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2抗豬SIgA單克隆抗體的制備及純化操作規(guī)程本文件規(guī)定了利用Balb/c雌性小鼠（SPF級）進行抗豬SIgA單克隆抗體的制備、純化GB/T35892實驗動物.胞遇到抗原的刺激后，激活、分化為漿細胞，漿細胞可合成和分泌抗..小鼠骨髓瘤細胞的一種，最初都來源于由礦物油誘導(dǎo)細胞由于不能使用核酸合成補救合成途徑而無法生存[1]。3.SIgA：分泌型免疫球蛋白A（SecretoryiSPF：無特定病原（SpecialpaDMEM：細胞培養(yǎng)基（Dulbecco'sModifiedEagleMediELISA：酶聯(lián)免疫吸附測定法（Enzyme-linkedimmuIPMA：免疫過氧化物酶單層細胞試驗法（ImmunoperoxidasSf9細胞：草地貪夜蛾細胞（SpodopterafrugiprBV-SC：重組桿狀病毒SC（recombinantB..5.3抗原.pET32a-SC重組蛋白（制備方法見附錄A）.4），.6.2.1取上述免疫合格的小鼠，消毒處理后，無菌采集脾臟組織，對脾臟用不含血清的DMEM液體培養(yǎng)基（以下簡稱“不完全培養(yǎng)基”）進行簡單的潤洗后，用..6.4.1將上述處理好的B細胞和小鼠骨髓瘤Sp2/0細胞按照4:1~5:1的數(shù)量比例進行混勻后，），μL/孔，37℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，于7~充飼養(yǎng)細胞，繼續(xù)培養(yǎng)。根據(jù)雜交瘤細胞的生長情況（一般細胞交瘤細胞的鑒定及亞克隆。將篩選鑒定為陽性的克隆細胞再按照半量換液法逐漸替換成含.采用免疫熒光試驗（以下簡稱“IFA”）對上述測定，細胞出現(xiàn)綠色熒光判定為陽性，未出現(xiàn)綠色熒光判定為陰性（檢測方法見附錄D）。.5.層細胞試驗法（以下簡稱“IPMA”）進行測定。當細胞著色呈棕紅色判定陽性，細胞不著....的動態(tài)載量填充填料后進行親和純化。用含20mmol/L檸67.A.2.1合成基因序列A.2.2重組蛋白的大量表達、純化8..B.2.2PBST洗滌3次，300B.2.3PBST洗滌3次，300B.2.4以PBS溶液作為樣品稀釋液，對待檢樣本按比例進B.2.6PBST洗滌3次，300μL/孔，拍干，加入TMB顯色液，100μL/孔，室溫（25℃,可D450nm。B.3結(jié)果判定.P/N=[（樣品孔D450-空白孔D450）/(陰性對照孔D4509..C.2.1處死小鼠后，無菌注射DMEM液體培養(yǎng)基51..D.2.1重組桿狀病毒rBV-SC接毒后48h（MOI=1），PBS洗板3次，200μL/孔，D.2.5PBS洗板3次，200μL/.1..E.2.1重組桿狀病毒rBV-SC接毒后48h（MOI=1），PBS洗板

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