1飼料中恩拉霉素的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本文件描述了飼料中恩拉霉素的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)本文件恩拉霉素A和恩拉霉素B的檢出限均為0.05mg/kg，定量限均為0.10mg/kg。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格GB/T20195動(dòng)物飼料試試樣中的恩拉霉素A和恩拉霉素B用鹽酸甲醇溶液或甲酸甲醇溶液提取，固相萃取柱凈化，液相色5.5鹽酸溶液（0.1mol/L取濃鹽酸4.2mL，用水稀釋至500mL，混勻。5.85%氨水溶液：移取氨水5mL，用水稀釋至100mL，混勻。5.11鹽酸甲醇溶液（0.1mol/L移取鹽酸1mL，用甲醇稀25.14標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1mg/mL準(zhǔn)確稱取恩拉霉素A（CAS：344）：），5.17標(biāo)準(zhǔn)系列溶液Ⅱ：精密量取適量混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（55.18固相萃取柱A：200mg/3mL，填料為改性的苯乙烯-二乙烯按GB/T20195制備樣品，至少約200g，粉碎使其全部通過(guò)0平行做兩份試驗(yàn)。稱取試樣2g（精確至0.01g）于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入鹽酸甲醇溶液（5.6）20mL，渦旋混勻，超聲提取30min，渦旋振蕩10min，10000r/min離心5min。準(zhǔn)確移取1mL上清液，渦旋混勻，超聲30min，渦旋振蕩10min，10000r/min離心5min，上清液備用。3取空白試樣，按8.1和8.2處理至氮?dú)獯蹈桑瑴?zhǔn)確移取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液Ⅰ（5.16）各1mL溶解殘余物，制得濃度分別為2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/a）色譜柱：C18柱，柱長(zhǎng)100mm，內(nèi)徑2.1mm，粒徑1.8μm，或性能相當(dāng)者；b）柱溫：35℃;），），A相%%055a）電離方式：電噴霧電離，正離子模式（b）檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM4表2多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）離子對(duì)、錐孔m/zV在儀器的最佳條件下，分別取基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（8.3）和試樣溶液（8.2）上機(jī)測(cè)定，恩拉霉素A和恩拉霉素B基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的定量離在相同試驗(yàn)條件下，試樣溶液（8.2）與基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)之內(nèi)。根據(jù)表2選擇的定性離子對(duì)，比較試樣譜圖中待測(cè)物定性離子的相對(duì)離子豐度與質(zhì)量濃度接近的%>50>20～50>10～20最大允許偏差圍內(nèi)，如超出線性范圍，應(yīng)用空白基質(zhì)溶液稀釋（f倍）后重新測(cè)定分析。單點(diǎn)校準(zhǔn)定量時(shí)，試樣溶液（8.2）中待測(cè)物的質(zhì)量濃度與基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度相9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理5w=×f…………………式中:ρ1i——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中恩拉霉素A或恩拉霉素B的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升V——提取溶液的體積，單位為毫升（mLf——上機(jī)測(cè)定的試樣溶液超出規(guī)定范圍后，m1——試樣的質(zhì)量，單位為克（gw=×f……………A1i——試樣溶液中恩拉霉素A或恩拉霉ρs1i——標(biāo)準(zhǔn)溶液中恩拉霉素A或恩拉霉素B的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升（ng/mLV——提取溶液的體積，單位為毫升（mLf——上機(jī)測(cè)定的試樣溶液超出規(guī)定范圍后，As1i——標(biāo)準(zhǔn)溶液中恩拉霉素A或恩拉霉素B的色譜m1——試樣質(zhì)量，單位為克（gw2i=×f…………………ρ2i——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中恩拉霉素A或恩拉霉素B的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升f——上機(jī)測(cè)定的試樣溶液超出線性范圍后，進(jìn)一步稀釋的倍數(shù)。m2——試樣的質(zhì)量，單位為克（g6A2i——試樣溶液中恩拉霉素A或恩拉霉素B色譜峰面Ρs2i——標(biāo)準(zhǔn)溶液中恩拉霉素A或恩拉霉素B的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升（ng/mLf——上機(jī)測(cè)定的試樣溶液超出規(guī)定范圍后，m2——試樣質(zhì)量，單位為克（g測(cè)定結(jié)果以平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留3試樣中恩拉霉素的含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)w計(jì)，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）表示，按公式（5）計(jì)算：在重復(fù)性條件下，兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對(duì)差值不大于該算術(shù)平均值的20%。7恩拉霉素A和恩拉霉素B基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液的定量離子色譜圖見(jiàn)——恩拉霉