抗豬SIgA單克隆抗體的制備及純化操作規程_第1頁
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文檔簡介

2抗豬SIgA單克隆抗體的制備及純化操作規程本文件規定了利用Balb/c雌性小鼠(SPF級)進行抗豬SIgA單克隆抗體的制備、純化GB/T35892實驗動物.胞遇到抗原的刺激后,激活、分化為漿細胞,漿細胞可合成和分泌抗..小鼠骨髓瘤細胞的一種,最初都來源于由礦物油誘導細胞由于不能使用核酸合成補救合成途徑而無法生存[1]。3.SIgA:分泌型免疫球蛋白A(SecretoryiSPF:無特定病原(SpecialpaDMEM:細胞培養基(Dulbecco'sModifiedEagleMediELISA:酶聯免疫吸附測定法(Enzyme-linkedimmuIPMA:免疫過氧化物酶單層細胞試驗法(ImmunoperoxidasSf9細胞:草地貪夜蛾細胞(SpodopterafrugiprBV-SC:重組桿狀病毒SC(recombinantB..5.3抗原.pET32a-SC重組蛋白(制備方法見附錄A).4),.6.2.1取上述免疫合格的小鼠,消毒處理后,無菌采集脾臟組織,對脾臟用不含血清的DMEM液體培養基(以下簡稱“不完全培養基”)進行簡單的潤洗后,用..6.4.1將上述處理好的B細胞和小鼠骨髓瘤Sp2/0細胞按照4:1~5:1的數量比例進行混勻后,),μL/孔,37℃5%CO2培養箱培養,于7~充飼養細胞,繼續培養。根據雜交瘤細胞的生長情況(一般細胞交瘤細胞的鑒定及亞克隆。將篩選鑒定為陽性的克隆細胞再按照半量換液法逐漸替換成含.采用免疫熒光試驗(以下簡稱“IFA”)對上述測定,細胞出現綠色熒光判定為陽性,未出現綠色熒光判定為陰性(檢測方法見附錄D)。.5.層細胞試驗法(以下簡稱“IPMA”)進行測定。當細胞著色呈棕紅色判定陽性,細胞不著....的動態載量填充填料后進行親和純化。用含20mmol/L檸67.A.2.1合成基因序列A.2.2重組蛋白的大量表達、純化8..B.2.2PBST洗滌3次,300B.2.3PBST洗滌3次,300B.2.4以PBS溶液作為樣品稀釋液,對待檢樣本按比例進B.2.6PBST洗滌3次,300μL/孔,拍干,加入TMB顯色液,100μL/孔,室溫(25℃,可D450nm。B.3結果判定.P/N=[(樣品孔D450-空白孔D450)/(陰性對照孔D4509..C.2.1處死小鼠后,無菌注射DMEM液體培養基51..D.2.1重組桿狀病毒rBV-SC接毒后48h(MOI=1),PBS洗板3次,200μL/孔,D.2.5PBS洗板3次,200μL/.1..E.2.1重組桿狀病毒rBV-SC接毒后48h(MOI=1),PBS洗板

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