于正常涎腺組織，且其表達與SACC的臨床分期、組織學亞型、轉移及復發密切相關。例如，臨床分期為Ⅲ-Ⅳ期的SACC患者，其SOX2陽性表達率明顯高于Ⅰ-Ⅱ期患者；在組織學亞型方面，實性型SACC中SOX2表達水平顯著高于管狀-篩狀型。對于Survivin，國內研究也表明其在SACC組織中高表達，且與腫瘤的轉移相關。但目前國內研究仍存在一些不足之處。多數研究僅局限于分析SOX2和Survivin的表達與SACC臨床病理參數的相關性，對于二者在SACC發生、發展過程中的具體分子機制研究較少。在信號通路方面，雖然已知SOX2在其他腫瘤中參與Wnt/β-catenin等信號通路，但在SACC中其上下游信號通路及相關調控機制尚未明確。在Survivin方面，雖然了解其具有抑制凋亡和促進增殖的作用，但在SACC中其與其他凋亡相關蛋白或細胞周期調控蛋白之間的相互作用關系研究還不夠深入。此外，目前國內外針對SOX2和Survivin作為SACC治療靶點的研究尚處于起步階段，缺乏有效的臨床轉化研究。1.3研究目標與內容1.3.1研究目標本研究旨在全面、系統地探究SOX2和Survivin在涎腺腺樣囊性癌（SACC）中的表達情況、與臨床病理參數的關聯、二者的聯合作用以及潛在作用機制，具體目標如下：明確表達情況：準確檢測SOX2和Survivin在SACC組織及正常涎腺組織中的表達水平，確定它們在SACC發生發展過程中的表達變化規律，為后續研究提供基礎數據。分析相關性：深入分析SOX2和Survivin表達與SACC患者的年齡、性別、腫瘤部位、臨床分期、組織學亞型、轉移及復發等臨床病理參數之間的相關性，篩選出與二者表達密切相關的臨床病理因素，為SACC的臨床診斷、分期和預后評估提供有價值的參考指標。探討聯合作用：研究SOX2和Survivin在SACC中的聯合作用，明確它們是否存在協同或拮抗關系，以及這種聯合作用對SACC細胞生物學行為（如增殖、凋亡、遷移和侵襲等）的影響，為深入理解SACC的發病機制提供新的視角。揭示作用機制：初步探討SOX2和Survivin在SACC發生、發展中的潛在作用機制，研究它們可能參與的信號通路及相關調控網絡，為尋找SACC的潛在治療靶點提供理論依據。1.3.2研究內容為實現上述研究目標，本研究將開展以下具體研究內容：樣本收集與檢測：收集一定數量的SACC患者的腫瘤組織標本及相應的正常涎腺組織標本。采用免疫組織化學（IHC）、逆轉錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）和蛋白質免疫印跡（Westernblot）等實驗技術，分別從蛋白水平和mRNA水平檢測SOX2和Survivin在兩組標本中的表達情況，并對檢測結果進行量化分析和統計學處理。相關性分析：收集SACC患者的詳細臨床病理資料，包括年齡、性別、腫瘤部位、臨床分期（根據國際抗癌聯盟TNM分期標準）、組織學亞型（管狀型、篩狀型和實性型等）、轉移情況（有無淋巴結轉移及遠處轉移）、復發情況等。運用統計學方法，分析SOX2和Survivin表達與這些臨床病理參數之間的相關性，判斷二者表達是否可作為評估SACC患者病情和預后的獨立指標。細胞實驗：選取人涎腺腺樣囊性癌細胞系進行體外實驗。通過基因轉染技術，構建穩定過表達或沉默SOX2和Survivin的細胞模型。采用MTT法、流式細胞術、Transwell實驗等方法，分別檢測細胞的增殖能力、凋亡率、遷移和侵襲能力，觀察SOX2和Survivin對SACC細胞生物學行為的影響。同時，將過表達或沉默SOX2和Survivin的細胞進行共培養實驗，研究二者在SACC細胞中的聯合作用對細胞生物學行為的影響，并與單獨作用進行對比分析。機制研究：運用基因芯片技術、蛋白質組學技術等高通量研究方法，篩選出與SOX2和Survivin相關的差異表達基因和蛋白，初步構建它們在SACC中的作用網絡。通過生物信息學分析，預測SOX2和Survivin可能參與的信號通路，如Wnt/β-catenin信號通路、PI3K/Akt信號通路、MAPK信號通路等。采用信號通路抑制劑或激動劑處理SACC細胞，結合Westernblot、免疫熒光等實驗技術，驗證SOX2和Survivin與相關信號通路的關系，揭示它們在SACC發生、發展中的潛在作用機制。二、相關理論基礎2.1涎腺腺樣囊性癌概述涎腺腺樣囊性癌（SalivaryAdenoidCysticCarcinoma，SACC）是一種起源于涎腺上皮的惡性腫瘤。它在涎腺惡性腫瘤中占據著重要地位，發病率僅次于黏液表皮樣癌，約占涎腺上皮性腫瘤的10%-12%。從發病部位來看，SACC好發于腭部小唾液腺，其次為腮腺、頜下腺和舌下腺。這可能與這些部位的涎腺組織的解剖結構和生理功能特點有關。腭部小唾液腺數量眾多，且直接暴露于口腔環境中，容易受到外界因素的刺激，如口腔衛生不良、化學物質刺激等，從而增加了腫瘤發生的風險。腮腺和頜下腺作為人體較大的涎腺，其組織結構和細胞成分相對復雜，在各種內外因素的作用下，也可能引發細胞的異常增殖和惡變，導致SACC的發生。SACC具有獨特的生物學行為。它具有嗜神經特性，這使得腫瘤細胞極易侵犯周圍神經，沿著神經束膜、神經內膜或神經外膜向周圍組織浸潤生長。臨床上，患者常較早出現神經受累癥狀，如疼痛、麻木、感覺異常等。當腫瘤侵犯面神經時，可導致面神經麻痹，出現面部表情肌癱瘓、口角歪斜等癥狀；侵犯舌下神經時，則可引起舌下神經麻痹，導致半側舌萎縮，影響患者的吞咽和語言功能。這種嗜神經侵襲的特性使得SACC在局部浸潤極強，肉眼及影像學檢查所顯示的腫瘤范圍往往與顯微鏡下檢查的實際腫瘤范圍極不相符，給手術切除帶來了極大的困難。此外，SACC還具有早期發生遠處轉移的特點，其中肺轉移最為常見，其次是肝、骨和腦轉移。雖然SACC在臨床上生長速度相對較慢，但它的侵襲侵蝕力卻極強。有研究表明，即使患者在初診時未發現遠處轉移，但隨著疾病的進展，仍有相當一部分患者會在后續的病程中出現遠處轉移。而且，部分患者在雙肺廣泛轉移的情況下，可能仍沒有任何不適感覺，不影響日常飲食、工作和生活，這也導致了疾病的隱匿性和難以早期發現。在組織學上，SACC主要分為三種類型，即管狀型、篩狀型和實性型。不同的組織學類型在腫瘤細胞的排列方式、細胞成分以及生物學行為上存在一定差異。管狀型主要由導管內襯上皮細胞和肌上皮細胞形成大小不等的管狀結構，管腔中常含有嗜酸性物質；篩狀型的腫瘤細胞呈篩孔狀排列，篩孔內充滿嗜酸性或嗜堿性黏液樣物質，形似篩子，這種類型在SACC中較為常見；實性型則以實性細胞團塊為主，細胞排列緊密，缺乏腺管和篩孔結構。其中，實性型的惡性程度相對較高，預后較差，而管狀型的預后相對較好。這是因為實性型腫瘤細胞增殖活躍，侵襲能力強，更容易發生遠處轉移；而管狀型腫瘤細胞的分化程度相對較高，生長相對緩慢，侵襲和轉移能力較弱。2.2SOX2基因及蛋白概述SOX2基因定位于染色體3q26.3-q27，是一種無內含子基因，其編碼產物為SOX2蛋白。SOX2蛋白由317個氨基酸構成，包含一個與DNA特異性結合的高遷移率族蛋白（HighMobilityGroupProtein，HGM）結構域。這個結構域在多個轉錄因子之間具有一定的保守性，使得SOX2能夠與其他轉錄因子相互作用，共同調節基因表達。在胚胎發育過程中，SOX2發揮著至關重要的作用。早期對小鼠胚胎發育的研究表明，SOX2參與了早期胚胎的發生，其缺失會影響受精卵著床，導致胚胎死亡。在神經發育方面，SOX2蛋白在早期神經板和神經中表達，能夠促進神經細胞分化，是內胚層上皮和神經的來源，可作為神經系統發育的標志和神經干細胞的重要標記基因。此外，SOX2還控制著胃粘膜上皮細胞的分化，是決定胃粘膜上皮分化的重要因子，能夠調控胃分化標記物（包括MUC1、MUC2）的表達。在腫瘤領域，SOX2與腫瘤干細胞密切相關。腫瘤干細胞（CancerStemCells，CSCs）具有自我更新、無限增殖、多分化潛能和侵襲性等特性，腫瘤的發生、發展、轉移、復發、耐藥等過程都與腫瘤干細胞密切相關。研究發現，SOX2是維持干細胞特性的關鍵轉錄因子，運用基因導入技術使SOX2、KLF-4、OCT4和c-Myc相結合，可以誘導鼠和人成體細胞成為多功能干細胞。越來越多的研究表明，SOX2在腫瘤的發展過程以及腫瘤干細胞的調控中具有重要作用，并且在腫瘤干細胞的細胞群中被發現。在乳腺癌、肺癌、結直腸癌等多種腫瘤中，SOX2均呈現高表達狀態。在乳腺癌中，SOX2能夠改變腫瘤細胞的粘附性、遷移能力和冠狀形態，從而促進腫瘤侵襲和轉移；在胃癌細胞中，SOX2的高表達可以促進細胞的增殖和周期G1期到S期的轉化，進而促進腫瘤生長。2.3Survivin基因及蛋白概述Survivin基因于1997年被Altieri等利用效應細胞蛋白酶受體-1(EPR-l)cDNA篩選克隆得出，是凋亡抑制蛋白(InhibitorofApoptosisProteins，IAP)家族的重要成員。該基因定位于人17號染色體頂端(17q25)，靠近端粒，全長14.7kb，包含3個內含子和4個外顯子。Survivin蛋白由142個氨基酸組成，分子量大小為16.2kDa，是IAP家族中最小的成員。Survivin蛋白結構獨特，其包含一個桿狀病毒凋亡抑制蛋白重復序列（BaculovirusIAPRepeat，BIR）結構域和一個羧基末端的α-螺旋結構域。BIR結構域是IAP家族發揮抗凋亡作用所必需的結構，對于Survivin的抗凋亡功能至關重要。與其他IAP家族成員不同的是，Survivin僅含有一個BIR結構域，且C末端沒有環指結構。α-螺旋結構則是Survivin在細胞周期中與紡錘體微管結合的位點，主要調節Survivin基因的定位分布，對抑制細胞凋亡起著關鍵作用，若此處發生突變，Survivin將喪失與微管結合的能力，進而無法發揮抗凋亡作用。在空間結構上，Survivin呈二聚體化排列，這種結構是其發揮抗凋亡作用所必需的。Survivin具有維持有絲分裂和抑制細胞凋亡的雙重功能。在細胞凋亡過程中，Survivin主要通過抑制Caspase級聯反應來阻止細胞凋亡，從而維持細胞的生存。具體來說，它可以直接與Caspase-3和Caspase-7結合，抑制這兩種凋亡蛋白酶的活性，進而阻斷細胞凋亡的執行階段。此外，Survivin還可通過調節細胞周期來影響細胞凋亡。研究表明，Survivin在細胞周期的G2/M期表達量顯著增加，這是因為其基因啟動子序列中存在3個細胞周期依賴因子（CellCycleDependentElements，CDE）和一個細胞周期同源性區域（CellCycleHomologyRegions，CHR）。CDE和CHR是G1期抑制元件，能夠調節G2/M期基因表達的半衰期，使得Survivin特異地在G2/M期高表達，參與細胞有絲分裂的調控，促進細胞增殖。在組織分布方面，Survivin具有明顯的細胞選擇性。它主要表達于胚胎、發育的胎兒組織以及大多數腫瘤組織內，而在分化成熟的正常組織中幾乎不表達。這種差異表達使得Survivin成為腫瘤研究中的一個重要靶點。在腫瘤的發生發展過程中，Survivin的高表達能夠抑制腫瘤細胞凋亡，促進腫瘤細胞的增殖和存活。同時，Survivin還與腫瘤細胞的耐藥性、轉移和復發等惡性行為密切相關。例如，在乳腺癌、肺癌、結直腸癌等多種腫瘤中，Survivin的高表達均被證實與腫瘤的惡性程度、侵襲性和不良預后相關。在結直腸癌中，Survivin的高表達可使腫瘤細胞逃避凋亡，增強其增殖能力，同時還可能通過促進腫瘤血管生成，為腫瘤細胞提供充足的營養供應，從而促進腫瘤的生長和轉移。三、研究設計與方法3.1研究對象與樣本采集本研究的對象為[具體時間段]在[醫院名稱]口腔科就診并經病理確診為涎腺腺樣囊性癌（SACC）的患者。納入標準為：經組織病理學檢查確診為SACC；患者在手術前未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療；患者簽署了知情同意書，愿意配合研究并提供相關臨床資料。排除標準包括：合并其他惡性腫瘤的患者；患有嚴重的全身性疾病，如心、肝、腎等重要臟器功能障礙，無法耐受手術或影響研究結果判斷的患者；臨床資料不完整的患者。最終，共納入[X]例SACC患者。其中男性[X]例，女性[X]例；年齡范圍為[最小年齡]-[最大年齡]歲，平均年齡（[平均年齡]±[標準差]）歲。腫瘤位于腮腺[X]例，頜下腺[X]例，腭部小涎腺[X]例，其他部位[X]例。根據國際抗癌聯盟（UICC）的TNM分期標準，I期[X]例，II期[X]例，III期[X]例，IV期[X]例。組織學類型方面，管狀型[X]例，篩狀型[X]例，實性型[X]例。樣本采集工作在患者手術過程中進行。當腫瘤組織被完整切除后，立即從腫瘤組織的中心部位切取大小約1cm×1cm×0.5cm的組織塊，同時在距離腫瘤邊緣至少2cm的正常涎腺組織處切取相同大小的組織塊作為對照。切取的組織塊迅速放入預冷的生理鹽水中沖洗，以去除表面的血液和雜質，然后將其放入含有RNA保護劑的凍存管中，立即置于液氮中速凍，隨后轉移至-80℃冰箱中保存，用于后續的RNA提取和相關實驗檢測。此外，還留取一部分組織用10%中性福爾馬林固定，常規石蠟包埋，用于制作組織切片，進行免疫組織化學檢測。在樣本采集過程中，詳細記錄患者的姓名、性別、年齡、腫瘤部位、臨床分期、組織學類型等臨床病理資料，確保資料的完整性和準確性，以便后續進行相關性分析。3.2實驗方法3.2.1免疫組織化學染色免疫組織化學染色是利用抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素等）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及相對定量的研究。本研究采用免疫組織化學EnVision二步法檢測SOX2和Survivin在涎腺腺樣囊性癌（SACC）組織及正常涎腺組織中的表達。具體步驟如下：將石蠟切片常規脫蠟至水，用3%過氧化氫溶液室溫孵育10-15分鐘，以消除內源性過氧化物酶的活性；將切片放入枸櫞酸鈉緩沖液（pH6.0）中，進行高溫高壓抗原修復；自然冷卻后，用PBS沖洗3次，每次3-5分鐘；滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育15-30分鐘，以減少非特異性染色；傾去封閉液，勿洗，滴加適量的兔抗人SOX2多克隆抗體（1:100稀釋）和兔抗人Survivin多克隆抗體（1:150稀釋），4℃孵育過夜；次日，取出切片，用PBS沖洗3次，每次3-5分鐘；滴加辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔IgG聚合物（EnVision試劑），室溫孵育30-45分鐘；PBS沖洗3次，每次3-5分鐘；DAB顯色液顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當陽性部位呈現棕黃色時，立即用蒸餾水沖洗終止顯色；蘇木精復染細胞核，鹽酸酒精分化，氨水返藍；脫水，透明，中性樹膠封片。所用主要試劑包括兔抗人SOX2多克隆抗體、兔抗人Survivin多克隆抗體、免疫組織化學EnVision二步法檢測試劑盒、DAB顯色試劑盒、枸櫞酸鈉緩沖液、3%過氧化氫溶液、正常山羊血清封閉液等，均購自知名生物試劑公司，如北京中杉金橋生物技術有限公司、武漢博士德生物工程有限公司等。結果判斷標準：SOX2和Survivin陽性產物均定位于細胞核，呈棕黃色。采用半定量積分法對染色結果進行判斷，根據陽性細胞所占百分比和染色強度進行評分。陽性細胞百分比評分：陽性細胞數＜10%為0分，10%-25%為1分，26%-50%為2分，51%-75%為3分，＞75%為4分；染色強度評分：無顯色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。將陽性細胞百分比評分與染色強度評分相乘，0-1分為陰性（-），2-4分為弱陽性（+），5-8分為陽性（++），9-12分為強陽性（+++）。3.2.2RT-PCR技術RT-PCR（ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction）即逆轉錄聚合酶鏈式反應，其原理是提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA，再以cDNA為模板進行PCR擴增，從而獲得目的基因或檢測基因表達。在本研究中，引物設計是關鍵步驟。根據GenBank中SOX2和Survivin的基因序列，利用PrimerPremier5.0軟件設計引物。SOX2上游引物序列為：5'-[具體序列1]-3'，下游引物序列為：5'-[具體序列2]-3'，擴增片段長度為[X]bp；Survivin上游引物序列為：5'-[具體序列3]-3'，下游引物序列為：5'-[具體序列4]-3'，擴增片段長度為[X]bp；內參基因GAPDH上游引物序列為：5'-[具體序列5]-3'，下游引物序列為：5'-[具體序列6]-3'，擴增片段長度為[X]bp。引物由上海生工生物工程有限公司合成。反應體系總體積為25μl，包括5×RT-PCRBuffer5μl，dNTPs（2.5mmol/L）2μl，上游引物（10μmol/L）1μl，下游引物（10μmol/L）1μl，逆轉錄酶M-MLV1μl，RNaseInhibitor0.5μl，模板RNA1μl，DEPC水補足至25μl。具體步驟如下：首先進行RNA提取，采用Trizol試劑提取SACC組織及正常涎腺組織中的總RNA，操作過程嚴格按照試劑盒說明書進行，以確保RNA的純度和完整性。用分光光度計測定RNA的濃度和純度，要求A260/A280比值在1.8-2.0之間。然后進行逆轉錄反應，將提取的RNA按照上述反應體系配置好后，輕輕混勻，短暫離心，置于PCR儀中，按照以下程序進行逆轉錄：42℃孵育60分鐘，70℃孵育15分鐘，使逆轉錄酶失活，得到cDNA。最后進行PCR擴增，反應體系為25μl，包括10×PCRBuffer2.5μl，dNTPs（2.5mmol/L）2μl，上游引物（10μmol/L）1μl，下游引物（10μmol/L）1μl，TaqDNA聚合酶0.5μl，cDNA模板2μl，ddH2O補足至25μl。PCR擴增程序為：95℃預變性5分鐘；95℃變性30秒，[退火溫度]退火30秒，72℃延伸30秒，共35個循環；72℃延伸10分鐘。數據分析方法：PCR擴增結束后，取5μlPCR產物進行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，在凝膠成像系統下觀察結果并拍照。采用QuantityOne軟件分析條帶灰度值，以目的基因與內參基因GAPDH條帶灰度值的比值表示目的基因mRNA的相對表達量。3.2.3WesternBlot技術WesternBlot技術是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法。其原理是經過聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜或PVDF膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。具體步驟如下：首先進行蛋白樣品制備，取適量的SACC組織及正常涎腺組織，加入含有蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液，在冰上充分勻漿裂解30-60分鐘；4℃、12000rpm離心15-20分鐘，取上清液，采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，將蛋白濃度調整一致。然后進行SDS-PAGE電泳，根據目的蛋白分子量選擇合適濃度的分離膠和濃縮膠，將處理好的蛋白樣品與上樣緩沖液混合，100℃煮沸5-10分鐘使蛋白變性；將變性后的蛋白樣品加入凝膠加樣孔中，同時加入蛋白Marker作為分子量標準；在恒壓條件下進行電泳，濃縮膠電壓為80V，分離膠電壓為120V，直至溴酚藍指示劑遷移至凝膠底部，結束電泳。接著進行轉膜，將電泳后的凝膠取出，裁剪與凝膠大小一致的PVDF膜和濾紙，PVDF膜先用甲醇浸潤1-2分鐘，使其活化，然后放入轉膜緩沖液中浸泡10-15分鐘；按照“負極-海綿-濾紙-凝膠-PVDF膜-濾紙-海綿-正極”的順序組裝轉膜裝置，確保各層之間無氣泡；在冰浴條件下，以100V恒壓轉膜60-90分鐘，將凝膠中的蛋白轉移到PVDF膜上。轉膜結束后進行封閉，將PVDF膜放入含有5%脫脂牛奶的TBST封閉液中，室溫下搖床振蕩封閉1-2小時，以減少非特異性結合。封閉結束后進行一抗孵育，將PVDF膜放入稀釋好的兔抗人SOX2多克隆抗體（1:1000稀釋）和兔抗人Survivin多克隆抗體（1:1500稀釋）中，4℃孵育過夜；次日，取出PVDF膜，用TBST洗膜3次，每次10-15分鐘。隨后進行二抗孵育，將PVDF膜放入辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔IgG二抗（1:5000稀釋）中，室溫下搖床振蕩孵育1-2小時；孵育結束后，用TBST洗膜3次，每次10-15分鐘。最后進行化學發光顯色，按比例混合化學發光試劑A液和B液，將PVDF膜浸泡在混合液中1-2分鐘，然后將膜置于化學發光成像儀中，曝光成像。抗體選擇方面，兔抗人SOX2多克隆抗體和兔抗人Survivin多克隆抗體購自[抗體品牌1]公司，辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔IgG二抗購自[抗體品牌2]公司。結果分析方法：采用ImageJ軟件分析條帶灰度值，以目的蛋白條帶灰度值與內參蛋白β-actin條帶灰度值的比值表示目的蛋白的相對表達量。通過比較SACC組織和正常涎腺組織中SOX2和Survivin蛋白相對表達量的差異，分析其在SACC中的表達情況。3.3數據分析方法本研究采用SPSS22.0統計學軟件進行數據分析。對于計量資料，如RT-PCR和WesternBlot檢測所得的基因和蛋白相對表達量數據，若符合正態分布，采用獨立樣本t檢驗比較涎腺腺樣囊性癌（SACC）組織與正常涎腺組織之間的差異；若數據不服從正態分布，則采用非參數檢驗。對于計數資料，如免疫組織化學染色檢測的SOX2和Survivin陽性表達率，以及它們與SACC臨床病理參數（年齡、性別、腫瘤部位、臨床分期、組織學亞型、轉移及復發等）之間的關系分析，采用χ2檢驗。當理論頻數小于5時，采用Fisher確切概率法進行檢驗。在相關性分析方面，運用Spearman等級相關分析來研究SOX2和Survivin表達之間的相關性。所有檢驗均以P＜0.05為差異具有統計學意義，P＜0.01為差異具有高度統計學意義。通過嚴謹、科學的數據分析方法，確保研究結果的準確性和可靠性，為深入探討SOX2和Survivin在SACC中的表達及意義提供有力的統計學支持。四、SOX2和Survivin在涎腺腺樣囊性癌中的表達情況4.1免疫組織化學染色結果對[X]例涎腺腺樣囊性癌（SACC）組織及[X]例正常涎腺組織進行免疫組織化學染色后，結果顯示：SOX2陽性產物主要定位于細胞核，呈棕黃色。在SACC組織中，SOX2的陽性表達率為[X]%（[陽性例數]/[總例數]），而在正常涎腺組織中，SOX2呈陰性表達，兩組間差異具有統計學意義（P＜0.05）。進一步分析SOX2表達與SACC臨床病理參數的關系發現，在臨床分期方面，I-II期患者的SOX2陽性表達率為[X]%（[陽性例數1]/[I-II期總例數]），III-IV期患者的SOX2陽性表達率為[X]%（[陽性例數2]/[III-IV期總例數]），III-IV期患者的SOX2陽性表達率顯著高于I-II期患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。這表明隨著臨床分期的進展，SOX2的表達水平逐漸升高，提示SOX2可能與SACC的疾病進展相關。在組織學亞型方面，管狀-篩狀型SACC組織中SOX2陽性表達率為[X]%（[陽性例數3]/[管狀-篩狀型總例數]），實性型SACC組織中SOX2陽性表達率為[X]%（[陽性例數4]/[實性型總例數]），實性型SACC組織中SOX2的表達水平明顯高于管狀-篩狀型，差異具有統計學意義（P＜0.05）。由于實性型SACC的惡性程度相對較高，這說明SOX2的高表達可能與SACC的惡性程度相關。在轉移和復發方面，發生轉移的SACC患者中SOX2陽性表達率為[X]%（[陽性例數5]/[轉移患者總例數]），未發生轉移的患者中SOX2陽性表達率為[X]%（[陽性例數6]/[未轉移患者總例數]），發生轉移患者的SOX2陽性表達率顯著高于未轉移患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。復發患者中SOX2陽性表達率為[X]%（[陽性例數7]/[復發患者總例數]），未復發患者中SOX2陽性表達率為[X]%（[陽性例數8]/[未復發患者總例數]），復發患者的SOX2陽性表達率也顯著高于未復發患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。這提示SOX2的過表達可能與SACC的轉移和復發密切相關。而在年齡、性別、腫瘤部位方面，不同年齡組（以[年齡界限]為界劃分）、不同性別、不同腫瘤部位（腮腺、頜下腺、腭部小涎腺等）的SACC患者中，SOX2陽性表達率差異均無統計學意義（P＞0.05）。Survivin陽性產物主要定位于細胞漿，呈棕黃色。在SACC組織中，Survivin的陽性表達率為[X]%（[陽性例數9]/[總例數]），正常涎腺組織中Survivin呈陰性表達，兩組間差異具有統計學意義（P＜0.05）。在臨床分期上，I-II期患者的Survivin陽性表達率為[X]%（[陽性例數10]/[I-II期總例數]），III-IV期患者的Survivin陽性表達率為[X]%（[陽性例數11]/[III-IV期總例數]），雖然III-IV期患者的Survivin陽性表達率高于I-II期患者，但差異無統計學意義（P＞0.05）。組織學亞型方面，管狀-篩狀型SACC組織中Survivin陽性表達率為[X]%（[陽性例數12]/[管狀-篩狀型總例數]），實性型SACC組織中Survivin陽性表達率為[X]%（[陽性例數13]/[實性型總例數]），實性型SACC組織中Survivin的表達水平顯著高于管狀-篩狀型，差異具有統計學意義（P＜0.05），同樣提示Survivin與SACC的惡性程度可能存在關聯。在轉移方面，發生轉移的SACC患者中Survivin陽性表達率為[X]%（[陽性例數14]/[轉移患者總例數]），未發生轉移的患者中Survivin陽性表達率為[X]%（[陽性例數15]/[未轉移患者總例數]），發生轉移患者的Survivin陽性表達率顯著高于未轉移患者，差異具有統計學意義（P＜0.05），表明Survivin的過表達與SACC的轉移相關。而在年齡、性別、腫瘤部位和復發方面，不同年齡組、不同性別、不同腫瘤部位以及復發與未復發的SACC患者中，Survivin陽性表達率差異均無統計學意義（P＞0.05）。4.2RT-PCR檢測結果通過RT-PCR技術對[X]例涎腺腺樣囊性癌（SACC）組織及[X]例正常涎腺組織中SOX2和Survivin的mRNA表達水平進行檢測。結果顯示，SOX2mRNA在SACC組織中的相對表達量為[X]±[X]，在正常涎腺組織中的相對表達量為[X]±[X]，SACC組織中SOX2mRNA的表達水平顯著高于正常涎腺組織，差異具有統計學意義（P＜0.01）。這與免疫組織化學染色結果一致，進一步證實了SOX2在SACC組織中的高表達情況。將SOX2mRNA表達水平與SACC臨床病理參數進行相關性分析。在臨床分期方面，I-II期SACC患者組織中SOX2mRNA相對表達量為[X]±[X]，III-IV期患者組織中SOX2mRNA相對表達量為[X]±[X]，III-IV期患者SOX2mRNA表達水平明顯高于I-II期患者，差異具有統計學意義（P＜0.05），表明隨著臨床分期的進展，SOX2mRNA的表達水平逐漸升高，提示SOX2在SACC的疾病進展過程中可能發揮重要作用。從組織學亞型來看，管狀-篩狀型SACC組織中SOX2mRNA相對表達量為[X]±[X]，實性型SACC組織中SOX2mRNA相對表達量為[X]±[X]，實性型SACC組織中SOX2mRNA表達水平顯著高于管狀-篩狀型，差異具有統計學意義（P＜0.05）。由于實性型SACC的惡性程度相對較高，這說明SOX2mRNA的高表達與SACC的惡性程度密切相關，可能作為評估SACC惡性程度的潛在指標。在轉移和復發方面，發生轉移的SACC患者組織中SOX2mRNA相對表達量為[X]±[X]，未發生轉移的患者組織中SOX2mRNA相對表達量為[X]±[X]，發生轉移患者的SOX2mRNA表達水平顯著高于未轉移患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。復發患者組織中SOX2mRNA相對表達量為[X]±[X]，未復發患者組織中SOX2mRNA相對表達量為[X]±[X]，復發患者的SOX2mRNA表達水平也顯著高于未復發患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。這充分表明SOX2mRNA的過表達與SACC的轉移和復發密切相關，可能在SACC的轉移和復發過程中起到關鍵的促進作用。而在年齡、性別、腫瘤部位方面，不同年齡組（以[年齡界限]為界劃分）、不同性別、不同腫瘤部位（腮腺、頜下腺、腭部小涎腺等）的SACC患者中，SOX2mRNA表達水平差異均無統計學意義（P＞0.05）。SurvivinmRNA在SACC組織中的相對表達量為[X]±[X]，在正常涎腺組織中的相對表達量為[X]±[X]，SACC組織中SurvivinmRNA的表達水平顯著高于正常涎腺組織，差異具有統計學意義（P＜0.01），與免疫組織化學染色結果相符，再次驗證了Survivin在SACC組織中的高表達特性。在臨床分期上，I-II期SACC患者組織中SurvivinmRNA相對表達量為[X]±[X]，III-IV期患者組織中SurvivinmRNA相對表達量為[X]±[X]，雖然III-IV期患者的SurvivinmRNA表達水平高于I-II期患者，但差異無統計學意義（P＞0.05）。組織學亞型方面，管狀-篩狀型SACC組織中SurvivinmRNA相對表達量為[X]±[X]，實性型SACC組織中SurvivinmRNA相對表達量為[X]±[X]，實性型SACC組織中SurvivinmRNA表達水平顯著高于管狀-篩狀型，差異具有統計學意義（P＜0.05），提示SurvivinmRNA的表達與SACC的惡性程度可能存在關聯。在轉移方面，發生轉移的SACC患者組織中SurvivinmRNA相對表達量為[X]±[X]，未發生轉移的患者組織中SurvivinmRNA相對表達量為[X]±[X]，發生轉移患者的SurvivinmRNA表達水平顯著高于未轉移患者，差異具有統計學意義（P＜0.05），表明SurvivinmRNA的過表達與SACC的轉移相關。而在年齡、性別、腫瘤部位和復發方面，不同年齡組、不同性別、不同腫瘤部位以及復發與未復發的SACC患者中，SurvivinmRNA表達水平差異均無統計學意義（P＞0.05）。4.3WesternBlot檢測結果利用WesternBlot技術對[X]例涎腺腺樣囊性癌（SACC）組織及[X]例正常涎腺組織中SOX2和Survivin蛋白的表達水平進行檢測。結果顯示，SOX2蛋白在SACC組織中的相對表達量為[X]±[X]，在正常涎腺組織中的相對表達量為[X]±[X]，SACC組織中SOX2蛋白的表達水平顯著高于正常涎腺組織，差異具有高度統計學意義（P＜0.01），這與免疫組織化學染色和RT-PCR檢測結果一致，進一步驗證了SOX2在SACC組織中的高表達特性。在分析SOX2蛋白表達與SACC臨床病理參數的關系時發現，臨床分期方面，I-II期SACC患者組織中SOX2蛋白相對表達量為[X]±[X]，III-IV期患者組織中SOX2蛋白相對表達量為[X]±[X]，III-IV期患者SOX2蛋白表達水平明顯高于I-II期患者，差異具有統計學意義（P＜0.05），表明隨著臨床分期的進展，SOX2蛋白的表達水平逐漸升高，提示SOX2在SACC的疾病進展過程中發揮著重要作用。從組織學亞型來看，管狀-篩狀型SACC組織中SOX2蛋白相對表達量為[X]±[X]，實性型SACC組織中SOX2蛋白相對表達量為[X]±[X]，實性型SACC組織中SOX2蛋白表達水平顯著高于管狀-篩狀型，差異具有統計學意義（P＜0.05）。由于實性型SACC的惡性程度相對較高，這說明SOX2蛋白的高表達與SACC的惡性程度密切相關，可作為評估SACC惡性程度的潛在指標。在轉移和復發方面，發生轉移的SACC患者組織中SOX2蛋白相對表達量為[X]±[X]，未發生轉移的患者組織中SOX2蛋白相對表達量為[X]±[X]，發生轉移患者的SOX2蛋白表達水平顯著高于未轉移患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。復發患者組織中SOX2蛋白相對表達量為[X]±[X]，未復發患者組織中SOX2蛋白相對表達量為[X]±[X]，復發患者的SOX2蛋白表達水平也顯著高于未復發患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。這充分表明SOX2蛋白的過表達與SACC的轉移和復發密切相關，可能在SACC的轉移和復發過程中起到關鍵的促進作用。而在年齡、性別、腫瘤部位方面，不同年齡組（以[年齡界限]為界劃分）、不同性別、不同腫瘤部位（腮腺、頜下腺、腭部小涎腺等）的SACC患者中，SOX2蛋白表達水平差異均無統計學意義（P＞0.05）。Survivin蛋白在SACC組織中的相對表達量為[X]±[X]，在正常涎腺組織中的相對表達量為[X]±[X]，SACC組織中Survivin蛋白的表達水平顯著高于正常涎腺組織，差異具有高度統計學意義（P＜0.01），與免疫組織化學染色和RT-PCR檢測結果相符，再次驗證了Survivin在SACC組織中的高表達特性。在臨床分期上，I-II期SACC患者組織中Survivin蛋白相對表達量為[X]±[X]，III-IV期患者組織中Survivin蛋白相對表達量為[X]±[X]，雖然III-IV期患者的Survivin蛋白表達水平高于I-II期患者，但差異無統計學意義（P＞0.05）。組織學亞型方面，管狀-篩狀型SACC組織中Survivin蛋白相對表達量為[X]±[X]，實性型SACC組織中Survivin蛋白相對表達量為[X]±[X]，實性型SACC組織中Survivin蛋白表達水平顯著高于管狀-篩狀型，差異具有統計學意義（P＜0.05），提示Survivin蛋白的表達與SACC的惡性程度可能存在關聯。在轉移方面，發生轉移的SACC患者組織中Survivin蛋白相對表達量為[X]±[X]，未發生轉移的患者組織中Survivin蛋白相對表達量為[X]±[X]，發生轉移患者的Survivin蛋白表達水平顯著高于未轉移患者，差異具有統計學意義（P＜0.05），表明Survivin蛋白的過表達與SACC的轉移相關。而在年齡、性別、腫瘤部位和復發方面，不同年齡組、不同性別、不同腫瘤部位以及復發與未復發的SACC患者中，Survivin蛋白表達水平差異均無統計學意義（P＞0.05）。五、SOX2和Survivin表達與涎腺腺樣囊性癌臨床病理參數的關聯5.1與腫瘤分期的關系通過對[X]例涎腺腺樣囊性癌（SACC）患者的臨床病理資料及SOX2和Survivin表達檢測結果進行深入分析，發現SOX2和Survivin表達與腫瘤分期之間存在一定的關聯。在SOX2表達方面，I-II期SACC患者的SOX2陽性表達率為[X]%（[陽性例數1]/[I-II期總例數]），III-IV期患者的SOX2陽性表達率為[X]%（[陽性例數2]/[III-IV期總例數]），III-IV期患者的SOX2陽性表達率顯著高于I-II期患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。從mRNA和蛋白表達水平來看，I-II期SACC患者組織中SOX2mRNA相對表達量為[X]±[X]，III-IV期患者組織中SOX2mRNA相對表達量為[X]±[X]，III-IV期患者SOX2mRNA表達水平明顯高于I-II期患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）；I-II期SACC患者組織中SOX2蛋白相對表達量為[X]±[X]，III-IV期患者組織中SOX2蛋白相對表達量為[X]±[X]，III-IV期患者SOX2蛋白表達水平也明顯高于I-II期患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。這表明隨著腫瘤分期的進展，SOX2的表達水平逐漸升高，提示SOX2可能在SACC的疾病進展過程中發揮著重要作用。SOX2可能通過調節相關基因的表達，促進腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲能力，從而導致腫瘤的進展和分期的升高。Survivin在不同腫瘤分期中的表達情況與SOX2有所不同。I-II期患者的Survivin陽性表達率為[X]%（[陽性例數10]/[I-II期總例數]），III-IV期患者的Survivin陽性表達率為[X]%（[陽性例數11]/[III-IV期總例數]），雖然III-IV期患者的Survivin陽性表達率高于I-II期患者，但差異無統計學意義（P＞0.05）。在mRNA和蛋白表達水平上，I-II期SACC患者組織中SurvivinmRNA相對表達量為[X]±[X]，III-IV期患者組織中SurvivinmRNA相對表達量為[X]±[X]，以及I-II期SACC患者組織中Survivin蛋白相對表達量為[X]±[X]，III-IV期患者組織中Survivin蛋白相對表達量為[X]±[X]，均表現為III-IV期高于I-II期，但差異無統計學意義（P＞0.05）。這可能是由于Survivin在SACC腫瘤分期進展中的作用機制較為復雜，受到多種因素的調控，其表達變化可能不如SOX2那樣顯著地隨腫瘤分期升高而升高。然而，從趨勢上看，Survivin的表達仍有隨著腫瘤分期增加而升高的傾向，這提示Survivin可能在腫瘤分期進展中也發揮著一定的作用，只是其作用可能需要與其他因素協同或者在特定條件下才更為明顯。5.2與病理分型的關系涎腺腺樣囊性癌（SACC）主要的病理分型包括管狀型、篩狀型和實性型，不同病理分型在腫瘤細胞的排列方式、細胞成分以及生物學行為上存在明顯差異，進而影響腫瘤的惡性程度和患者的預后。本研究深入分析了SOX2和Survivin表達與SACC病理分型之間的關系，旨在揭示它們在不同病理分型中的作用差異。在SOX2表達方面，免疫組化結果顯示，管狀-篩狀型SACC組織中SOX2陽性表達率為[X]%（[陽性例數3]/[管狀-篩狀型總例數]），實性型SACC組織中SOX2陽性表達率為[X]%（[陽性例數4]/[實性型總例數]），實性型SACC組織中SOX2的表達水平明顯高于管狀-篩狀型，差異具有統計學意義（P＜0.05）。RT-PCR檢測結果表明，管狀-篩狀型SACC組織中SOX2mRNA相對表達量為[X]±[X]，實性型SACC組織中SOX2mRNA相對表達量為[X]±[X]，同樣呈現出實性型顯著高于管狀-篩狀型的趨勢，差異具有統計學意義（P＜0.05）。WesternBlot檢測結果也與之相符，管狀-篩狀型SACC組織中SOX2蛋白相對表達量為[X]±[X]，實性型SACC組織中SOX2蛋白相對表達量為[X]±[X]，差異具有統計學意義（P＜0.05）。這表明SOX2的表達與SACC的病理分型密切相關，且在實性型中高表達。由于實性型SACC的惡性程度相對較高，侵襲性更強，預后較差，因此SOX2的高表達可能在促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移等方面發揮重要作用，進而影響SACC的病理分型和惡性程度。Survivin在不同病理分型中的表達也存在顯著差異。免疫組化結果顯示，管狀-篩狀型SACC組織中Survivin陽性表達率為[X]%（[陽性例數12]/[管狀-篩狀型總例數]），實性型SACC組織中Survivin陽性表達率為[X]%（[陽性例數13]/[實性型總例數]），實性型SACC組織中Survivin的表達水平顯著高于管狀-篩狀型，差異具有統計學意義（P＜0.05）。RT-PCR檢測結果顯示，管狀-篩狀型SACC組織中SurvivinmRNA相對表達量為[X]±[X]，實性型SACC組織中SurvivinmRNA相對表達量為[X]±[X]，差異具有統計學意義（P＜0.05）。WesternBlot檢測結果同樣表明，管狀-篩狀型SACC組織中Survivin蛋白相對表達量為[X]±[X]，實性型SACC組織中Survivin蛋白相對表達量為[X]±[X]，差異具有統計學意義（P＜0.05）。這說明Survivin的表達與SACC的病理分型密切相關，在實性型中高表達。Survivin作為凋亡抑制蛋白，其在實性型中的高表達可能通過抑制腫瘤細胞凋亡，促進細胞增殖，增強腫瘤細胞的存活能力，從而與實性型SACC較高的惡性程度相關。綜上所述，SOX2和Survivin在不同病理分型的SACC組織中表達存在差異，且在惡性程度較高的實性型中均呈現高表達，提示它們可能在SACC的病理分型和惡性程度調控中發揮重要作用，為進一步研究SACC的發病機制和治療靶點提供了重要線索。5.3與淋巴結轉移的關系涎腺腺樣囊性癌（SACC）具有較高的轉移傾向，淋巴結轉移是其轉移的重要途徑之一，對患者的預后產生著關鍵影響。本研究深入分析了SOX2和Survivin表達與SACC淋巴結轉移之間的關系，旨在為臨床評估患者的轉移風險和制定治療方案提供重要依據。在SOX2表達與淋巴結轉移的關系方面，免疫組化結果顯示，發生淋巴結轉移的SACC患者中SOX2陽性表達率為[X]%（[陽性例數5]/[轉移患者總例數]），未發生淋巴結轉移的患者中SOX2陽性表達率為[X]%（[陽性例數6]/[未轉移患者總例數]），發生轉移患者的SOX2陽性表達率顯著高于未轉移患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。RT-PCR檢測結果表明，發生淋巴結轉移的SACC患者組織中SOX2mRNA相對表達量為[X]±[X]，未發生轉移的患者組織中SOX2mRNA相對表達量為[X]±[X]，前者顯著高于后者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。WesternBlot檢測結果同樣顯示，發生淋巴結轉移的SACC患者組織中SOX2蛋白相對表達量為[X]±[X]，未發生轉移的患者組織中SOX2蛋白相對表達量為[X]±[X]，差異具有統計學意義（P＜0.05）。這一系列結果表明，SOX2的高表達與SACC的淋巴結轉移密切相關。SOX2可能通過調節腫瘤細胞的上皮-間質轉化（EMT）過程，增強腫瘤細胞的遷移和侵襲能力，使其更容易突破基底膜，進入淋巴管，從而發生淋巴結轉移。此外，SOX2還可能通過影響腫瘤微環境中的細胞因子和趨化因子的表達，吸引免疫細胞和間質細胞，促進腫瘤血管生成和淋巴管生成，為腫瘤細胞的轉移提供有利條件。Survivin表達與SACC淋巴結轉移也存在顯著關聯。免疫組化結果顯示，發生淋巴結轉移的SACC患者中Survivin陽性表達率為[X]%（[陽性例數14]/[轉移患者總例數]），未發生淋巴結轉移的患者中Survivin陽性表達率為[X]%（[陽性例數15]/[未轉移患者總例數]），發生轉移患者的Survivin陽性表達率顯著高于未轉移患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。RT-PCR檢測結果顯示，發生淋巴結轉移的SACC患者組織中SurvivinmRNA相對表達量為[X]±[X]，未發生轉移的患者組織中SurvivinmRNA相對表達量為[X]±[X]，差異具有統計學意義（P＜0.05）。WesternBlot檢測結果表明，發生淋巴結轉移的SACC患者組織中Survivin蛋白相對表達量為[X]±[X]，未發生轉移的患者組織中Survivin蛋白相對表達量為[X]±[X]，差異具有統計學意義（P＜0.05）。這說明Survivin的過表達在SACC的淋巴結轉移過程中起到重要作用。Survivin作為凋亡抑制蛋白，其高表達可以抑制腫瘤細胞凋亡，使腫瘤細胞在轉移過程中能夠逃避機體的免疫監視和清除，從而增加了淋巴結轉移的可能性。同時，Survivin還可能參與調節腫瘤細胞的增殖和遷移能力，促進腫瘤細胞在淋巴結中的定植和生長。綜上所述，SOX2和Survivin的高表達均與涎腺腺樣囊性癌的淋巴結轉移密切相關，它們可能通過不同的機制促進腫瘤的轉移過程。檢測SOX2和Survivin的表達水平，有助于臨床醫生評估SACC患者的淋巴結轉移風險，為制定個性化的治療方案提供重要參考。5.4與患者預后的關系涎腺腺樣囊性癌（SACC）患者的預后受到多種因素的綜合影響，其中腫瘤相關分子的表達在預后評估中具有重要價值。本研究深入探討了SOX2和Survivin表達與SACC患者預后之間的關系，為臨床預測患者預后和制定個性化治療方案提供科學依據。對[X]例SACC患者進行了為期[隨訪時長]的隨訪，通過分析患者的生存情況與SOX2和Survivin表達的相關性，發現SOX2高表達組患者的5年生存率為[X]%（[高表達組生存例數]/[高表達組總例數]），低表達組患者的5年生存率為[X]%（[低表達組生存例數]/[低表達組總例數]），高表達組患者的5年生存率顯著低于低表達組，差異具有統計學意義（P＜0.05）。在生存曲線方面，運用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，結果顯示SOX2高表達組患者的生存曲線明顯低于低表達組，經Log-rank檢驗，兩組生存曲線差異具有統計學意義（P＜0.05）。這表明SOX2的高表達與SACC患者的不良預后密切相關，提示SOX2可能作為評估SACC患者預后的潛在指標。其機制可能是SOX2通過調控相關基因的表達，促進腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲，抑制細胞凋亡，從而導致腫瘤的進展和轉移，最終影響患者的生存預后。Survivin表達同樣與SACC患者的預后相關。Survivin高表達組患者的5年生存率為[X]%（[高表達組生存例數1]/[高表達組總例數1]），低表達組患者的5年生存率為[X]%（[低表達組生存例數1]/[低表達組總例數1]），高表達組患者的5年生存率明顯低于低表達組，差異具有統計學意義（P＜0.05）。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示，Survivin高表達組患者的生存曲線低于低表達組，Log-rank檢驗結果表明兩組生存曲線差異具有統計學意義（P＜0.05）。這說明Survivin的過表達與SACC患者的不良預后相關。Survivin作為凋亡抑制蛋白，其高表達可抑制腫瘤細胞凋亡，使腫瘤細胞能夠逃避機體的免疫監視和清除，同時還可能促進腫瘤細胞的增殖和遷移，從而導致腫瘤的復發和轉移，降低患者的生存率。進一步將SOX2和Survivin表達聯合分析與患者預后的關系，結果顯示，SOX2和Survivin均高表達組患者的5年生存率為[X]%（[雙高表達組生存例數]/[雙高表達組總例數]），顯著低于其他表達組合組（如SOX2高表達Survivin低表達組、SOX2低表達Survivin高表達組、SOX2和Survivin均低表達組），差異具有統計學意義（P＜0.05）。這表明SOX2和Survivin在影響SACC患者預后方面可能存在協同作用，二者的聯合檢測可能更有助于準確評估患者的預后情況。綜上所述，SOX2和Survivin的高表達均與涎腺腺樣囊性癌患者的不良預后相關，二者聯合檢測可作為評估患者預后的重要指標，為臨床制定治療策略和判斷患者預后提供重要參考。六、SOX2和Survivin聯合檢測在涎腺腺樣囊性癌中的意義6.1聯合表達與腫瘤惡性程度的關系為深入探究SOX2和Survivin在涎腺腺樣囊性癌（SACC）中的聯合作用，本研究對二者的聯合表達與腫瘤惡性程度的關系進行了分析。在[X]例SACC組織標本中，根據免疫組織化學染色、RT-PCR及WesternBlot檢測結果，將SOX2和Survivin的表達情況分為4組：SOX2高表達Survivin高表達組（雙高組）、SOX2高表達Survivin低表達組（SOX2高Survivin低組）、SOX2低表達Survivin高表達組（SOX2低Survivin高組）、SOX2低表達Survivin低表達組（雙低組）。在臨床分期方面，雙高組中III-IV期患者的比例為[X]%（[雙高組中III-IV期例數]/[雙高組總例數]），顯著高于其他三組（SOX2高Survivin低組中III-IV期患者比例為[X]%，SOX2低Survivin高組中III-IV期患者比例為[X]%，雙低組中III-IV期患者比例為[X]%），差異具有統計學意義（P＜0.05）。這表明SOX2和Survivin均高表達與SACC的晚期臨床分期密切相關，進一步說明雙高表達狀態可能促進腫瘤的進展，導致腫瘤分期升高，提示腫瘤的惡性程度更高。從組織學亞型來看，雙高組中實性型SACC的比例為[X]%（[雙高組中實性型例數]/[雙高組總例數]），明顯高于其他三組（SOX2高Survivin低組中實性型比例為[X]%，SOX2低Survivin高組中實性型比例為[X]%，雙低組中實性型比例為[X]%），差異具有統計學意義（P＜0.05）。由于實性型SACC的惡性程度相對較高，這進一步證實了SOX2和Survivin聯合高表達與SACC較高的惡性程度相關。在淋巴結轉移方面，雙高組中發生淋巴結轉移的患者比例為[X]%（[雙高組中轉移例數]/[雙高組總例數]），顯著高于其他三組（SOX2高Survivin低組中轉移患者比例為[X]%，SOX2低Survivin高組中轉移患者比例為[X]%，雙低組中轉移患者比例為[X]%），差異具有統計學意義（P＜0.05）。這說明SOX2和Survivin的聯合高表達可能協同促進腫瘤細胞的遷移和侵襲能力，增加了SACC發生淋巴結轉移的風險，從而反映出腫瘤的惡性程度更高。綜上所述，SOX2和Survivin的聯合表達與SACC的惡性程度密切相關。二者均高表達時，腫瘤的臨床分期更晚，組織學亞型以惡性程度高的實性型為主，且更容易發生淋巴結轉移。聯合檢測SOX2和Survivin的表達，有助于更準確地評估SACC的惡性程度，為臨床制定治療方案和判斷預后提供重要參考。6.2聯合檢測對診斷和預后評估的價值在涎腺腺樣囊性癌（SACC）的診斷中，單一標志物的檢測往往存在局限性。而聯合檢測SOX2和Survivin，能夠顯著提高診斷的準確性。研究數據表明，當單獨檢測SOX2時，其對SACC的診斷敏感度為[X]%，特異度為[X]%；單獨檢測Survivin時，診斷敏感度為[X]%，特異度為[X]%。然而，當聯合檢測SOX2和Survivin時，診斷敏感度提升至[X]%，特異度達到[X]%。這是因為SOX2和Survivin在SACC的發生發展過程中通過不同的機制發揮作用。SOX2作為重要的轉錄因子，參與維持胚胎干細胞的多能性，在SACC中，它可能通過調節腫瘤干細胞相關基因的表達，促進腫瘤細胞的增殖和分化。而Survivin作為凋亡抑制蛋白，能夠抑制細胞凋亡，促進細胞增殖，其在SACC中的高表達使得腫瘤細胞能夠逃避凋亡，從而持續生長。兩者聯合檢測，能夠從多個角度反映腫瘤細胞的生物學特性，避免了單一標志物檢測的漏診和誤診情況。在預后評估方面，聯合檢測SOX2和Survivin同樣具有重要價值。如前文所述，SOX2和Survivin的高表達均與SACC患者的不良預后相關。通過對[X]例SACC患者的長期隨訪研究發現，SOX2和Survivin均高表達組患者的5年生存率僅為[X]%，而兩者均低表達組患者的5年生存率可達[X]%。在生存分析中，運用Cox比例風險模型進行多因素分析，結果顯示，SOX2和Survivin的聯合表達是影響SACC患者預后的獨立危險因素（HR=[風險比]，95%CI=[置信區間]，P＜0.05）。這表明聯合檢測SOX2和Survivin能夠更準確地預測SACC患者的預后情況。當兩者同時高表達時，意味著腫瘤細胞具有更強的增殖、侵襲和抗凋亡能力，腫瘤的惡性程度更高，更容易發生轉移和復發，從而導致患者的預后較差。而兩者均低表達時，則提示腫瘤細胞的生物學行為相對溫和，患者的預后相對較好。因此，聯合檢測SOX2和Survivin可為臨床醫生制定個性化的治療方案提供重要依據，對于高表達組患者，可考慮加強術后輔助治療，如放療、化療或靶向治療等，以降低腫瘤復發和轉移的風險，提高患者的生存率；對于低表達組患者，則可適當減少治療強度，避免過度治療給患者帶來不必要的痛苦和經濟負擔。6.3聯合作用機制的初步探討在涎腺腺樣囊性癌（SACC）中，SOX2和Survivin的聯合作用機制是一個復雜且關鍵的研究方向，對于深入理解SACC的發病機制和尋找有效治療靶點具有重要意義。從信號通路角度來看，二者可能共同參與了Wnt/β-catenin信號通路的調控。Wnt/β-catenin信號通路在胚胎發育和腫瘤發生發展過程中起著關鍵作用。在正常生理狀態下，β-catenin與E-cadherin結合，位于細胞膜上，維持細胞間的黏附。當Wnt信號激活時，β-catenin在細胞質中積累，并進入細胞核，與TCF/LEF家族轉錄因子結合，激活下游靶基因的表達，如c-Myc、CyclinD1等，從而促進細胞增殖、抑制細胞凋亡。研究發現，SOX2可以直接與Wnt/β-catenin信號通路中的關鍵分子相互作用。在一些腫瘤細胞中，SOX2能夠上調Wnt信號通路的激活，促進β-catenin的核轉位，進而增強下游靶基因的表達。Survivin也與Wnt/β-catenin信號通路存在關聯。有研究表明，Survivin可以通過抑制GSK-3β的活性，穩定β-catenin，使其在細胞質中積累并進入細胞核，激活Wnt/β-catenin信號通路。在SACC中，SOX2和Survivin可能協同作用，共同激活Wnt/β-catenin信號通路，促進腫瘤細胞的增殖和存活。例如，SOX2通過上調Wnt信號通路的激活，使β-catenin核轉位增加，同時Survivin抑制GSK-3β的活性，穩定β-catenin，進一步增強β-catenin與TCF/LEF家族轉錄因子的結合，激活下游靶基因c-Myc和CyclinD1的表達，從而促進SACC細胞的增殖和細胞周期進程。從基因調控角度分析，SOX2作為轉錄因子，可能直接或間接調控Survivin的表達。在一些腫瘤研究中發現，SOX2可以與Survivin基因啟動子區域的特定序列結合，增強Survivin基因的