第九單元生物技術實踐

專題26微生物的利用

挖命題

【考情探究】

5年考情

考點內容要求預測熱度

考題示例素養要素難度

大腸桿菌的培養實驗與探2018浙江11月選科學探究

中★★★★☆

微生物的利和分離究能力考,32（一），7分科學思維

用分離以尿素為氮實驗與探

★★★★☆

源的微生物究能力

分析解讀本專題涵蓋微生物培養和分離的一般方法，為選考加試部分的考查內容。預計今后的考查形式

還是以非選擇題為主，可單獨考查，也可結合基因工程或食品加工等知識加以考查，復習時重點掌握微生物

的培養和分離的相關知識，注意區分劃線分離法和涂布分益法。

【真題典例】

【加試題】［2018浙江11月選考，32（一），7分］

回答與微生物培養及應用有關的問題：

?62/1（/WW氐力）下艮m

（1）對培源基進行■■ii滅菌時.火苗時間應從_______________時開始計時

一。傕黨不能潺if

對于不耐熱的液體培養茄，一般可將其轉入G6玻璃砂漏斗中，采用方式:可較快地進行

過濾滅菌一

（2）與釀造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋.需增加將___________的

--。巴

過程某醋化格桿菌培養菸由蛋白陳.薛母提取物和甘露醉組成.黃中計薄麗的王要作用息Q

喙謔粉分解為加啪

?為啼選胞外o-麗解分泌型侑種.-般從_（A.果園樹FB.肉類加rrMffl（：.米刑

一。兒允許日材微生加生A,3

廠周圍D.枯樹周圍）獲得土樣,川無菌水稀釋,涂布到含有淀粉的選擇培養基卜用養.-十|具他救生物生心

段時間后在培養基衣面滴加碘液,可在菌落周圍觀察到透明的水解圈若要篩選酶活性較高

的菌種,需挑選若干個____________________比值大的菌落,分別利用液體培養基振蕩培養

進行擴增然后將培養液離心,取_____用于檢測醒活性

?核心考點,3.特定微生物的分離技術O試題精析

.微生物的培養和利用

?命題特點?參考答案及詳解參見P278

?知識儲備I.培礎性：考在微生物培養中基本操作方法

I.滅菌方法.和實驗細節

?2.果餐的制作I2.靈活性：注重考查相關知識的遷移應用

破考點

考點微生物的利用

【考點集訓】

考向微生物的利用

1.【加試題】［2019屆浙江嘉興9月聯考,32（一），6分J自生固氮菌是一種能獨立固定氮氣的細菌，其中有些

好氧種類能產生PHB（一種生物可降解的熱塑性塑料）。現欲從活性污泥中分離、純化、篩選出高產PHB的

固氮菌,操作流程如下:采集土樣―富集培養一分離、純化培養-初步篩選PHB固氮菌-篩選高產PHB固氮菌一

保存備用。請回答：

（1）富集培養時，為達到篩選自生固氮菌的目的，在配制培養液時不應添加。培養時要將裝有培養液

的錐形瓶放置在搖床上振蕩培養,其目的是為細菌的生長提供?

（2）篩選高表達量菌株的方法之一是經涂布分離獲得。進行分離、純化培養時，要先將培養基倒

入中，制成平板,此時所使用的培養基與富集培養時有所不同，添加了一定量的?

(3)在純化過程中，在固體培養基上劃線時,下列操作正確的是o

A.接種環采用70%酒精滅菌

B.接種時應在酒精燈火焰附近進行

C.劃線時要將最后一區的劃線與第一區的劃線相連

D.劃線分離時,需要把接種環深入培養基中進行接種

答案(1)含氮物質(氮源)充足的氧氣(2)單菌落培養皿瓊脂糖(3)B

2.【加試題】［2019屆浙江名校新高考聯盟聯考,32(一)，7分］關于分離以尿素為氮源的微生物的實驗，請分

析回答以下問題：

(1)服酶可以催化尿素分解為，其中堿性物質能使酚紅指示劑變為O

(2)分離以尿素為氮源的微生物，培養基配制必須加凝固劑,培養基在g/cm?壓力下滅

菌30分鐘,冷卻至60℃,加入通過的尿素溶液,混合均勻待用。

(3)為了從土壤中分康得到以尿素為氮源的微生物,分離效果比較好的操作方法是采用,采用

該方法分離,土壤溶液必須經過處理。

答案⑴和CO?紅色

(2)瓊脂糖500G6玻璃(砂)漏斗過濾

(3)涂布分席法稀釋

煉技法

方法區分消毒與滅菌

【方法集訓】

細菌培養過程中分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理，這些方法依次用于殺滅哪些部

位的雜菌()

A.接種環、手、培養基B.高壓鍋、手、接種環

C.培養基、手、接種環D.接種環、手、高壓鍋

答案C

過專題

【五年高考】

A組自主命題?浙江卷題組

考點微生物的利用

1.【加試題】［2018浙江11月選考,32(一)，7分〕回答與微生物培養及應用有關的問題：

(1)對培養基進行高壓蒸汽滅菌時，滅菌時間應從時開始計時。對于不耐熱的液體

培養基，一般可將其轉入G6玻璃砂漏斗中，采用方式可較快地進行過濾滅菌。

(2)與釀造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加的過程。某醋化醋

桿菌培養基由蛋白豚、酵母提取物和甘露醇組成，其中甘露醇的主要作用是O

(3)為篩選胞外a-淀粉酶分泌型菌種，一般從(A.果園樹下B.肉類加工廠周圍C.米酒廠周圍D.

枯樹周圍)獲得土樣,用無菌水稀釋,涂布到含有淀粉的選擇培養基上培養，一段時間后在培養基表面滴加碘

液，可在菌落周圍觀察到水解圈。若要篩選酶活性較高的菌種,需挑選若干個比值

大的菌落,分別利用液體培養基振蕩培養進行擴增。然后將培養液離心，取—用于檢測酶活性。

答案(D達到設定的溫度或壓力值抽濾

(2)將淀粉分解為葡萄糖作為碳源

(3)C水解圈直徑與菌落直徑上清液

2.(2015浙江自選，17,10分)某工廠為了生產耐高溫植酸酶飼料添加劑，開展了產該酶菌株的篩選、酶的固

定化及其特性分析研究,其流程如下圖所示:

1土樣中的1優良菌株1植酸酶植酸酶|植般酶

固定化一|特性分析|

1菌種篩選1鑒定擴大培芥1提純

請回答:

(1)土壤懸液首先經80℃處理15分鐘，其目的是篩選出①o

(2)在無菌條件下，將經過處理的土壤懸液進行②,然后涂布于含有植酸鈉的固體培養基上。培養后

觀察到③,其周圍出現透明水解圈，圈的直徑大小與④強弱有關。

(3)篩選獲得的菌株經鑒定后，將優良菌株進行液體擴大培養。培養時需要振蕩，其主要目的是⑤。

液體培養基與固體培養基相比,不含有的成分是⑥。

⑷在合適條件下,將提純的植酸酶與海藻酸鈉混合后,滴加到一定濃度的鈣離子溶液中，使液滴形成凝膠固

體小球。該過程是對酶進行⑦O

A.吸附B.包埋C.裝柱1).洗滌

(5)溫度與植酸酶相對酶活性的關系如圖所示。下列敘述錯誤的是⑧?

(

卓

)

知

虐

邀

玄

正

A.測試溫度中，固定化與非固定化植酸酶的最適溫度分別為60℃和45℃

B.測試溫度范圍內，固定化植酸酶的相對酶活性波動低于非固定化植酸酶

C.固定化與非固定化植酸酶相比,相對酶活性在80%以上時的溫度范圍較寬

D.65℃時固定化與非固定化植酸酶的相對酶活性因蛋白質變性而位于最低點

答案(1)①耐高溫菌株

⑵②稀釋③單菌落④植酸酶的活性

⑶⑤供氧⑥瓊脂

⑷⑦B

⑸⑧D

教師用書專用(3)

3.(2012浙江自選，17,10分)幽門螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內

采集樣本并制成菌液后，進行分離培養。實驗基本步驟如下：

配制培養基IT滅菌、倒平板|T^~I一祠一藤

請回答：

(1)在配制培養基時，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因為Hp含有①，它能以尿素作為氮源;若有Hp,

則菌落周圍會出現②色環帶。

(2)下列對尿素溶液進行滅菌的最適方法是③滅菌。

A.高壓蒸汽B.紫外燈照射

C.70%酒精浸泡D.過濾

(3)步驟X表示④。在無菌條件下操作時，先將菌液稀釋，然后將菌液⑤到培養基平面上。

菌液稀釋的目的是為了獲得⑥菌落。

(4)在培養時,需將培養皿倒置并放在⑦中。若不倒置培養,將導致⑧。

(5)臨床上用"C呼氣實驗檢測人體是否感染Up,其基本原理是Up能將"C標記的分解為NH：,和

"C02o

答案(1)①版酶②紅

⑵③D

(3)④接種⑤涂布⑥單

(4)⑦恒溫培養箱⑧無法形成單菌落

(5)⑨尿素

B組統一命題、省（區、市）卷題組

考點微生物的培養和利用

1.（2017課標全國I,37,15分）某些土壤細菌可將尿素分解成C0?和NL,供植物吸收和利用。回答下列問題：

（1）有些細菌能分解尿素，有些細菌則不能，原因是前者能產生。能分解尿素的細菌不能以尿素的分解

產物C0。作為碳源，原因是o但可用葡萄糖作為

碳源，進入細菌體內的葡萄糖的主要作用是_________________________________________________________

（答出兩點即可）。

（2）為了篩選可分解尿素的細菌，在配制培養基時,應選擇（填“尿素或'尿素+NH,NOJ）作為氮源,

不選擇其他兩組的原因是_________________________________________________________________

（3）用來篩選分解尿素細菌的培養基含有KHF0,和NaMP。,,其作用有（答

出兩點即可）。

答案（1）服酶分解尿素的細菌是異養生物，不能利用CO,來合成有機物為細胞生命活動提供能量，為其

他有機物的合成提供原料

（2）尿素其他兩組都含有NH.,NO3J能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用NIhNO：1,不能起到篩選

作用

（3）為細菌生長提供無機營養,作為緩沖劑保持細胞生長過程中pH穩定

2.（2017江蘇單科,31,7分）苯酚及其衍生物廣泛存在于工業廢水中，對環境有嚴重危害。小明同學準備依據

下圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請回答下列問題：

（1）酚降解菌富集培養基含有蛋白豚、KJ1P0,、MgSO,、苯酚和水,其中可作為碳源的有

（2）將采集到的樣品接種培養,苯酚用量應隨轉接次數增加而逐漸,以達到富集酚降解菌的目的。若

如圖平板中菌落過于密集,應進一步,以便于菌落計數與分離。制備平板培養基時除了需要水、

營養物質外，還必須添加

（3）如圖為連續劃線法示意圖，在圖中（填圖中序號）區域更易獲得單菌落。

（4）采用比色測定法（使用苯酚顯色劑）檢測降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進行顯色反

應，下表中廣5號比色管的苯酚濃度應分別為o

管號123456

苯酚濃度（mg/L）1

如果廢水為50mg/L苯酚溶液，降解后約有2遍的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋（填序號:①5②10

③20）倍后，再進行比色。

答案（1）蛋白豚、苯酚（2）增加稀釋涂布凝固劑（3）③（4）0、0.2、0.4、0.6、0.8③

教師用書專用（3）

3.（2014課標全國11,39,15分）為了調查某河流的水質狀況,某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量.

并進行了細菌分離等工作。回答下列問題：

（1）該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前,隨機取若干滅菌后的空白平板先行

培養了一段時間,這樣做的目的是;然后,將1mL水樣稀釋100倍，在3個平板

上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液;經適當培養后,3個平板上的菌落數分別為39、38和37。據此可得出

每升水樣中的活菌數為

(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌。操作時,接種環通過滅菌,在第二次及以后的劃線時,

總是從上一次劃線的末端開始劃線,這樣做的目的是O

(3)示意圖A和B中,表示的是用稀釋涂布平板法接種培養后得到的結果。

(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養基中并混勻，一部分進行靜置培養，另一部分進行振蕩培養。結果發

現:振蕩培養的細菌比靜置培養的細菌生長速度快。分析其原因是:振蕩培養能提高培養液中的含

量，同時可使菌體與培養液充分接觸,提高的利用率。

答案(1)檢測培養基平板滅菌是否合格3.8X101

(2)灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落

⑶B

(4)溶解氧營養物質

【三年模擬】

非選擇題(共35分)

1.【加試題】[2019屆浙江名校協作體高三聯考,32(一)](7分)請結合以下酵母菌在人類生產生活中的實際

應用，回答下列問題：

(1)為了篩選出符合要求的酵母菌,科研人員在培養基中添加了青霉素，其目的是;

為了將分離到的菌株純化,挑取了菌落在3塊相同平板上劃線,以獲得單菌落。

下圖所示的劃線分離操作,正確的是o但有時科研人員發現其中一塊平板的各劃線區均未見菌生長，

最可能的原因是O

ABD

(2)釀酒和制醋是古老的生物技術，與此生產有關的微生物分別是酵母菌和。以果汁為原料經發酵

制作醋的過程中，首先酵母菌在無氧條件下進行酒精發酵;然后相關菌種在條件下將上述發酵產物轉

變為醋酸。

(3)泡菜腌制過程中起作用的主要是和乳酸菌。但這類食品中含有一定的亞硝酸鹽，為了定量測

定其含量.常用的方法是.

答案(D抑制細菌生長B接種環溫度過高，菌被殺死

(2)醋化醋桿菌有氧

(3)假絲酵母光電比色法

2.【加試題】［2019屆浙江超級全能生9月聯考,32(-)］(7分)食品安全國家標準GB4789,40-2016是奶粉

中可能含有的細菌克羅諾桿菌屬(阪崎腸桿菌)的檢測標準,其流程如圖，請回答:

|一―一:檢祥10。8+1^亞適量|

36±1t.l8±2h

|②選擇培養mL增菌/+mLST-Vm10mL|

44±0.5X：.24±2h

|③顯A培養|

36±1V.24±2h

|挑取疑'似菌落|

|④TSA培養'

25±1t：.48±4h

［挑取黃色菌落〕

生化指標精細鑒定

⑥報告

注釋:

a:一般奶粉中含有的細菌較少,BPW屬于增菌培養基；

b:mLST-Vm培養基:氯化鈉、胰蛋白豚、乳糖、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、十二烷基硫酸鈉、蒸儲水、萬古

霉素；

c:克羅諾桿菌屬及少數其他細菌能在③顯色培養基上呈現較淺的藍綠色:

d:TSA培養基:胰蛋白豚、植物蛋白豚、氯化鈉、蒸儲水等;

e:克羅諾桿菌屬還有許多生化指標需要精細鑒定,最終生成報告。

⑴過程中的BPM培養基為(填“固體”“液體”或“半固體”)培養基。

(2)②選擇培養時,mLST-Vm培養基中添加的萬古霉素是一種抗生素,分析可得,克羅諾桿菌屬對該抗生

素(填“敏感’或"不敏感”)。

(3)由于②的培養產物細菌濃度未知，為避免對其進行稀釋的工作,從②轉移至③培養時，需采用的接種方法

為o③過程所需的顯色培養基在制備時的次序是.

A.調節pHB.稱量藥品C.溶解D.倒平板E.滅菌

(4)克羅諾桿菌屬能產生黃色素，積累到一定量的時候,可使整個菌落呈現黃色，故TSA培養后要挑取黃色菌

落，除注釋中的成分外,TSA培養基中還應包含.

(5)食品安全關系每個人的生命,對一種細菌的鑒定程序也相當嚴格。在上述檢驗程序中，步驟

(填序號)對克羅諾桿菌屬具有一定的選擇或鑒定作用。

答案(D液體

(2)不敏感

(3)劃線分離法BCAED

(4)瓊脂(或瓊脂糖)

(5)②③④⑤(2分,答全給分)

3.【加試題】[2019屆浙江五校9月聯考,32(一)](7分)某村莊有一條小溪，近幾年由于上游幾家乳膠廠不

斷向其中排放廢水,小溪變得不再清澈。某同學想測定該溪水中的細菌含量情況。回答下列問題：

(1)先根據所學知識制備LB培養基。制備該培養基的步驟是:計算-稱量-溶化—滅菌-倒平板,下列關于制

備LB培養基的敘述，錯誤的是()

A.培養基應先調pH再進行滅菌

B.培養基應先滅菌再分裝到培養皿

C.融化瓊脂時不能使培養基溢出或燒焦

D.滅菌時一般用高壓蒸汽滅菌鍋在121℃,500g/cm”壓力下滅菌15分鐘

(2)該同學利用上述制備的培養基來檢測水樣中的細菌數量，他所選擇的分離方法應是;該同學在

接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養了一段時間，這樣做的目的是o接種在

超凈工作臺上進行，工作臺上實驗前一段時間需打開，實驗中需關閉的是(A.酒精燈B.照明燈C.

紫外線D.過濾風)。

(3)值