《HR-HPV基因整合檢測在子宮頸癌篩查應用的中國專家共識》解讀一、引言子宮頸癌是嚴重威脅女性健康的惡性腫瘤之一，在我國，其發病率和死亡率長期處于女性生殖系統惡性腫瘤前列。人乳頭瘤病毒（HumanPapillomavirus，HPV）感染是導致子宮頸癌發生的主要病因，其中高危型HPV（HR-HPV）持續感染更是關鍵因素。傳統的子宮頸癌篩查方法如宮頸細胞學檢查（TCT）、HR-HPV分型檢測等，在子宮頸癌防治中發揮了重要作用，但也存在一定局限性。近年來，HR-HPV基因整合檢測技術逐漸興起，為子宮頸癌篩查提供了新的思路和方法。為規范該技術在子宮頸癌篩查中的應用，《HR-HPV基因整合檢測在子宮頸癌篩查應用的中國專家共識》應運而生。本共識綜合了國內外最新研究成果與臨床實踐經驗，旨在為臨床醫生、檢驗人員及相關研究者提供全面、科學的指導，推動HR-HPV基因整合檢測技術在子宮頸癌篩查領域的合理應用與發展。二、HR-HPV感染與子宮頸癌的關系2.1HR-HPV感染特點HR-HPV是一類雙鏈環狀DNA病毒，目前已發現的HR-HPV型別超過15種，其中最常見的包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等型別。HR-HPV感染在女性群體中較為普遍，大部分女性在其一生中都可能感染HPV，但多數感染為一過性，可通過自身免疫系統在8-24個月內清除。然而，仍有一部分女性會發生HR-HPV持續感染，進而增加子宮頸癌前病變和子宮頸癌的發病風險。HR-HPV感染具有一定的年齡分布特征，通常在性活躍期女性中感染率較高，隨后隨著年齡增長，感染率有所下降，但在絕經后女性中可能出現第二個感染高峰，這可能與絕經后女性機體免疫力下降等因素有關。2.2HR-HPV感染致子宮頸癌的機制HR-HPV感染后，病毒基因組可游離于宿主細胞基因組外，處于潛伏感染狀態。當病毒持續感染時，病毒基因組可能發生整合到宿主細胞基因組中。HR-HPV基因整合是子宮頸癌發生發展過程中的關鍵事件，這一過程會導致病毒癌基因E6、E7的異常表達。E6蛋白可與宿主細胞內的抑癌蛋白p53結合，促使p53降解，從而破壞細胞的正常凋亡機制，使細胞異常增殖；E7蛋白則能與視網膜母細胞瘤蛋白（pRb）結合，釋放轉錄因子E2F，促進細胞周期進展，導致細胞過度增殖。此外，HR-HPV基因整合還可引起宿主細胞基因組的不穩定，促進其他基因突變和染色體異常，進一步推動子宮頸上皮細胞從正常向癌前病變、癌癥的轉化。隨著HR-HPV基因整合的發生和發展，子宮頸上皮細胞逐漸出現形態和功能的改變，經歷低度鱗狀上皮內病變（LSIL）、高度鱗狀上皮內病變（HSIL），最終進展為子宮頸癌。三、HR-HPV基因整合檢測技術原理HR-HPV基因整合檢測主要基于分子生物學技術，旨在檢測HR-HPV基因組是否整合到宿主細胞基因組中。目前常用的檢測方法包括熒光原位雜交（FISH）、實時熒光定量PCR（qPCR）及其衍生技術、數字PCR等。-熒光原位雜交（FISH）：該技術利用標記有熒光的HPV特異性探針與細胞內的HPVDNA進行雜交，通過熒光顯微鏡觀察，若在宿主細胞染色體上檢測到熒光信號，則表明存在HR-HPV基因整合。FISH技術的優點是能夠直觀地顯示HPV基因在細胞內的定位和整合情況，但操作相對復雜，檢測時間較長，且對實驗人員的技術要求較高，不適用于大規模篩查。-實時熒光定量PCR（qPCR）及其衍生技術：qPCR技術通過設計針對HR-HPV基因和宿主細胞基因的特異性引物和探針，在PCR反應過程中實時監測熒光信號的變化，從而判斷HR-HPV基因是否整合。當HR-HPV基因整合到宿主細胞基因組后，其與宿主基因的連接區域會產生獨特的核酸序列，基于此原理開發的巢式PCR、多重PCR等衍生技術，能夠更靈敏、特異地檢測HR-HPV基因整合。qPCR及其衍生技術具有靈敏度高、特異性強、操作相對簡便、檢測速度快等優點，可用于大規模樣本檢測，但需要注意引物和探針設計的準確性，以避免假陽性或假陰性結果。-數字PCR：數字PCR是一種絕對定量技術，它將PCR反應體系分割成數萬個微小的反應單元，每個單元中包含一個或零個目標DNA分子。通過對每個反應單元的熒光信號進行檢測和統計，能夠精確地定量HR-HPV基因和宿主基因，從而判斷HR-HPV基因整合情況。數字PCR具有更高的靈敏度和準確性，尤其適用于低豐度樣本的檢測，但設備成本較高，檢測通量相對較低，目前在臨床大規模篩查中的應用受到一定限制。四、HR-HPV基因整合檢測在子宮頸癌篩查中的優勢4.1提高篩查準確性相較于傳統的HR-HPV分型檢測僅能判斷是否感染HR-HPV，HR-HPV基因整合檢測能夠更準確地評估子宮頸病變的風險。研究表明，HR-HPV基因整合與子宮頸癌前病變及子宮頸癌的相關性更強，檢測出HR-HPV基因整合陽性的女性，其發生高級別病變和癌癥的風險顯著高于僅HR-HPV感染陽性的女性。在一些情況下，傳統篩查方法可能出現假陰性或假陽性結果，例如部分HR-HPV感染但未發生病變的女性會被過度診斷，而一些處于病變早期、病毒載量較低的患者可能被漏診。HR-HPV基因整合檢測通過檢測病毒與宿主基因組的整合狀態，能夠更精準地識別真正具有高風險的人群，減少不必要的轉診和進一步檢查，同時提高對早期病變的檢出率，避免漏診。4.2預測疾病進展HR-HPV基因整合檢測可以為子宮頸病變的進展提供重要預測信息。當檢測到HR-HPV基因整合時，提示病毒感染已進入較為嚴重的階段，病變向高級別發展甚至惡變的可能性增大。對于HR-HPV基因整合陽性的患者，臨床醫生可以更及時地采取干預措施，加強隨訪和監測，必要時進行更積極的治療，從而有效阻斷疾病進展，降低子宮頸癌的發生率。相反，對于僅HR-HPV感染陽性但未檢測到基因整合的患者，可適當延長隨訪間隔，避免過度醫療，在保證患者健康的同時，合理分配醫療資源。4.3指導臨床決策在臨床實踐中，對于HR-HPV感染且細胞學檢查異常的患者，進一步的診斷和治療決策往往較為困難。HR-HPV基因整合檢測結果可以為臨床醫生提供更有價值的參考。如果檢測結果顯示HR-HPV基因整合陽性，通常提示病變較為嚴重，可能需要進行更積極的陰道鏡檢查、活檢等進一步診斷措施，以便盡早明確病變性質和程度，及時制定治療方案。而對于HR-HPV基因整合陰性的患者，可根據具體情況適當放寬診斷和治療策略，避免不必要的侵入性檢查和治療，減輕患者的心理和經濟負擔。五、HR-HPV基因整合檢測的臨床應用場景5.1初篩應用在子宮頸癌初篩中，HR-HPV基因整合檢測可作為一種獨立的篩查手段或與傳統篩查方法聯合應用。與單獨使用HR-HPV分型檢測相比，HR-HPV基因整合檢測初篩能夠篩選出真正具有高風險進展為子宮頸癌的人群，減少因單純HR-HPV感染而引起的過度轉診和焦慮。當與宮頸細胞學檢查聯合使用時，可進一步提高篩查的準確性和特異性。例如，對于HR-HPV基因整合檢測陽性且細胞學檢查異常的女性，應及時進行陰道鏡檢查和活檢，以明確是否存在癌前病變或癌癥；而對于HR-HPV基因整合檢測陰性但細胞學檢查異常的女性，可適當延長隨訪時間，在后續隨訪中密切觀察病情變化。5.2異常結果人群的分流管理對于傳統HR-HPV分型檢測陽性或宮頸細胞學檢查異常的人群，HR-HPV基因整合檢測可用于進一步分流管理。在HR-HPV陽性人群中，通過檢測基因整合情況，可將患者分為高風險組（基因整合陽性）和相對低風險組（基因整合陰性）。對于高風險組患者，應縮短隨訪間隔，積極進行陰道鏡檢查和活檢，必要時給予治療；相對低風險組患者則可適當延長隨訪周期，定期復查。同樣，對于宮頸細胞學檢查提示不典型鱗狀上皮細胞（ASC-US）、低度鱗狀上皮內病變（LSIL）等異常結果的患者，HR-HPV基因整合檢測有助于判斷病變的真實風險，指導臨床醫生決定是否需要立即進行陰道鏡檢查或采取保守觀察策略。5.3治療后監測子宮頸癌前病變或子宮頸癌患者在接受治療后，HR-HPV基因整合檢測可用于監測疾病復發和預后評估。治療后若HR-HPV基因整合持續陽性，提示存在殘留病變或復發風險較高，需要加強隨訪和進一步干預；而HR-HPV基因整合轉為陰性，則表明治療效果較好，患者預后相對較好，但仍需定期進行隨訪觀察。通過動態監測HR-HPV基因整合狀態，臨床醫生可以及時發現疾病變化，調整治療方案，提高患者的生存率和生活質量。六、HR-HPV基因整合檢測的操作規范與質量控制6.1樣本采集與處理樣本采集的質量直接影響檢測結果的準確性。用于HR-HPV基因整合檢測的樣本主要為宮頸脫落細胞，采集方法與傳統宮頸細胞學檢查和HR-HPV分型檢測的樣本采集類似。采集時應使用專用的采樣器具，確保采集到足夠數量的宮頸上皮細胞，避免樣本污染。樣本采集后，應按照規定的方法進行保存和運輸，一般需在低溫條件下保存，并盡快送至實驗室進行檢測。在實驗室處理樣本時，需嚴格遵循操作規程，進行細胞裂解、核酸提取等步驟，確保提取到高質量的DNA用于后續檢測。6.2檢測方法的選擇與操作不同的HR-HPV基因整合檢測方法具有各自的優缺點，實驗室應根據自身條件、檢測目的和樣本量等因素選擇合適的檢測方法。無論選擇何種方法，均需嚴格按照儀器和試劑的說明書進行操作，規范設置反應條件，如PCR反應的溫度、時間、循環次數等。在檢測過程中，應設置陽性對照、陰性對照和空白對照，以確保檢測結果的可靠性。同時，實驗室人員需經過專業培訓，熟練掌握檢測技術，具備解決常見問題和處理異常結果的能力。6.3質量控制體系的建立建立完善的質量控制體系是保證HR-HPV基因整合檢測質量的關鍵。實驗室應定期參加室間質量評價，與其他實驗室進行比對，及時發現和糾正檢測過程中存在的問題。同時，加強室內質量控制，對檢測的各個環節進行嚴格監控，包括樣本接收、核酸提取、試劑配制、儀器運行狀態等。定期對檢測儀器進行校準和維護，確保儀器性能穩定；對檢測試劑進行質量評估，選擇質量可靠的試劑。此外，還應建立檢測結果的審核制度，由具備資質的專業人員對檢測結果進行審核，避免因人為因素導致的錯誤。七、HR-HPV基因整合檢測結果的解讀與臨床應用建議7.1結果解讀HR-HPV基因整合檢測結果通常以陽性或陰性報告。HR-HPV基因整合陽性表示在樣本中檢測到HR-HPV基因組整合到宿主細胞基因組中，提示患者處于子宮頸癌前病變或子宮頸癌的高風險狀態。但需要注意的是，HR-HPV基因整合陽性并不等同于已經患有子宮頸癌，還需要結合其他檢查結果，如宮頸細胞學檢查、陰道鏡檢查和組織病理學檢查等，進一步明確病變性質和程度。HR-HPV基因整合陰性則表明未檢測到病毒基因整合，但不能完全排除HR-HPV感染和子宮頸病變的可能性，仍需根據患者的具體情況，結合其他篩查結果進行綜合評估和隨訪。7.2臨床應用建議-對于HR-HPV基因整合檢測陽性的患者：-若同時伴有HR-HPV感染且宮頸細胞學檢查異常，應立即進行陰道鏡檢查，并在陰道鏡下對可疑病變部位進行活檢，以明確是否存在癌前病變或癌癥。根據活檢結果，制定相應的治療方案，如對于確診為HSIL的患者，可采取宮頸錐切術等治療方法。-若僅HR-HPV基因整合檢測陽性，而HR-HPV感染和宮頸細胞學檢查均為陰性，建議縮短隨訪間隔，每6-12個月進行一次復查，包括HR-HPV基因整合檢測、宮頸細胞學檢查等，密切觀察病情變化。一旦出現異常，及時進行進一步檢查和處理。-對于HR-HPV基因整合檢測陰性的患者：-若HR-HPV感染陽性但宮頸細胞學檢查正常，可按照常規的HR-HPV感染管理策略進行隨訪，一般建議每1-3年進行一次復查。在隨訪過程中，可結合其他因素，如患者的年齡、性生活史、免疫狀態等，綜合評估風險。-若HR-HPV感染和宮頸細胞學檢查均為陰性，可適當延長隨訪周期，如每3-5年進行一次子宮頸癌篩查。但對于存在其他高危因素的女性，如多個性伴侶、吸煙、免疫力低下等，仍需加強關注，適當縮短隨訪間隔。八、HR-HPV基因整合檢測面臨的挑戰與展望8.1面臨的挑戰-技術層面：目前HR-HPV基因整合檢測技術仍存在一些不足之處。不同檢測方法的靈敏度、特異性和準確性存在差異，且部分檢測方法操作復雜、成本較高，限制了其在基層醫療機構的推廣應用。此外，對于檢測結果的判讀，尤其是一些臨界值或不典型結果，缺乏統一的標準，容易導致不同實驗室之間結果解讀的不一致。-臨床應用層面：HR-HPV基因整合檢測在臨床應用中的循證醫學證據相對不足，尤其是在大規模人群篩查中的有效性和成本效益分析尚未得到充分驗證。同時，臨床醫生對該檢測技術的認識和理解還不夠深入，在檢測結果的解讀和臨床決策應用方面存在一定困難，需要加強相關的培訓和教育。-社會層面：公眾對HR-HPV基因整合檢測的認知度較低，缺乏對該檢測技術重要性的了解，可能影響其在子宮頸癌篩查中的推廣和應用。此外，檢測費用也是一個重要因素，若檢測費用過高，可能導致部分女性因經濟原因放棄檢測，不利于實現子宮頸癌的早期篩查和防治。8.2展望隨著分子生物學技術的不斷發展，HR-HPV基