第四章

高效液相色譜法一、色譜法概述

混合物最有效的別離、分析方法。俄國植物學(xué)家茨維特在1906年別離葉綠素，色譜原型。色譜法是一種別離技術(shù)。混合物別離過程：試樣中各組分在稱之為色譜別離柱中的兩相間不斷進(jìn)行著的分配。一相固定不動(dòng)，稱為固定相。另一相是攜帶試樣混合物流過固定相的流體(氣體或液體)，稱為流動(dòng)相?！矂?dòng)畫〕1、

高效液相色譜法的特性特點(diǎn)：高壓、高效、高速、高靈敏高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效別離分析方法。LC＜＞GC互補(bǔ)性液相色譜儀2、色譜根本參數(shù)與流出曲線的表征1.基線無試樣通過檢測器時(shí)，檢測到的信號(hào)即為基線。2.保存值〔1〕時(shí)間表示的保存值保存時(shí)間(tR)：組分從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)濃度極大值時(shí)所需的時(shí)間；〔動(dòng)畫〕死時(shí)間(tM)：不與固定相作用的氣體(如空氣)的保存時(shí)間；調(diào)整保存時(shí)間〔tR＇〕：tR＇=tR－tM〔2〕用體積表示的保存值保存體積〔VR〕：VR=tR×qvqv為柱出口處的載氣流量，單位：mL/min。死體積〔VM〕：VM=tM×qv調(diào)整保存體積(VR＇)：VR＇=VR－VM3.相對(duì)保存值r21組分2與組分1調(diào)整保存值之比：r21=t′R2/t′R1=V′R2/V′R1相對(duì)保存值只與柱溫和固定相性質(zhì)有關(guān)，與其他色譜操作條件無關(guān)，它表示了固定相對(duì)這兩種組分的選擇性。4.區(qū)域?qū)挾群饬可V峰寬度的參數(shù)，三種表示方法：〔1〕標(biāo)準(zhǔn)偏差()：即0.607倍峰高處色譜峰寬度的一半?！?〕半峰寬(Y1/2)：色譜峰高一半處的寬度Y1/2=2.354?！?〕峰底寬(Wb)：Wb=4。2.相平衡參數(shù)〔1〕分配系數(shù)〔partitioncoefficient〕K組分在固定相和流動(dòng)相間發(fā)生的吸附、脫附，或溶解、揮發(fā)的過程叫做分配過程。在一定溫度下，組分在兩相間分配到達(dá)平衡時(shí)的濃度〔單位：g/mL〕比，稱為分配系數(shù)，用K表示，即：分配系數(shù)是色譜別離的依據(jù)。分配系數(shù)K的討論一定溫度下，組分的分配系數(shù)K越大，出峰越慢；試樣一定時(shí)，K主要取決于固定相性質(zhì)；每個(gè)組份在各種固定相上的分配系數(shù)K不同；選擇適宜的固定相可改善別離效果；試樣中的各組分具有不同的K值是別離的根底；某組分的K=0時(shí)，即不被固定相保存，最先流出。3.分配比〔partitionradio〕k一定溫度下，組分在兩相間分配到達(dá)平衡時(shí)的質(zhì)量比。1.分配系數(shù)與分配比都是與組分及固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān)的常數(shù)，隨別離柱溫度、柱壓的改變而變化。2.分配系數(shù)與分配比都是衡量色譜柱對(duì)組分保存能力的參數(shù)，數(shù)值越大，該組分的保存時(shí)間越長。3.分配比可以由實(shí)驗(yàn)測得。

分配比也稱：容量因子(capacityfactor)和容量比(capacityradio)；4.容量因子與分配系數(shù)的關(guān)系

式中β為相比。填充柱相比：6～35；毛細(xì)管柱的相比：50～1500。容量因子越大，保存時(shí)間越長。VM為流動(dòng)相體積，即柱內(nèi)固定相顆粒間的空隙體積；VS為固定相體積，對(duì)不同類型色譜柱，VS的含義不同；氣-液色譜柱：VS為固定液體積；氣-固色譜柱：VS為吸附劑外表容量。5.分配比與保存時(shí)間的關(guān)系滯留因子〔retardationfactor〕：us：組分在別離柱內(nèi)的線速率；u：流動(dòng)相在別離柱內(nèi)的線速度；滯留因子RS也可以用質(zhì)量分?jǐn)?shù)w表示：假設(shè)組分和流動(dòng)相通過長度為L的別離柱，需要的時(shí)間分別為tR和tM，那么tR=tM(1+k)通過上式可直接由實(shí)驗(yàn)獲得的保存值求出分配比。6.別離因子別離因子〔也稱為選擇性因子〕也可用來衡量兩物質(zhì)的別離程度，用α表示。7.色譜流出曲線的數(shù)學(xué)描述

色譜峰為正態(tài)分布時(shí)，色譜流出曲線上的濃度與時(shí)間的關(guān)系為

當(dāng)色譜峰為非正態(tài)分布時(shí)，可按正態(tài)分布函數(shù)加指數(shù)衰減函數(shù)構(gòu)建關(guān)系式。色譜理論需要解決的問題？色譜理論需要解決的問題：色譜別離過程的熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)問題。影響別離及柱效的因素與提高柱效的途徑，柱效與別離度的評(píng)價(jià)指標(biāo)及其關(guān)系。組分保存時(shí)間為何不同？色譜峰為何變寬？組分保存時(shí)間：色譜過程的熱力學(xué)因素控制；〔組分和固定液的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)〕色譜峰變寬：色譜過程的動(dòng)力學(xué)因素控制；〔兩相中的運(yùn)動(dòng)阻力，擴(kuò)散〕兩種色譜理論：塔板理論和速率理論。塔板理論的假設(shè)：(1)每一個(gè)平衡過程間隔內(nèi)，平衡可以迅速到達(dá)；(2)將載氣看作成脈動(dòng)〔間歇〕過程；(3)試樣沿色譜柱方向的擴(kuò)散可忽略；(4)每次分配的分配系數(shù)相同。塔板理論-柱別離效能指標(biāo)1.塔板理論〔platetheory〕半經(jīng)驗(yàn)理論；將色譜別離過程比較作蒸餾過程，將連續(xù)的色譜別離過程分割成屢次的平衡過程的重復(fù)?！矂?dòng)畫〕色譜柱長：L，虛擬的塔板間距離：H，色譜柱的理論塔板數(shù)：n，那么三者的關(guān)系為保存時(shí)間包含死時(shí)間，在死時(shí)間內(nèi)不參與分配!理論塔板數(shù)與色譜參數(shù)之間的關(guān)系為n=L/H色譜峰的方差與柱長或保存時(shí)間的關(guān)系為：2.有效塔板數(shù)和有效塔板高度單位柱長的塔板數(shù)越多，說明柱效越高。用不同物質(zhì)計(jì)算可得到不同的理論塔板數(shù)。組分在tM時(shí)間內(nèi)不參與柱內(nèi)分配。需引入有效塔板數(shù)和有效塔板高度：3.塔板理論的特點(diǎn)和缺乏(1)當(dāng)L一定時(shí)，n越大(H越小)，被測組分在柱內(nèi)被分配的次數(shù)越多，柱效能那么越高，所得色譜峰越窄。

(2)不同物質(zhì)在同一色譜柱上的K不同，用n有效和H有效作為衡量柱效能的指標(biāo)時(shí)，應(yīng)指明測定物質(zhì)。(3)柱效的上下不能表示被別離組分的實(shí)際別離效果，當(dāng)兩組分的分配系數(shù)K相同時(shí)，無論該色譜柱的塔板數(shù)多大，都無法別離。

(4)塔板理論無法解釋同一色譜柱在不同的載氣流速下柱效不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，也無法指出影響柱效的因素及提高柱效的途徑。速率理論-影響柱效的因素1.速率方程〔也稱范·弟姆特方程式〕H=A+B/u+C·uH：理論塔板高度，u：載氣的線速率(cm/s)。減小A、B、C三項(xiàng)可提高柱效。存在著最正確流速。A，B，C三項(xiàng)各與哪些因素有關(guān)？A─渦流擴(kuò)散項(xiàng)

A=2λdpdp：固定相的平均顆粒直徑λ：固定相的填充不均勻因子

固定相顆粒越小dp↓，填充的越均勻，A↓，H↓，柱效n↑。表現(xiàn)在渦流擴(kuò)散所引起的色譜峰變寬現(xiàn)象減輕，色譜峰較窄。B/u—分子擴(kuò)散項(xiàng)B=2υDgυ：彎曲因子，填充柱色譜，υ<1。Dg：試樣組分分子在氣相中的擴(kuò)散系數(shù)〔cm2·s-1〕(1)存在著濃度差，產(chǎn)生縱向擴(kuò)散;(2)擴(kuò)散導(dǎo)致色譜峰變寬，H↑(n↓)，別離變差;(3)B/u與流速有關(guān)，流速↓，滯留時(shí)間↑，擴(kuò)散↑;(4)擴(kuò)散系數(shù)：Dg∝(M載氣)-1/2，M載氣↑，B值↓。

k為容量因子；Dg、DL為擴(kuò)散系數(shù)。減小擔(dān)體粒度，選擇相對(duì)分子質(zhì)量小的氣體作載氣，可降低傳質(zhì)阻力。C·u—傳質(zhì)阻力項(xiàng)傳質(zhì)阻力包括氣相傳質(zhì)阻力Cg和液相傳質(zhì)阻力CL，即C=〔Cg+CL〕〔動(dòng)畫〕2.載氣流速與柱效——最正確流速載氣流速高時(shí)：

傳質(zhì)阻力項(xiàng)是影響柱效的主要因素，流速

，柱效

。載氣流速低時(shí)：

分子擴(kuò)散項(xiàng)成為影響柱效的主要因素，流速

,柱效

。H-u曲線與最正確流速：由于流速對(duì)這兩項(xiàng)完全相反的作用，流速對(duì)柱效的總影響使得存在著一個(gè)最正確流速值，即速率方程式中塔板高度對(duì)流速的一階導(dǎo)數(shù)有一極小值。以塔板高度H對(duì)應(yīng)載氣流速u作圖，曲線最低點(diǎn)的流速即為最正確流速。3.速率理論的要點(diǎn)(1)組分分子在柱內(nèi)運(yùn)行的多路徑與渦流擴(kuò)散、濃度梯度所造成的分子擴(kuò)散、傳質(zhì)阻力使氣液兩相間的分配平衡不能瞬間到達(dá)等是造成色譜峰擴(kuò)展柱效下降的主要原因。

(2)通過選擇適當(dāng)?shù)墓潭ㄏ嗔６取⑤d氣種類、液膜厚度及載氣流速可提高柱效。(3)為色譜別離和操作條件選擇提供了理論指導(dǎo)。說明了流速和柱溫對(duì)柱效及別離的影響。(4)各種因素相互制約：載氣流速增大，分子擴(kuò)散項(xiàng)的影響減小，使柱效提高，但同時(shí)傳質(zhì)阻力項(xiàng)的影響增大，又使柱效下降；柱溫升高，有利于傳質(zhì)，但又加劇了分子擴(kuò)散的影響，選擇最正確條件，才能使柱效到達(dá)最高。影響別離的因素與提高柱效的途徑液體的擴(kuò)散系數(shù)僅為氣體的萬分之一，那么在高效液相色譜中,速率方程中的分子擴(kuò)散項(xiàng)B/u較小，可忽略不計(jì)，即H=A+Cu

液體的黏度比氣體大100倍，密度為氣體的1000倍，故降低傳質(zhì)阻力是提高柱效主要途徑。載體粒度較大時(shí)的LC曲線。別離度塔板理論和速率理論都難以描述難別離物質(zhì)對(duì)的實(shí)際別離程度。即柱效為多大時(shí)，相鄰兩組分能夠被完全別離。難別離物質(zhì)對(duì)的別離度大小受色譜過程中兩種因素的綜合影響：保存值之差──色譜過程的熱力學(xué)因素；區(qū)域?qū)挾醛ぉどV過程的動(dòng)力學(xué)因素。色譜別離中的四種情況如下圖：討論：色譜別離中的四種情況：①柱效較高，ΔK(分配系數(shù))較大，完全別離。②ΔK不是很大，柱效較高，峰較窄，根本別離。③柱效較低，ΔK較大，但別離的不好。④ΔK小，柱效低，別離效果更差。別離度的表達(dá)式：R=0.8：兩峰的別離程度可達(dá)89%；R=1：別離程度98%；R=1.5：達(dá)99.7%〔相鄰兩峰完全別離的標(biāo)準(zhǔn)〕。令Wb(2)=Wb(1)=Wb〔相鄰兩峰的峰底寬近似相等〕，引入相對(duì)保存值和塔板數(shù)，可導(dǎo)出下式：別離度根本關(guān)系式：討論：〔1〕別離度與柱效別離度與柱效(n)的平方根成正比，r21一定，增加柱效，可提高別離度。但通過增加柱長來增加n使組分保存時(shí)間增加且峰擴(kuò)展，分析時(shí)間長。〔2〕別離度與r21增大r21是提高別離度的最有效方法，計(jì)算可知，在相同別離度下，當(dāng)r21增加一倍，需要的n有效減小10000倍。增大r21的最有效方法是選擇適宜的固定液。

液-固吸附色譜固定相：固體吸附劑，如硅膠、氧化鋁等，較常使用的是5～10μm的硅膠吸附劑。流動(dòng)相：各種不同極性的一元或多元溶劑。根本原理：組分在固定相吸附劑上的吸附與解吸；適用于別離相對(duì)分子質(zhì)量中等的油溶性試樣，對(duì)具有官能團(tuán)的化合物和異構(gòu)體有較高選擇性。根本原理：流動(dòng)相中的溶質(zhì)分子〔X〕與溶劑分子〔S〕在固定相吸附劑上的競爭吸附：Xm+nSa=Xa+nSm下標(biāo)m、a分別表示流動(dòng)相和固定相，n是被吸附的溶劑分子數(shù)。到達(dá)吸附平衡時(shí)，吸附平衡常數(shù)〔K〕可表示為：K分配系數(shù)，但K值大，說明該溶質(zhì)分子在固定相上被吸附得多，吸附作用強(qiáng)，該組分的保存時(shí)間長，分配系數(shù)也大。吸附平衡常數(shù)K可以由吸附等溫線數(shù)據(jù)求出。等溫吸附線與色譜峰形：拖尾峰(凸形等溫吸附線)：被吸附分子首先占據(jù)強(qiáng)吸附力的點(diǎn)。低濃度時(shí)，主要被強(qiáng)吸附力的點(diǎn)吸附，保存時(shí)間長。濃度高時(shí)，較多溶質(zhì)分子被吸附力弱的點(diǎn)吸附，造成色譜峰中心局部運(yùn)動(dòng)速率較快，峰前移，而后沿局部吸附力相對(duì)較強(qiáng)，運(yùn)動(dòng)速率較慢，形成拖尾峰。液-固吸附別離模式適用于別離相對(duì)分子質(zhì)量中等的油溶性試樣，對(duì)具有官能團(tuán)的化合物和異構(gòu)體有較高選擇性。4.4.2液-液分配色譜固定相與流動(dòng)相互不相溶。根本原理：組分在固定相和流動(dòng)相上的分配。流動(dòng)相：親水性固定液，采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定液的極性(正相normalphase)，反之流動(dòng)相的極性大于固定液的極性(反相reversephase)。正相與反相的出峰順序相反。固定相：早期涂漬固定液，現(xiàn)已不采用?；瘜W(xué)鍵合固定相：將基團(tuán)通過化學(xué)反響鍵合到硅膠〔擔(dān)體〕外表的游離羥基上，如C18柱〔反相柱〕。4.4.3離子交換色譜

固定相：陰離子交換樹脂或陽離子離子交換樹脂。

流動(dòng)相：陰離子交換樹脂作固定相，采用酸性水溶液；陽離子交換樹脂作固定相，采用堿性水溶。

根本原理平衡時(shí)，平衡常數(shù)為對(duì)于磺酸型陽離子交換樹脂，一價(jià)陽離子的KB/A值順序：

Cs+>Rb+>K+>NH4+>Na+>H+>Li+二價(jià)陽離子的KB/A值順序：

Ba2+>Pb2+>Sr2+>Ca2+>Cd2+>Cu2+對(duì)于季胺型陰離子交換樹脂，一價(jià)陰離子的KB/A值順序：

ClO4->I->HSO4->SCN->NO3->Br->NO2->CN->Cl->BrO3->OH->HCO3->H2PO4->IO3->CH3COO->F-4.4.5離子對(duì)色譜ionpairchromatography將一種(或多種)與溶質(zhì)離子電荷相反的離子(對(duì)離子或反離子)，加到流動(dòng)相中與溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水性離子對(duì)，能夠在兩相之間進(jìn)行分配。陰離子別離：對(duì)離子常用烷基銨類，如氫氧化十六烷基三甲胺。陽離子別離：對(duì)離子常用烷基磺酸(己烷磺酸鈉)。反相離子對(duì)色譜：非極性的疏水固定相(C18柱)，含有對(duì)離子Y+的甲醇-水或乙腈-水作為流動(dòng)相，試樣離子X-進(jìn)入流動(dòng)相后，生成疏水性離子對(duì)Y+X-。根本原理：形成的離子對(duì)化合物X+Y-，在兩相間進(jìn)行分配：

X+水相+Y-水相=X+Y-有機(jī)相

平衡常數(shù)：

溶質(zhì)在兩相間的分配系數(shù)DX為：

不同待測離子與反離子形成離子對(duì)的能力不同，分配系數(shù)存在差異，導(dǎo)致在固定相中滯留時(shí)間不同，從而實(shí)現(xiàn)色譜別離。離子對(duì)的容量因子k可表示為：

那么組分的保存時(shí)間：保存值隨KXY和[Y-]水相的增大而延長，而KXY取決于對(duì)離子和有機(jī)相的性質(zhì)，那么控制流動(dòng)相中參加的對(duì)離子特性和濃度可以調(diào)整組分保存時(shí)間，到達(dá)提高色譜別離選擇性的目的。4.4.6排阻色譜

size-exclusionchromatography

固定相：凝膠(具有一定大小孔隙分布)。

原理：按分子大小別離。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙中通過，出峰最慢；中等分子只能通過局部凝膠空隙，中速通過；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。全部在死體積前出峰。相對(duì)分子質(zhì)量在100～105范圍內(nèi)的化合物按質(zhì)量別離。根本原理：色譜柱的總體積為Vtol=Vm+Vp+VgVm為死體積，即對(duì)應(yīng)于完全排斥分子流出體積；Vp為孔體積；Vg為凝膠體積〔去除孔體積〕。組分的保存體積為VR=Vm+KVp根本原理：分配系數(shù)：

分子完全排斥時(shí)，K=0；可自由進(jìn)入孔道時(shí)，K=1；局部進(jìn)入時(shí)，K=0～１；保存體積位于：Vm～Vm+Vp4.4.7親和色譜(AC)Affinitychromatograph原理：利用生物大分子和固定相外表存在的某種特異性親和力，進(jìn)行選擇性別離。間隔基：環(huán)氧、聯(lián)胺等；配基：酶、抗原等；這種固載化的配基將只能和具有親和力特性吸附的生物大分子作用而被保存。改變淋洗液后洗脫。1.液-固吸附別離固定相種類：硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺等。種類有限，應(yīng)用面相對(duì)較窄。結(jié)構(gòu)類型：全多孔型和薄殼型；粒度：5～10μm。

4.3.1液相色譜固定相2.液-液分配及離子對(duì)別離固定相〔1〕全多孔型擔(dān)體氧化硅、氧化鋁、硅藻土等制成的多孔球體；早期采用100μm的大顆粒，外表涂漬固定液，性能不佳已不多見?，F(xiàn)采用10μm以下的小顆粒，化學(xué)鍵合制備柱填料?！?〕外表多孔型擔(dān)體〔薄殼型微珠擔(dān)體〕30～40μm的玻璃微球，外表附著一層厚度為1～2μm的多孔硅膠。外表積小，柱容量低?！?〕化學(xué)鍵合固定相化學(xué)鍵合固定相：應(yīng)用最廣、性能最正確的固定相；a.硅氧碳鍵型：≡Si—O—Cb.硅氧硅碳鍵型：≡Si—O—Si—C穩(wěn)定，耐水，耐光，耐有機(jī)溶劑，應(yīng)用最廣。c.硅碳鍵型：≡Si—Cd.硅氮鍵型：≡Si—N化學(xué)鍵合固定相的特點(diǎn)：〔1〕傳質(zhì)快，外表無深凹陷?！?〕壽命長，化學(xué)鍵合，無固定液流失，耐流動(dòng)相沖擊；耐水，耐光，耐有機(jī)溶劑，穩(wěn)定。〔4〕選擇性好，可鍵合不同官能團(tuán)，提高選擇性?！?〕有利于梯度洗脫。存在著雙重別離機(jī)制：(鍵合基團(tuán)的覆蓋率決定)高覆蓋率：分配為主；低覆蓋率：吸附為主。3.離子交換色譜別離固定相結(jié)構(gòu)類別：〔1〕薄殼型離子交換樹脂薄殼玻璃珠為擔(dān)體，外表涂約1%的離子交換樹脂。〔2〕離子交換鍵合固定相薄殼鍵合型；微粒硅膠鍵合型〔鍵合離子交換基團(tuán)〕。樹脂類別：〔1〕陽離子交換樹脂〔強(qiáng)酸性、弱酸性〕?！?〕陰離子交換樹脂〔強(qiáng)堿性、弱堿性〕。4.空間排阻別離固定相〔1〕軟質(zhì)凝膠葡聚糖凝膠、瓊脂凝膠等，多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。水為流動(dòng)相，適用于常壓排阻別離。〔2〕半硬質(zhì)凝膠苯乙烯-二乙烯基苯交聯(lián)共聚物，有機(jī)凝膠；非極性有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，不能用丙酮、乙醇等極性溶劑〔3〕硬質(zhì)凝膠多孔硅膠、多孔玻珠等；化學(xué)穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性好、機(jī)械強(qiáng)度大，流動(dòng)相性質(zhì)影響小，可在較高流速下使用?？煽乜讖讲Ａ⑶颍哂泻愣讖胶驼６确植?。4.3.2液相色譜的流動(dòng)相1.流動(dòng)相特性〔1〕流動(dòng)相組成改變，極性改變，可顯著改變組分別離狀況?！?〕親水性固定液常采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定相的極性，正相，極性柱也稱正相柱?！?〕假設(shè)流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，那么稱為反相液液色譜，非極性柱也稱為反相柱。組分在兩種類型別離柱上的出峰順序相反。2.流動(dòng)相類別按流動(dòng)相組成分：單組分和多組分；按極性分：極性、弱極性、非極性；按使用方式分：固定組成淋洗和梯度淋洗。常用溶劑：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。采用二元或多元組合溶劑作為流動(dòng)相可以靈活調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性或增加選擇性，以改進(jìn)別離或調(diào)整出峰時(shí)間。3.流動(dòng)相選擇在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。采用正相液-液分配別離時(shí)，首先選擇中等極性溶劑，假設(shè)組分的保存時(shí)間太短，降低溶劑極性，反之增加。也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保存時(shí)間縮短。常用溶劑的極性順序：水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油(最小)4.選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問題〔1〕盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長期累積，損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。〔2〕防止流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失，酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等?！?〕試樣在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積?！?〕流動(dòng)相同時(shí)還應(yīng)滿足檢測器的要求。當(dāng)使用紫外檢測器時(shí)，流動(dòng)相不應(yīng)有紫外吸收。液相色譜儀液相色譜儀液相色譜儀1.結(jié)構(gòu)流程4.2.2主要部件(1)高壓輸液泵主要部件之一，壓力：150×105～350×105

Pa。為了獲得高柱效而使用粒度