基因突變

DNA分子很“脆弱”大多數DNA損傷可以被修復其它生物大分子損傷后則被降解原因：細胞內DNA分子的拷貝數少DNA的結構決定其容易被修復內在因素：DNA結構本身的不穩定；DNA復制中的堿基錯配；氧自由基；環境因素：化學因素---各種化學誘變劑，如黃曲霉素、烷基化試劑等物理因素---紫外輻射和離子輻射（X射線和γ射線）堿基損傷：堿基丟失堿基轉換堿基修飾堿基交聯堿基錯配

損傷類型：DNA鏈的損傷：鏈的斷裂DNA鏈的交聯DNA與蛋白質之間的交聯一些烷基化試劑EMS(Ethylmethanesulfanate)甲基磺酸乙酯

CH3—S—O--CH2CH3OOMMS對甲基甲磺酸

CH3—S—O--CH3OOSM(SulfurMustardsgas硫芥子氣)HSCH2CH2ClCH2CH2Cl發生在DNA上的可遺傳的永久性結構變化統稱為突變。大多數DNA損傷可以被各種修復機制修復，不能修復或者修復出錯就導致突變。點突變(pointmutation)移碼突變(frameshiftmutation)突變的類型：突變是否一定產生表型變化？中性突變突變是否能遺傳給后代？單細胞生物多細胞生物

點突變：堿基對置換點突變的結果：同義突變錯義突變無義突變移碼突變：顯性突變(dominant)隱性突變(recessive)突變發生機理：自發突變(spontaneousmutation)誘發突變(inducedmutation)誘發突變：堿基類似物烷基化試劑脫氨基試劑羥胺DNA嵌入試劑例題如果基因中4種脫氧核苷酸的排列順序發生改變，這一突變一定導致：A.遺傳性狀改變B.遺傳密碼改變C.遺傳信息改變D.遺傳規律改變B2007江蘇高考題基因突變是生物變異的根本來源。下列關于基因突變特點的說法正確的是：A.無論是低等還是高等生物都可能發生突變B.生物在個體發育的特定時期才可發生突變C.突變只能定向形成新的等位基因D.突變對生物的生存往往是有利的A基因重組DNA重組技術基因工程目的基因獲取從基因文庫中獲取通過化學方法人工合成利用PCR技術體外擴增重組體制備選擇載體條件：自主復制、多克隆位點、篩選標記限制性內切酶酶切DNA連接酶連接限制性核酸內切酶限制性內切酶的命名1973年H.OSmith和D.Nathans提議的命名系統，命名原則如下：1.用屬名的第一個字母和種名的頭兩個字母組成3個字母的略語表示寄主菌的物種名。大腸桿菌（Escherichiacoli）用Eco表示；流感嗜血菌（Haemophilusinfluenzae）用Hin表示。2.用一個右下標的大寫字母表示菌株或型。如Ecok,EcoR（現在都寫成平行，如EcoRI）。3.如果一種特殊的寄主菌內有幾種不同的限制與修飾系統，用羅馬字母表示。如EcoRI，EcoRV。首先由H.O.Smith和K.W.Wilcox在1970年從流感嗜血菌中分離。分離的第一個酶是HindⅡ（1）識別位點序列未甲基化修飾的雙鏈DNA上的特殊靶序列（多數是回文序列）。與DNA的來源無關。（2）切割位點切開雙鏈DNA，形成粘性末端或平齊末端。（3）粘性末端（stickyends，cohensiveends）II型限制性內切酶重組體的轉化植物細胞：農桿菌轉化、基因槍法、花粉管通道法動物細胞：顯微注射法、脂質體法、腺病毒法微生物細胞：CaCl法、電轉化克隆鑒定抗性篩選PCR擴增篩選酶切篩選連接逆轉錄mRNAcDNA限制性酶切dsDNA粘性末端PCR克隆載體線性載體限制性酶切轉化大腸桿菌含有抗生素的平板PCR篩選陽性重組子培養擴增目的質粒因轉入載體DNA而具有抗性2007全國高考題下列有關基因工程中限制性內切酶的描述，錯誤的是：A.一種限制性內切酶只能識別一種特定的脫氧核苷酸序列B.限制性內切酶的活性受溫度影響C.限制性內切酶能識別和切割RNAD.限制性內切酶可從原核生物中提取C例題（多選）人們利用基因工程的方法，用大腸