蘆丁中黃酮對光老化裸鼠皮膚的修復作用

摘要：目的了解蘆丁中黃酮提取物所制成的乳膏用于光老化裸鼠皮膚修復的具體作用。方法比較正常組（未接受光老化處理）、模型組（光老化處理后接受生理鹽水涂抹治療）、實驗組（光老化處理后接受黃酮軟膏涂抹治療）裸鼠皮膚組織中SOD、CSH-Px、CAT、MDA、Ⅰ型膠原蛋白含量的差異，同時觀察裸鼠皮膚組織形態特征。結果實驗后測三組裸鼠皮膚中SOD、CSH-Px、CAT、MDA、Ⅰ型膠原蛋白的含量均有統計學差異（均有P<0.05），其差異主要來源是實驗組和正常組、實驗組和模型組之間的差異。結論蘆丁中黃酮提取物所制成的軟膏用于光老化裸鼠的皮膚修復，有助于裸鼠皮膚組織中多種有益物質的生成，最終有助于皮膚完整性的修復過程。關鍵詞：蘆丁；黃酮；光老化；裸鼠；皮膚衰老是生物界最基本的自然規律，皮膚的衰老除了內源性原因外，紫外線輻射、吸煙、接觸有害性化學物質等均為導致皮膚老化的環境因素。隨著大氣平流層的臭氧層的進行性破壞，人類受到短波紫外線和部分中波紫外線的暴露機會越發強烈，皮膚老化性主要表現為皮膚粗糙、皺縮、無光澤，損傷嚴重者會引發皮膚免疫抑制反應，甚至形成皮膚腫瘤[1]。人類和動物皮膚光老化的共同機理是機體的氧化和抗氧化功能以及氧自由基的異常增多。生物類黃酮亦稱為維生素P，在自然界中廣泛分布，具有多種生物活性，配合維生素C在臨床上運用已久，安全性和穩定性在臨床上已經獲得了充分肯定[2]。為探討蘆丁中黃酮提取物用于光老化小鼠，對其皮膚的具體修復作用，本研究小組特進行了對照實驗研究，現將結果匯報如下。1對象與方法1.1研究對象：為光老化裸鼠造模，去毛成裸鼠（由長沙醫學院動物實驗中心提供）50只。在波長為280-320的UVB燈管（北京士博科技有限公司提供）下模擬紫外線長期照射（照射距離60厘米，每天照射1次，每次60分鐘，連續2周），照射期間照常喂食。1.2分組及處理：在造模裸鼠中挑選40只按照體重匹配1：1均分為模型和實驗兩組，分別接受如下處理。

正常組：未經過光老化處理，且不做任何處理的正常裸鼠。模型組：經過光老化處理，生理鹽水涂抹治療的裸鼠，每12小時一次，為期1周。實驗組：經過光老化處理，蘆丁粉末（山西云鵬制藥有限公司提供）制作成的乳膏進行涂抹治療的裸鼠，每12小時一次，為期1周。1.3蘆丁乳膏制作方法：蘆丁黃酮提取物與乳劑基質按照常規制備工藝制作成水包油型的外用乳膏，其蘆丁黃酮質量構成比為10%左右。1.4評定指標：取樣皮膚組織進行SOD、CSH-Px、CAT、MDA、Ⅰ型膠原蛋白含量的檢測（檢測方法略）；同時在光學顯微鏡下觀察裸鼠皮膚結構的變化。1.5統計分析：采用統計軟件SPSSl8.0建立數據庫并分析，計量資料使用（均值±標準差）形式進行統計描述，兩組計量資料的比較使用t檢驗，多組計量資料的比較使用F檢驗。檢驗水準取0.05，雙側概率。2結果2.1實驗前測三組裸鼠基本情況三組裸鼠體重均位于20-25克之間，均為月齡5個月的雌鼠，每組20只。其中正常組裸鼠體重（22.50±4.63）克、模型組裸鼠體重（23.09±4.19）克、實驗組裸鼠體重（29.15±4.25）克。三組裸鼠實驗初體重、皮膚組織中生物物質含量的差異均無統計學意義（均有P>0.05），資料具有可比性。2.2實驗后測三組裸鼠皮膚中各生化物質表達量的比較實驗后測三組裸鼠皮膚中SOD、CSH-Px、CAT、MDA、Ⅰ型膠原蛋白的含量均有統計學差異（均有P<0.05）。實驗組與正常組比較，SOD、CSH-Px、CAT含量的差異有統計學意義（均有P<0.05）。實驗組與模型組比較，所有指標含量的差異均有統計學意義（均有P<0.05）。表1實驗后測三組裸鼠皮膚中各生化物質表達量的比較組別數量SODCSH-PxCATMDAⅠ型膠原蛋白正常組20136.66±19.62129.52±16.29312.47±40.5222.45±6.471.20±0.62模型組20101.75±16.52103.41±3.48246.33±30.4329.88±7.540.56±0.09實驗組20132.09±20.44ab120.87±10.44ab276.88±24.62ab24.30±5.18b1.15±0.23bF20.08227.46420.7137.15017.068P0.000*0.000*0.000*0.002*0.000*注：*表示差異有統計學意義；a實驗組與正常組比較差異顯著；b實驗組與模型組比較差異顯著2.3實驗組裸鼠皮膚結構在光學顯微鏡（10×50）下觀察顯示，模型組裸鼠皮膚的表皮明顯增厚，組織結構不完整，纖維組織排列較為紊亂，大范圍出現斷裂現象，炎癥細胞浸潤明顯，而皮脂腺也出現了不規則增生現象。正常組和實驗組裸鼠皮膚的表皮角質較薄，組織結構完整，各層細胞清晰，真皮層纖維組織均勻的呈現為波浪狀分布。3討論近年來由于紫外線照射所致皮膚損傷成為臨床研究熱點，有相關報道指出，中波紫外線所致的皮膚光老化主要原因在于，刺激皮膚分泌一系列炎癥因子，啟動了MAPK信號通路有關。黃酮化合物的發現歷史頗為悠久，早在20世紀30年代就有藥物化學家證實，黃酮（維生素P）的抗壞血作用遠遠勝過維生素C。隨著黃酮提取物生物功效的相關研究日益深入，臨床中黃酮藥物的應用也日趨廣泛[2]。本研究結果發現，對蘆丁中黃酮進行提取后所制成的軟膏，能較好的改善光老化皮膚功能，主要表現在皮膚中活性物質的逐步升高。SOD、CSH-Px、CAT均為抗氧化酶，具有清除自由基的作用，這些物質含量的升高有助于絲裂原活化蛋白激酶信號轉導過程的回復，從而調控細胞的增殖、分化和凋亡過程。而皮膚中MDA（丙二醛）的進行性減少也與皮膚抗氧化功能的逐步恢復密切相關。顯微結構觀察也發現，使用黃酮軟膏的裸鼠，其皮膚完整性更好，組織結構也較為清晰，說明黃酮藥物的調理作用是持久、深層次的[3]。綜上，蘆丁中的黃酮提取物同甘草等物質一樣，對于光老化皮膚具有一定修復作用，而其療效的優勢具體是黃酮單種物質的作用效果，還是蘆丁中其他生物制劑的作用，則有待進一步深入研究以考證。參考文獻[1]王燕華，蔡麗敏，楊晶，等.紫外線誘導人皮膚成纖維細胞形態改變及對基質金屬蛋白酶表達的影響[J].基礎醫學與臨床，2017，（3）：360-363.[2]火萬琴，杜華.光敏性皮炎的中西醫研究進展[J].西北國防醫學雜志，2017，（2）：