GB

中華人民共和國國家標準

GB/TXXX-XXX

甘蔗皮渣中對香豆酸檢測方法-

高效液相色譜法

Determinationofp-coumaricacidin

sugarcanerinds-Highperformanceliquid

chromatographymethod

XXX-XX-XX發布XXX-XX-XX實施

I

中華人民共和國標準化管理委員會發布

GB/XXXX—XXXX

GB/XXXX—XXXX

1范圍

本標準規定了甘蔗皮中對香豆酸含量的測定方法—高效液相色譜法。

本標準適用于甘蔗皮中對香豆酸的定性確證和定量測定。

本標準高效液相色譜法的檢出限為0.33mg/kg，定量限為1.09mg/kg。

2規范性引用文件

下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的

版本適用于本文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓

勵根據本標準達成協議的各方研究是否可會用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新

版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6379.2測量方法與結果的準確度（正確度與精密度）第2部分：確定標準測量方法重復性與

再現性的基本方法。

3原理

甘蔗皮渣試樣用2mol/LNaOH溶液提取，6mol/L的HCI溶液調節pH至2左右，乙酸乙酯萃取后經C18

色譜柱分離，二極管陣列檢測器檢測，色譜峰保留時間定性，外標法定量。

4試劑與材料

除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規定的一級水。

4.1試劑

4.1.1甲醇：色譜純。

4.1.2乙酸：色譜純。

4.2試劑配制

乙酸溶液（0.1%）：量取0.25mL甲酸（4.1.2）于250mL容量瓶中，用水定容至刻度。

4.3標準品

對香豆酸標準品（C9H8O3）：CAS：501-98-4，純度大于98.0%。

4.4標準溶液配制

4.4.1對香豆酸標準儲備液（2.0mg/mL）：準確稱取對香豆酸標準品50mg（精確至0.1mg）于25mL

容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成濃度為2.0mg/mL的標準儲備液。放置于4℃冰箱避光保

存，有效期為一個月

4.4.2對香豆酸標準儲備液（1.0mg/mL）：準確稱取對香豆酸標準品25mg（精確至0.1mg）于25mL

容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成濃度為1.0mg/mL的標準儲備液。放置于4℃冰箱避光保

存，有效期為一個月。

4.4.3對香豆酸標準中間液（400μg/mL）：準確吸取10.0mL對香豆酸標準儲備液（4.4.2）于25mL

容量瓶中，用甲醇定容。放置于4℃冰箱避光保存，有效期為一個月。

4.4.4對香豆酸標準曲線工作液：分別吸取對香豆酸標準中間液（4.4.3）0.1mL、0.25mL、0.5mL、

1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容。該標準系列濃度

分別為4.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL、60.0μg/mL、80.0μg/mL、100μg/mL、200

μg/mL、300μg/mL。臨用時配制。

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5儀器和設備

5.1高效液相色譜儀，配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器。

5.2天平：感量為0.0001g和0.01g。

5.3油浴鍋。

5.4超聲波清洗器。

5.50.45μm微孔水相濾膜，0.45μm針筒式有機相過濾器。

5.6旋轉蒸發儀。

6分析步驟

6.1試樣制備

稱取1.00g（精確至0.01g）甘蔗皮渣樣品于25mL圓底燒瓶中，加入10mL2mol/LNaOH溶液

混合均勻，在室溫下磁力攪拌6h。之后逐滴加入6mol/L的HCI溶液，調節pH值至2左右。將上述

酸性溶液移入分液漏斗中，加入等體積的乙酸乙酯，劇烈振蕩，靜置、分層，移取乙酸乙酯。然后重復

上述步驟萃取三次，合并三次所得乙酸乙酯相，用旋轉蒸發儀將萃取液在50℃蒸干，最后得到0.2638g

膏狀物，密封保存于4℃冰箱待后續使用。準確稱取100mg用10.0mL色譜甲醇定容，過0.45μm針筒

式有機相過濾器，即為試樣液。

6.2色譜測定

6.2.1參考色譜條件

6.2.1.1色譜柱：C18柱，柱長250mm×直徑4.6mm，粒徑5μm，或具有同等性能的色譜柱。

6.2.1.2流動相：A甲醇B0.1%乙酸溶液，0-30min：30%-80%A。

6.2.1.3流速：1.0mL/min。

6.2.1.4柱溫：30℃±1℃。

6.2.1.5測定波長：254nm。

6.2.1.6進樣體積：10μL。

6.2.2標準曲線的繪制

將對香豆酸標準曲線工作液、標準中間液及標準儲備液分別注入高效液相色譜儀中，測定相應的保

留時間和峰面積，以標準工作液的濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，繪制標準曲線（對香豆酸標準色譜

圖見附錄A中圖A.1）。

6.2.3試樣測定

將試樣液注入高效液相色譜儀中，以保留時間定性，同時記錄其峰面積，根據標準曲線計算出試樣

液中對香豆酸的濃度，平行測定次數不少于三次。待測試樣中對香豆酸的響應值應在標準曲線線性范圍

內，超過線性范圍則應稀釋后再進行分析。

6.2.4空白實驗

除不稱取樣品外，均按上述測定條件和步驟進行。

7分析結果的表述

試樣中對香豆酸的含量由色譜數據處理軟件或按公式（1）計算：

cV1000

X.....................................(1)

m1000

式中：

4

GB/XXXX—XXXX

X—試樣中對香豆酸的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；

c—試樣液中對香豆酸的質量濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V—被測試樣的總體積，單位為毫升（mL）；

m—稱取試樣的質量，單位為克（g）；

1000—換算系數。

計算結果以重復性條件下獲得的三次獨立測定結果的算數平均值表示，結果保留三位有效數字。

8精密度

8.1一般規定

本標準的精密度按照GB/T6379.2的規定確定，重復性和再現性的值以95%的可信度來計算。

8.2重復性

在重復性條件下，獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。

8.3再現性

在再現性條件下，獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。

9其他

本方法線性范圍為4μg/mL~2000μg/mL。檢出限：以3倍基線噪音信號確定檢出限12.45

ng/mL,定量限：以10倍基線噪音信號確定檢出限41.49ng/mL。甘蔗皮渣試樣取樣量為1g，確定

檢出限為0.33mg/kg，定量限為1.09mg/kg，對香豆酸含量為13292.88mg/kg。在添加濃度400

mg/kg～600mg/kg濃度范圍內，回收率在95%～105%之間，相對標準偏差小于5%。

附錄A

對香豆酸色譜圖

圖A.1對香豆酸標準溶液的色譜圖

圖A.2甘蔗皮渣粗提物的色譜圖