ICS11220

B42.

備案號(hào)34154—2012

:

上海市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB31/T600—2012

豬附紅細(xì)胞體PCR檢測(cè)方法

MethodofdetectingEperythrozoonsuisbyPCR

2012-05-17發(fā)布2012-10-01實(shí)施

上海市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB31/T600—2012

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由上海交通大學(xué)提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由上海市畜牧辦公室歸口

。

本標(biāo)準(zhǔn)由上海交通大學(xué)中華人民共和國(guó)上海出入境檢驗(yàn)檢疫局上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心

、、、

上海市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所起草

。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人楊志彪袁聰俐華修國(guó)夏永高崔立朱建國(guó)陳琦蔣靜

:、、、、、、、。

Ⅰ

DB31/T600—2012

豬附紅細(xì)胞體PCR檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬附紅細(xì)胞體檢測(cè)方法

PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬附紅細(xì)胞體的檢測(cè)

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB19489

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件

。

31

.

附紅細(xì)胞體Eperythrozoons

附紅細(xì)胞體病的病原主要寄生于人和動(dòng)物的紅細(xì)胞表面血漿及骨髓以引起

(Eperythrozoonsis),、,

貧血黃疸和發(fā)熱為主要特征是一種重要的人獸共患病病原

、,。

32

.

豬附紅細(xì)胞體Eperythrozoonsuis

豬附紅細(xì)胞體病的病原主要寄生于豬的紅細(xì)胞表面血漿及骨髓以引起貧血黃疸和發(fā)熱為主要

,、,、

特征并有隱性感染慢性遷延條件致病急性發(fā)病時(shí)致死率高的特征

,、、、。

4原理

以從血液樣本中提取的基因組作為模板加入到擴(kuò)增豬附紅細(xì)胞體的反應(yīng)混合液中

DNA,PCR,

進(jìn)行擴(kuò)增最后通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)產(chǎn)物與進(jìn)行比較來(lái)確定擴(kuò)增產(chǎn)物

PCR。PCR,DNAMarker,

的大小在此基礎(chǔ)上判定樣品的檢測(cè)結(jié)果

,。

所用引物是根據(jù)豬附紅細(xì)胞體保守序列設(shè)計(jì)

16SrRNA。

5試劑和材料

除另有規(guī)定所用試劑均為分析純水為符合的滅菌雙蒸水

,,GB/T6682。

51豬附紅細(xì)胞體反應(yīng)混合物

.PCR:

上下游引物各緩沖液含鎂離子雙蒸水加至引物序列如下擴(kuò)

、1μL,10×PCR2.5μL(