實驗動物微生物質量與動物實驗的關系實驗動物微生物學和寄生蟲學分類合格動物群中常見微生物和寄生蟲污染及控制實驗動物微生物學和寄生蟲學質量檢測實驗動物微生物學和寄生蟲學分類二、實驗動物微生物學和寄生蟲學等級分類普通級動物（conventionalanimal）CV清潔級動物（cleananimal）CL無特定病原體級動物（specificpathogenfreeanimal)SPF無菌級動物（germfreeanimal）GF悉生級動物（gnotobioticanimal)GN小鼠和大鼠豚鼠、兔和地鼠犬和猴清潔級SPF級無菌級普通級清潔級SPF級無菌級普通級SPF級常用實驗動物微生物學等級普通級動物ConventionalAnimal(CV)

必須是不攜帶主要人獸共患病病原體和動物烈性傳染病病原體。飼養條件

飼育在開放環境里,使用的墊料和飼料,只消毒不滅菌;其飲水須符合城市飲用水標準。適用范圍只能用于教學實驗和某些科研工作的預實驗，不能用于科學研究和發表論文的實驗。消毒和滅菌的區別消毒（disinfection）是指將傳播媒介上病原微生物清除或殺滅,使其達到無害化的要求,并非殺死所有的微生物,包括芽孢。滅菌（sterilization）是指將傳播媒介上所有微生物全部清除或殺死,特別是將抵抗力最強的細菌芽孢清除或殺死。消毒劑（disinfectant）是泛指能殺死微生物的消毒藥劑,并非一定要殺死所有的微生物,包括細菌芽孢。而滅菌劑（sterilizingagent）是特指那些能殺死所有微生物包括100%殺死細菌芽孢的高效類消毒劑。應用的場所與處理的物品不同。滅菌主要用于處理醫院中進入人體無菌組織器官的診療用品和需要滅菌的工業產品，消毒用于處理日常生活和工作場所的物品，也用于醫院中一般場所與物品的處理。清潔級動物（CleanAnimal,CL)除普通動物應排除的病原體（主要的人獸共患病原體和動物烈性傳染病的病原體），又不攜帶對動物危害大和對科學研究影響大的病原體。這是根據我國國情自行設立的一種等級動物。也是我國目前主要使用的質量控制等級實驗動物。飼養環境清潔級動物常來自屏障環境的SPF動物的后代或降級。飼育使用的墊料、飼料、飲用水和用具等均應經過滅菌處理；或飲用水經過酸化，飼料經過鈷（Co60）輻射滅菌。工作人員需穿無菌服進入屏障環境進行飼養和實驗。適用范圍課題研究和論文發表，以及研制新藥，生物制品，保健食品，化妝品等科學實驗。無特定病原體級動物（SpecificPathogenFreeAnimal，SPF）不攜帶主要人獸共患病原體和動物烈性傳染病的病原體；不攜帶對動物危害大和對科學研究影響大的病原體；還不攜帶主要潛在感染或條件致病菌的動物。飼養環境

SPF動物的飼育，一般是先培育出無菌動物，然后再將其后代轉移到屏障環境中進行繁育建群。工作人員需穿無菌服裝才能進入屏障環境進行飼育或試驗操作。適用范圍適用于大多數科研工作。無菌級動物（germfreeanimal，GF）

無菌動物是指：動物體內外無可檢出的一切生命體的動物。

飼養環境子宮摘除術（剖腹產）飼育在隔離環境（隔離器內）一切用品經過嚴格包裝、嚴格滅菌后，通過傳遞倉送入隔離器通過手套進行間接實驗操作。悉生動物（gnotobioticanimal)GN動物體內外所攜帶的生命體是已知的普通級動物清潔級動物SPF級動物無菌級動物悉生動物不同微生物學等級的實驗動物比較項目GFSPFCLCV傳染病無無無大危害可能有寄生蟲無很少無蠕蟲和球蟲可能有實驗結果準確較準確較準確有疑問應用動物數少量少量較大量多或大量長期實驗效果可能好可能好較好困難死亡率很低低較低高長期實驗存活率約100％約90％約80%40％左右實驗標準設計可能可能可能不可能統計價值很好較好較好不準確實驗結果的價值很高高較高有疑問一、大、小鼠病原菌檢測項目二、豚鼠、地鼠、兔病原菌檢測項目三、犬、猴病原菌檢測項目四、大、小鼠病毒檢測項目五、豚鼠、地鼠、兔病毒檢測項目六、犬、猴病毒檢測項目

動物種類

動物等級應排除寄生蟲項目小鼠大鼠無|無|清體外寄生蟲（節肢動物）Ectoparasites●●菌|特|潔弓形蟲

Toxoplasmagondii●●動|定|動兔腦原蟲Encephalitozooncuniculi○○物|病|物卡氏肺孢子蟲Pneumocystiscarinii○○|原|全部蠕蟲AllHelminths

●●|體_____________________________________________________________

|動鞭毛蟲Flagellates●●|物纖毛蟲Ciliates

●●

|________________________________________________________________

無任何可檢測到的寄生蟲●●

注：●必須檢測項目，要求陰性；○必要時檢測項目，要求陰性。七、大、小鼠寄生蟲學檢測指標

動物種類

動物等級應排除寄生蟲項目豚鼠地鼠兔無|無|清|普體外寄生蟲（節肢動物）Ectoparasites●●●菌|特|潔|通弓形蟲

Toxoplasmagondii●●●動|定|動|動物|病|物|物

|原|

|

|體|兔腦原蟲

Encephalitozooncuniculi○○|

|愛美爾球蟲Eimariaspp.○○||卡氏肺孢子蟲

Pneumocystiscarinii●

|

|全部蠕蟲AllHelminths●●●

|

|鞭毛蟲Flagellates●●●|纖毛蟲

Ciliates●

|________________________________________________________________________

無任何可檢測到的寄生蟲

注：●必須檢測項目，要求陰性；○必要時檢測項目，要求陰性。八、豚鼠、地鼠、兔寄生蟲學檢測指標

動物種類動物等級應排除寄生蟲項目犬猴

無|普體外寄生蟲（節肢動物）Ectoparasites●●特|通弓形蟲Toxoplasmagondii●●定|動病|物原

體全部蠕蟲AllHelminths●●

溶組織內阿米巴Entamoebaspp.○●

瘧原蟲Plasmodiumspp.●

鞭毛蟲Flagellates●●

注：●必須檢測項目，要求陰性；○必要時檢測項目，要求陰性。九、犬、猴寄生蟲學檢測指標合格動物群中常見微生物和寄生蟲污染及控制普通級動物中弓形蟲（Toxoplasmagondii）污染

弓形蟲是一種人畜共患的寄生蟲，小鼠，大鼠，地鼠，豚鼠，家兔和非人靈長類實驗動物及貓，牛，羊，豬等都能感染。弓形蟲是細胞內寄生蟲，根據不同發育階段分為五型：滋養體和包囊出現在中間宿主體內，裂殖體，配子體和卵囊只出現在終宿主－－貓體內。貓體內可以存在以上5種形式的弓形蟲。傳播途徑任何動物食入弓形蟲的包囊，卵囊或活體，都能受到感染而患弓形蟲病。貓科動物的糞便中，常帶有卵囊。可以污染草原、牧場、蔬菜、水果等。貓的身上和口腔內常常有弓形蟲包囊和活體。直接接觸貓易受感染。狗的身上和口腔內常有包囊或活體，養狗的人不小心可能感染。其他家畜、家禽，如：雞、鴨、鵝、豬、牛、馬、羊等動物體內有時帶弓形蟲包囊和活體。所以食用肉、蛋奶也可能感染，魚肉體內有時也有弓形蟲包囊或活體。魚也是一個傳染源，另外某些吸血昆蟲，叮咬人時也可以感染。

市售的各種肉制品、香腸、火腿腸、罐頭也都可以成為傳染源。奶制品、奶油制品、蛋類制品、蛋糕、各類餅干、點心、冰點有時也能成為傳染源。

弓形蟲感染可引起腸粘膜和腸系膜淋巴、心、眼、腎上腺、脾、腦、肺、肝、胎盤及肌肉組織的壞死和損傷。小鼠感染后會嚴重影響實驗結果弓形蟲感染會改變白血病、乳腺癌、肝癌對化學致癌物的反應性。影響妊娠期胎兒發育弓形蟲污染的預防實驗動物設施內要保持清潔，定期消毒，嚴格阻斷貓及其排泄物對設施、飼料、墊料和飲水的污染。盡一切可能消滅野鼠。清潔級動物中的仙臺病毒仙臺病毒屬于副粘病毒科,副粘病毒屬,與人類HA－2病毒同被歸入副流感病毒Ⅰ型,它們之間有密切的抗原關系現在認為:嚙齒類實驗動物是仙臺病毒唯一自然宿主。感染途徑空氣和接觸途徑是病毒傳播和擴散的方式。仙臺病毒除了鼻內途徑外，其它途徑均不引起小鼠的自然感染。偶爾可在腎、肝、脾、等器官發現病毒，但在尿、血和腸內則沒有病毒。不同品系小鼠對仙臺病毒感染的易感性和敏感性明顯不同。在自發性流行中抵抗力大的小鼠如SJL/j等死亡率接近0％，高度易感小鼠如Swiss裸鼠則可接近100％。感染的裸鼠其疾病癥狀出現的時間比有免疫機能的小鼠稍晚，并伴有進行性消瘦。在較長的時間里陸續死亡。仙臺病毒在鼠群中引起兩種基本類型的感染慢性：不明顯的感染，在CV鼠群中長期存在。離乳不久至6周齡的小鼠，感染率很高，伴有血清學的轉變，病鼠逐漸康復。急性：顯形感染，一般持續2-7個月，以后自愈或轉為不顯形感染。臨床證狀：呼吸困難，新生仔鼠死亡，離乳率顯著減低，成年鼠妊娠期延長。清潔級鼠群中仙臺病毒感染是最難控制的病毒感染之一。凡新引進的動物必須經8周檢疫(檢查引入動物和“哨兵”動物的病毒抗體)。一旦在屏障環境內的鼠群中檢出仙臺病毒抗體陽性，若不及時清除所有被感染動物，將導致屏障設施的失敗。2.暫停繁殖，在相對靜止條件下保存這種非繁殖群直至感染消除(約2個月)，然后恢復繁殖。兩種方法

1.消滅已感染鼠群,重引符合標準的種鼠或用無菌技術剖腹取胎重建繁殖群。清潔級動物中的小鼠肝炎病毒(MHV)屬冠狀病毒科，冠狀病毒屬，與人冠狀病毒(普通感冒，或肺炎)，大鼠冠狀病毒(新生大鼠肺炎)，大鼠唾液腺病毒(唾液腺，淚腺炎)同屬。有多種毒株。小鼠肝炎病毒是實驗小鼠重要的病毒感染之一。呈世界范圍分布，無明顯的季節性。臨床表現為肝炎，腦炎和腸炎。多數情況下是亞臨床或慢性感染。急性發病的臨床癥狀：被毛粗亂，小鼠倦怠，營養不良，脫水，體重減輕。同籠老鼠擠做一團，肌肉震顫，尿色變深，針刺時不愿移動等。老齡老鼠傾向于發生脫水和消瘦。傳播途徑MHV傳播方式有經空氣和接觸兩種。小鼠是唯一能自然感染MHV的宿主，通過腦內接種,可實驗感染棉鼠,大鼠和地鼠,但兔和豚鼠無反應。MHV是清潔級實驗小鼠難以清除的病毒之一。進行剖腹取胎術,結合屏障環境內維持飼養,才能培育無MHV感染的清潔級以上小鼠。必須注意MHV垂直傳播的可能性。預防/處理定期檢測，有利及時發現屏障環境內的鼠群中鼠肝炎病毒感染。重新引進符合標準的種群無菌技術剖腹取胎重建繁殖群同步交配代乳方法重建繁殖群暫停繁殖方法重建繁殖群同步交配的方法采用同步交配,把MHV陽性鼠群中懷孕母鼠自然分娩的新生鼠在分娩后的24小時內傳給符合標準的代乳鼠帶乳。然后在代乳鼠3周齡,6周齡和12周齡進行血清學檢測,可獲MHV陰性小鼠。暫停繁殖法：從感染群中移去所有新生鼠,離乳鼠和妊娠鼠。停止繁殖15周,可排除感染。15周后出生的第一代新生在3－4周齡MHV血清陽性,四周后因從母方獲得的抗體衰退而血清陰性。在第二代小鼠3－9周齡MHV血清陰性。SPF級實驗動物中的細菌污染綠膿桿菌金黃色葡萄球菌肺炎克雷伯氏桿菌PseudomonasaerugiosaStaphylococcusauresKlebsiellapneumoniae綠膿桿菌綠膿桿菌是動物和人類胃腸道的一種常在菌。實驗動物可通過口咽和胃腸途徑感染，常可在小鼠的口咽部和腸道發現。該菌可導致遠交群小鼠(Swiss-Webster)和近交系小鼠(C3H)斜頸和轉圈癥狀，被看作是小鼠疾患的主要細菌病原體。對免疫環境遭受損害或抑制的宿主，綠膿桿菌可穿過局部淋巴環境和血管環境，導致致死性敗血癥。傳播在常規小鼠群的飲水器中能檢到綠膿桿菌在溫暖、潮濕的環境中（如SPF飼養室的淋浴更衣處）也常檢到這種菌。正常人皮膚中也可攜帶綠膿桿菌，由SPF屏障環境內的工作人員帶入屏障環境。預防定期對SPF小鼠進行微生物學監測，及時淘汰被感染的鼠群。對屏障環境的淋浴更衣室常規進行徹底打掃消毒滅菌并要求進入屏障環境的工作人員嚴格執行操作規程和個人防護用品的穿戴。通過酸化(用鹽酸調正PH2.5)氯化(10ppm)飲水來預防飲水器對SPF小鼠的感染金黃色葡萄球菌在小鼠皮膚和粘膜上，常檢到致病的金黃色葡萄球菌和一般不致病的表皮葡萄球菌。雖然金黃色葡萄球菌還沒有被廣泛看作實驗小鼠的原發性疾病，但有些文獻中報道了其作為皮膚感染，淋巴感染或粘膜感染病原學因子。感染小鼠自發性葡萄球菌感染與小鼠品系，營養及屏障環境的操作管理有關。幼鼠比成年鼠易感。無胸腺裸小鼠因缺少保護性被毛，并缺乏T-細胞，而經常發生皮膚和眼窩的葡萄球菌感染。主要傳播途徑據對SPF設施的細菌學監測發現，從健康SPF小鼠分離的金黃色葡萄球菌的噬菌體型常與從動物管理員體表分離的品系一致。從有臨床癥狀的感染動物最常分離到的凝固酶陽性葡萄球菌的培養和噬菌體型也能從動物管理員那兒分離到。預防/處理定期檢測及時淘汰患鼠酸化飲用水將飼料和墊料徹底消毒滅菌經常更換墊料飼養人員和實驗人員嚴格執行隔離措施和操作細則肺炎克雷伯氏桿菌克雷伯氏桿菌是人和動物的腸道常在菌，是一種人和動物泌尿，呼吸道感染有關的條件性致病菌小鼠自發爆發的疾病臨床癥狀是：食欲不振，弓背，被毛粗亂，打噴嚏及呼吸加快。預防/處理為了從受感染的小鼠中清除這種病原體，很可能需要進行剖腹產和嚴格的屏障環境。三、實驗動物微生物學和寄生蟲學質量檢測檢測目的檢測方法檢測規則檢測目的排出人獸共患病，確保從事實驗動物生產的飼養人員和動物實驗的科研或教學人員身體健康。排出危害實驗動物的常見病多發病，確保實驗動物種群的健康，為生命科學研究提供合格的試驗動物。1）對新引進的普通級動物進行檢疫，防止人獸共患病原體或動物烈性傳染病帶入實驗動物種群，或傳播給試驗人員。2）定期對生產繁殖的試驗動物種群進行抽樣檢測，及時了解實驗動物生產群體微生物學和寄生蟲學質量；必要時作出淘汰或降級處理。3）當實驗動物種群發生傳染病流行時，檢出感染途徑，提出控制或預防措施。4）對實驗動物生產或實驗設施進行靜態和動態檢測，及時掌握實驗動物環境條件，了解是否符合實驗動物國家標準。研究確定試驗動物微生物學和寄生蟲學登記標準的劃分，和不同等級實驗動物的微生物學和寄生蟲學質量控制指標。確保使用實驗動物的藥品和生物制品的質量，保證進行動物實驗的科學研究成果和各種動物試驗結果的可能性、準確性和重復性。國內外通用,比較成熟,便于交流。可操作性強，檢測結果易判斷，檢測率較高。易實現標準化和規范化，便于推廣。國家推薦性標準《實驗動物微生物學檢測方法1～4》GB/T14926.1～14926.64－2001《實驗動物寄生蟲學檢測方法》GB/T18448.1～18448.10－2001實驗動物病毒學檢測方法目前我國對實驗動物病毒學檢測通常使用血清學方法，包括：酶聯免疫吸附試驗（ELISA）免疫熒光試驗（IFA）免疫酶染色試驗（IEA）血球凝集（HA）和血球凝集抑制（HI）試驗檢測方法實驗動物細菌學檢測方法通常采用細菌分離和培養方法。根據培養基上菌落特征，將分離到的可疑菌落作生化鑒定。1）檢測人員的實際工作經驗，直接影響到其對檢測結果的判斷準確性。2）對部分細菌，如沙門氏菌，支原體等已開展血清學方法檢測。3）泰澤氏病原體不能在人工培養基上生長，目前還以病變組織壓片鏡檢進行檢測，并結合病理學檢查結果作出判斷。實驗動物寄生蟲檢測方法通常在光學顯微鏡下查找寄生蟲的蟲體、蟲卵或孢子。對人獸共患的弓形蟲，則采用各種血清學的方法進行檢測。檢測規則檢測頻率擬以間隔2

3個月為宜。在實驗動物的國家標準中，即規定：每3個月至少檢測1次。

病原體剛侵入實驗動物群體時,較易分離到病原體;當流行趨于平靜，可能分離不到病原體,但特異性抗體的檢出率上升。通常在2

3個月內，抗體檢出率不會下降太大。隨著時間的推移，某些個體的抗體效價水平下降，以及由于流行平靜后，新生的非感染動物增加，使抗體陽性動物的檢出大量減少。取樣數量通常對于動物群體中感染率高的病原體，只需少量采樣就能檢出；而當感染動物比例低時，若不增加取樣數量，就可能漏檢。因此可根據實驗動物群體中病原體的感染率決定取樣數量。如病原體感染率為1％，要檢出感染動物至少應取樣100只。達標的實驗動物須排除的病原體感染率應為“0”,取樣數量須達60-90%以上，其檢測結果的可信度方可達到95-99%。在標準中采用的取樣數量和取樣方法，將適當參考實驗動物群體大小，兼顧絕大多數病原體的感染率，以決定取樣數量，并規定取樣點。病原體檢測必須的取樣數量感染率%檢測可信度99％95％90％9022180322704326054350754409653013972021141110442922實驗動物不同生產群體取樣數量群體規模，只取樣數量，只<100>5100～500>10>500>20每只隔離器檢測2只活體取樣對實驗動物的活體取樣未作規定。無特殊要求時，對雞、兔、犬和猴的活體取樣，可在生產繁殖設施內進行。傳染源傳播途徑易感動物一、實驗動物傳染病流行的基本環節

傳染源（1）人源性（2）動物源性引起傳染的條件（1）要有病原性和一定的毒力（2）侵入體內的病原體要達到一定的數量（3）病原體要有適當的侵入門戶傳播途徑

切斷傳播途徑是控制傳染病的主要措施。一、直接傳染：健康動物與患病動物（包括攜帶病原體動物）直接接觸而感染。如狂犬病病毒、猴B病毒、艾滋病病毒等。①水平傳播：實驗動物群體中互相的傳播。傳播途徑包括消化道、呼吸道或皮膚粘膜創傷等。如沙門氏