ICS65.020DB22CCSB15吉林省地方標準DB22/T3316—2021滯育松毛蟲赤眼蜂生產技術規程CodeofpracticeforproductionofdiapauseTrichogrammadendrolimi吉林省市場監督管理廳發布DB22/T3316—2021前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由吉林省農業農村廳提出并歸口。本文件起草單位：吉林農業大學。本文件主要起草人：張俊杰、杜文梅、阮長春、張雪。IDB22/T3316—2021滯育松毛蟲赤眼蜂生產技術規程1范圍本文件確立了滯育松毛蟲赤眼蜂（TrichogrammadendrolimiIshii）生產的程序，規定了前期準備、赤眼蜂繁育、精選與儲存等階段的操作指示，描述了記錄檔案等追溯方法。本文件適用于利用柞蠶卵繁育的滯育松毛蟲赤眼蜂工廠化生產。2規范性引用文件本文件沒有規范性引用文件。3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.13.23.3滯育誘導diapauseinduction赤眼蜂進入穩定滯育到解除滯育前的階段。滯育解除diapausetermination圖1滯育松毛蟲赤眼蜂工廠化生產流程1DB22/T3316—20215.1廠房及規模按照150億頭滯育松毛蟲赤眼蜂生產規模應包括：a)蜂種繁育室不低于20m；2b)暖繭車間不低于300m；2c)采卵室不低于50md)洗卵室不低于20m2；；2e)消毒及晾干室不低于25m；2f)接種室不低于10mg)暗室不低于50mh)發育室不低于50m2；2；2；2i)保鮮冷藏室不低于100m；j)物品保存庫不低于20m2。5.2設備低溫生化培養箱、藥品保存箱、攪拌器、脫水機、烘干機、柞蠶卵色選機、空調、排風機、電暖氣、加濕器、溫濕度自控儀、電腦及打印機、發育盤架、手推運輸車。5.3常用藥品及材料5.3.125g/L～30g/L苯扎溴銨溶液（新潔爾滅消毒液）。5.3.2孔徑為0.15mm的紗網。生產前1年的7月下旬至8月初，在自然條件下未放蜂玉米田采集玉米螟卵塊，以半山區近水邊為宜。采集的玉米螟卵塊帶回室內發育培養，將寄生變黑的卵塊單獨裝入試管，羽化出蜂后引單頭雌蜂，放入裝有100粒米蛾卵的試管（10mm×70mm）轉接寄生。發育條件為（25±1）℃、RH（75±5）%、光照16h、黑暗8h。鑒定純化的松毛蟲赤眼蜂，經3代～5代篩選繁殖，建立實驗種群后保存使用：a)將純化的松毛蟲赤眼蜂蜂種在(25±1)℃、RH(75±5)%條件下，按蜂卵（柞蠶卵）比2:1接種24h后去除種蜂；b)接蜂后發育36h～46h到幼蟲中期，置入12℃、RH(75±5)%的條件下，滯育誘導30d，赤眼蜂滯育；2DB22/T3316—2021c)將滯育持續期的赤眼蜂置入(3±1)℃、RH(75±5)%的條件下，進行滯育解除60d～90d；d)經10℃48h、15℃24h過渡后，按光照16h，(25±1)℃、RH(75±5)%；黑暗8h，(20±1)℃、RH(75±5)%，變溫發育至出蜂。5.5柞蠶繭5.5.1備繭5.5.1.1備繭時期在生產前一年的11月～12月份開始按預定計劃備繭。5.5.1.2繭質要求5.5.1.2.1健康雌繭率≥90%；5.5.1.2.2雄繭率≤7%；5.5.1.2.3死傷繭率≤3%；5.5.1.2.4割口繭率≤8%；5.5.1.2.5發育蛹和嫩蛹≤5%；5.5.1.2.6繭層率≥10%，無薄皮繭、癟繭；5.5.1.2.7繭干燥，未在-3℃以下低溫儲存。5.5.1.3備繭數量按每繁150億頭松毛蟲赤眼蜂用繭15000kg計算。5.5.2蠶繭保存5.5.2.1保存溫度(3±1)℃、RH(60±5)%。5.5.2.2適當通風換氣，保持空氣含氧量。5.5.2.3防止接觸有毒有害物質。在生產前1周，將所有繁蜂車間及繁蜂工具，進行集中消毒。消毒方法為如下：c)將繁蜂工具等置于繁蜂車間內，用毒消散或硫磺等熏蒸消毒。保持室溫24℃以上，RH75%以上，時間24h。3DB22/T3316—2021b)接蜂時間：24h；c)發育條件：(25±1)℃、RH(75±5)%、光照16h、黑暗8h；d)復壯周期：30d。6.2.2擴繁以柞蠶卵為寄主，將蜂種擴繁2代～3代：a)接蜂比例：1：30（蜂種寄生柞蠶卵：新鮮卵）；b)接蜂時間：24h；c)接蜂條件：全黑暗，(25±1)℃、RH(75±5)%；d)發育條件:同6.2.1c)；e)將末1代蜂種發育至幼蟲中后期置于(3±1)℃、RH(75±5)%條件下冷藏，冷藏時間≤15d。6.3寄主卵6.3.1暖繭發蛾暖繭室保持18℃～22℃，RH(70±5)%，20d～25d后柞蠶繭羽化出蛾。6.3.2收蛾在柞蠶蛾羽化期內，隨時采收剛羽化（展翅前）雄蛾，避免交尾，次日清晨人工收雌蛾，用于當天繁蜂或儲存在(3±1)℃的冷庫中備用。6.3.4洗卵用攪拌器將卵與蛾腹內雜物攪拌分離，漂凈雜物，然后反復用清水沖洗至卵粒無雜質。消毒后的新鮮卵用紗網袋裝好，用脫水機進行初步脫水，然后用烘干機烘干，溫度不超過25℃～28℃。蜂種卵與新鮮柞蠶卵按1:25～1:30比例進行接蜂。當蜂種羽化25%～30%時，將種蜂卵均勻撒在接蜂盤中，鋪上孔徑為2mm的紗網，再將新鮮卵平鋪到紗網上，送入(25±1)℃、RH(75±5)%的暗室內產卵寄生，36h~48h后，去除蜂種，標明日期送入發育室發育。4DB22/T3316—2021接蜂后的寄生卵分批次送入(25±1)℃、RH(75±5)%，自然光照條件下的發育室，繼續發育12h~24h，鏡檢至幼蟲中后期。6.6滯育誘導將發育到幼蟲中后期的松毛蟲赤眼蜂，在10℃～12℃、RH(75±5)%的全暗條件下，平鋪在卵盤內，卵厚3cm～4cm，每天翻動兩次，誘導25d～30d后，赤眼蜂滯育。6.7滯育解除誘導滯育結束后即進入到滯育持續期，將滯育的赤眼蜂轉入(3±1)℃、RH(75±5)%的黑暗條件下滯育解除，時間70d～90d。6.8變溫發育滯育解除后的赤眼蜂采用分步漸變加溫的方式進行發育：a)在(10±1)℃、RH(75±5)%全暗條件下加溫48h；b)在（15±1）℃、RH(75±5)%全暗條件下加溫24h；c)在日間25℃下16h、夜間20℃下8h，RH(75±5)%室內條件下發育至蛹后期。7精選與儲存7.1精選將發育至蛹后期的赤眼蜂寄生卵，用綠卵色選機去除未寄生卵、劣質卵、綠卵及其它雜質。7.2儲存將精選后的赤眼蜂轉入(3±1)℃、RH(75±5)%的保鮮冷藏室儲存備用，儲存時間≤7d。建立滯育松毛蟲赤眼蜂工廠化生產檔案，對整個生產過程進行詳實記錄，保存2年以上，做到可b)每批次滯育赤眼蜂的生產日期；c)每批次滯育赤眼蜂的滯育率和解除滯育率；d)每批次滯育赤眼蜂的加溫日期。5DB22/T3316—2021AA附錄A（資料性）松毛蟲赤眼蜂形態學鑒定方法A.1制作鑒定玻片將用濃度75%～95%酒精浸泡的雄性赤眼蜂標本按下列方法制作為玻片：a)在5%的KOH溶液中浸泡8h～15h，并用水清洗干凈，置于載玻片上；b)在解剖鏡下，用昆蟲針挑取雄蜂的外生殖器，清除其他組織，蓋好蓋玻片；c)在顯微鏡下觀察并