第2章第2節(jié)動物細胞工程第二課動物細胞融合技術與單克隆抗體動物細胞融合技術與單克隆抗體一/動物細胞融合技術1/單克隆抗體及其應用2/細胞融合技術一任務一：閱讀教材P48關于動物細胞融合技術，回答下列問題。1.什么是動物細胞融合技術？2.融合后遺傳物質會發(fā)生怎樣的改變？3.誘導動物細胞融合的方法有哪些？4.動物細胞融合有什么意義？可以用在哪些方面？細胞融合技術任務一：閱讀教材P48關于動物細胞培養(yǎng)的條件，回答下列問題。1.什么是動物細胞融合技術？2.融合后遺傳物質會發(fā)生怎樣的改變？3.誘導動物細胞融合的方法有哪些？使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術形成的雜交細胞具有原來兩個或多個細胞遺傳信息物理法：化學法：生物法：電融合法聚乙二醇（PEG)與植物原生質體融合的方法相同滅活的病毒（如：仙臺病毒）動物特有一細胞融合技術動物細胞融合的過程：動物細胞融合成功的標志：細胞膜融合、細胞質融合、細胞核融合進行有絲分裂，形成完整的雜交細胞一細胞融合技術任務一：閱讀教材P48關于動物細胞培養(yǎng)的條件，回答下列問題。4.動物細胞融合有什么意義？可以用在哪些方面？突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。①至今，種間、屬間、科間，甚至動物和植物之間的細胞融合都已獲得成功。②研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。③為制造單克隆抗體開辟了新途徑。一細胞融合技術植物體細胞雜交動物細胞融合原理細胞融合前的處理方法誘導細胞融合的方法細胞融合成功的標志意義主要用途細胞膜具有一定的流動性、植物細胞的全能性細胞膜具有一定的流動性用果膠酶和纖維素酶去除細胞壁用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細胞分散成單個細胞聚乙二醇（PEG）融合法、電融合法、離心法；高Ca2+-高pH融合法聚乙二醇（PEG）融合法、電融合法、滅活病毒誘導法再生出細胞壁細胞核的融合打破生殖隔離，實現遠緣雜交育種，培育植物新品種突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能獲得完整的雜種植株主要用于制造單克隆抗體一單克隆抗體及其應用二膠體金法新冠病毒抗原檢測試劑盒單克隆抗體及其應用二單克隆抗體及其應用二單克隆抗體及其應用二單克隆抗體及其應用陽了二單克隆抗體及其應用思考：如何制備只與人流感病毒結合的高特異性抗體？二單克隆抗體及其應用回憶：問題1：抗體是如何產生？抗體主要分布在哪里？在抗原的刺激下，B細胞增殖分化為漿細胞，漿細胞分泌抗體。問題2：一種B細胞是否可以分泌多種抗體？動物特異性免疫中，體內產生的特異性抗體種類多大百萬種。每個B細胞只分泌一種特異性抗體二單克隆抗體及其應用回憶：問題3：如何理解抗體的特異性呢？一定條件下，免疫系統僅能識別抗原其中的一部分，即抗原分子上的免疫活性區(qū)，上面有決定抗原特異性的特殊化學基團，稱為抗原決定基（antigenicdeterminant）一個天然抗原物質可能有多種或多個抗原決定基一個初始B細胞及產生的子細胞中只能產生結合同一種抗原表位（抗原決定簇）的特異性抗體二單克隆抗體及其應用任務二：閱讀教材P48-49關于單克隆抗體及其應用，回答下列問題。1.傳統方法是如何制備抗體的？傳統方法有什么缺點？2.與骨髓瘤細胞融合的是漿細胞還是B細胞？為什么？4.骨髓瘤細胞有什么特點？5.你認為可能存在哪些融合方式？我們需要的是哪種融合方式？6.雜交瘤細胞具有什么特點？7.你能歸納制備單克隆抗體的步驟嗎？3.一種活化的B細胞產生多少種抗體？二單克隆抗體及其應用任務二：閱讀教材P48-49關于單克隆抗體及其應用，回答下列問題。1.傳統方法是如何制備抗體的？傳統方法有什么缺點？3.一種活化的B細胞產生多少種抗體？4.骨髓瘤細胞有什么特點？反復注射某種抗原，使動物產生抗體，從血清中分離抗體產量低，純度低，特異性差一種無限增殖，具備癌細胞特點2.與骨髓瘤細胞融合的是漿細胞還是B細胞？為什么？B細胞漿細胞是高度分化的細胞二單克隆抗體及其應用任務二：閱讀教材P48-49關于單克隆抗體及其應用，回答下列問題。6.雜交瘤細胞具有什么特點？7.你能歸納制備單克隆抗體的步驟嗎？既能迅速大量增殖，又能產生專一抗體B淋巴細胞B淋巴細胞注射抗原骨髓瘤細胞融合B-B細胞雜交瘤細胞瘤-瘤細胞選擇性培養(yǎng)基

篩選1多種雜交瘤細胞符合要求的雜交瘤細胞抗原-抗體雜交法

篩選2體外培養(yǎng)小鼠腹腔內增殖單克隆抗體5.你認為可能存在哪些融合方式？我們需要的是哪種融合方式？B細胞+B細胞（B1和B2細胞等等）B細胞+骨髓瘤細胞

（骨髓瘤和B1/2/3/..細胞等等）骨髓瘤細胞+骨髓瘤細胞?二單克隆抗體及其應用知識拓展：第一次篩選獲得雜交瘤細胞①細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷。②人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細胞中只有D途徑，沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。篩選出雜交瘤細胞方法？B淋巴細胞及同型融合細胞不能無限增殖，死亡骨髓瘤細胞及同型融合細胞不能無限增殖，死亡雜交瘤細胞能無限增殖，生長培養(yǎng)基中加入氨基蝶呤二將這些雜交瘤細胞進行培養(yǎng)并稀釋單克隆抗體及其應用資料：有限稀釋法，用細胞培養(yǎng)液將雜交瘤細胞稀釋至每毫升含有7-8個細胞，在按每孔0.1ml,分別注入到細胞培養(yǎng)板，再用倒置相差顯微鏡嚴格檢查，每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細胞。二單克隆抗體及其應用二單克隆抗體及其應用二抗原1單克隆抗體及其應用二抗體檢測呈陽性單克隆抗體及其應用二補充：若不是滴入每個孔中的不是一個雜交瘤細胞，可再進行多次稀釋并檢測！單克隆抗體及其應用第一步：將雜交瘤細胞進行稀釋，每個孔中盡量只接種一個雜交瘤細胞。第二步：將克隆化培養(yǎng)的雜交瘤細胞加入到固定有人流感病毒特異抗原NP蛋白的96孔板，孵育（抗原-抗體結合）1h。第三步：PBS洗滌3次，再加入羊抗鼠二抗反應40min。經PBS洗滌3次，加入顏色反應底物。第四步：觀察并記錄培養(yǎng)顏色變化。產生抗人流感抗體的孔內，會發(fā)生顏色反應。產生非抗人流感抗體的孔內，不會發(fā)生顏色變化。拓展：二單克隆抗體及其應用（1）作為診斷試劑（2）用于運載藥物和治療疾病二1.ADC的抗體和藥物各具有什么作用？2.除了細胞毒素，還有哪些物質理論上可以作為ADC偶聯的藥物？抗體主要發(fā)揮靶向運輸作用，即通過特異性結合靶細胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細胞；藥物發(fā)揮治療效應，如殺傷靶細胞。可以用放射性同位素標記單克隆抗體進行靶向放療。一些作用于細胞信號轉導通路的藥物可以通過阻斷腫瘤細胞的信號通路來抑制其生長，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結合進行治療。單克隆抗體及其應用二3.單克隆抗體診斷試劑盒和ADC在臨床應用上各具有什么優(yōu)勢？單克隆抗體診斷試劑盒中的單克隆抗體只與特定的抗原反應，因此檢測的特異性和靈敏度大大提高；生產單克隆抗體的雜交瘤細胞可以傳代培養(yǎng)、冷凍保存和復蘇利用，有利于控制產品的質量和標準化生產診斷試劑盒。ADC能夠協同發(fā)揮抗體特異性識別的靶向作用和細胞毒素對腫瘤細胞的殺傷作用，因此它在臨床上具有靶點清楚、毒副作用小等優(yōu)點。單克隆抗體及其應用二練習與應用一、概念檢測1.下列有關動物細胞融合與植物體細胞雜交比較的敘述，錯誤的是（）A.它們的原理都涉及細胞膜的流動性B.都可以用電融合法或PEG融合法誘導融合C.融合前都需用纖維素酶或果膠酶處理細胞D.前者主要為了獲得細胞產品，后者主要為了獲得雜種植株C練習與應用2.科學家以SARS病毒的核衣殼蛋白為抗原，制備出了單克隆抗體。下列相關敘述正確的是（）A.利用該單克隆抗體可以診斷是否感染SARS病毒B.體外培養(yǎng)單個B淋巴細胞可以獲得針對SARS病毒的單克隆抗體C.將等量B淋巴細胞和骨髓瘤細胞混合,經誘導后融合的細胞即為雜交瘤細胞D.將純化的核衣殼蛋白反復注射到小鼠體內，從小鼠血清中分離出的抗體為單克