鄰菲羅啉分光光度法測定水中微量鐵第1頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月一、實驗?zāi)康?．了解分光光度計的結(jié)構(gòu)和正確的使用方法；2．學(xué)習(xí)吸收曲線的制作方法，理解最大吸收波長的意義；3．掌握朗伯比爾定律的應(yīng)用。第2頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月二、實驗原理在pH約為5的HAc-NaAc緩沖溶液中，F(xiàn)e2+與鄰二氮菲(phen)生成穩(wěn)定的橙紅色絡(luò)合物，λmax＝510nm,ε＝1.1×104L/(mol·cm)。在510nm處吸光度與其濃度成正比，符合朗伯-比爾定律，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法可求得試樣中微量Fe2+的測定。如果鐵以Fe3+的形式存在，應(yīng)預(yù)先加入鹽酸羥胺將Fe3+還原成Fe2+。第3頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月三、主要儀器與試劑1．儀器722型分光光度計、10mL吸量管，50mL容量瓶。2．試劑(1)鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液（含鐵100μg/mL）；(2)0.1%鄰菲羅啉溶液；(3)5%鹽酸羥胺溶液；(4)HAc-NaAc緩沖液（pH=4.6）。第4頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月四、實驗步驟1．鄰菲羅啉-亞鐵吸收曲線的繪制

準(zhǔn)確吸取鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液（含鐵10μg/mL，用含鐵100μg/mL配制）4mL于50mL容量瓶中，依次加入5mLHAc-NaAc緩沖液、2mL鹽酸羥胺溶液、5mL鄰菲羅啉溶液，用水稀釋至刻度，搖勻，放置10分鐘。以水作參比溶液，用1cm比色皿和722型分光光度計在=440-600nm分別測定吸光度A。

以所得吸光度A為縱坐標(biāo)，相應(yīng)波長λ為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪制A與λ的吸收曲線。從吸收曲線上選擇測定鐵的適宜波長，一般選用最大吸收波長λmax為測定波長。第5頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月2．標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確吸取鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液（含鐵10μg/mL）0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL于六個50mL容量瓶中，依次加入5mLHAc-NaAc緩沖液、2mL鹽酸羥胺溶液、5mL鄰菲羅啉溶液，用去離子水稀釋至刻度，搖勻，放置10分鐘。以不加鐵的試劑溶液作參比，用1cm比色皿，在λmax處分別測定吸光度A。以顯色后的50mL溶液中的含鐵量(μg)為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制測定鐵的標(biāo)準(zhǔn)曲線。第6頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月3．試樣中微量鐵的測定準(zhǔn)確吸取試樣10mL于50mL容量瓶中，按照繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的實驗步驟，配制溶液并測定吸光度Ax，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對應(yīng)的鐵的質(zhì)量，并求原試樣中鐵含量的濃度（μg/mL）。第7頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月五、數(shù)據(jù)記錄及結(jié)果處理1．吸收曲線繪制和測量波長選擇由吸收曲線可得，λmax=

nm。2．標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制和鐵含量的測定第8頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月若由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對應(yīng)的鐵含量為cx，則原試樣中鐵含量的濃度cFe計算：第9頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月六、思考題

1．參比溶液的作用是什么？2．溶液酸度對測定有何影響？3．制作標(biāo)準(zhǔn)曲線和進(jìn)行其他條件實驗時，加入試劑的順序能否任意改變？為什么？第10頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月七、注意事項1．為了防止光電管疲勞。不測定時必須將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷，以延長光電管使用壽命。2．比色皿使用注意事項：1）每臺儀器與比色皿配套，不能與其它儀器上的比色皿調(diào)換；2）拿取比色皿時，手指不能接觸其透光面；3）裝溶液時，先用該溶液潤洗比色皿內(nèi)壁2～3次，被測溶液以裝至比色皿的3/4高度為宜，并用濾紙輕輕吸去比色皿外部的液體，再用擦鏡紙小心擦拭透光面，直到潔凈透明；4）測定系列溶液時，通常按由稀到濃的順序測定；5）實驗完畢，及時把比色皿洗凈、晾干，放回比色皿盒中。第11頁，課件共12頁，創(chuàng)作于2023年2月附722型分光光度計簡要操作方法：

①預(yù)熱儀器。為使測定穩(wěn)定，將電源開關(guān)打開，使儀器預(yù)熱20min。預(yù)熱儀器和在不測定時應(yīng)將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷，防止光電管疲勞；②選定波長。轉(zhuǎn)動波長調(diào)節(jié)器，使指針指示所需要的單色光波長。③調(diào)節(jié)“T＝0”點。打開吸收池暗室蓋（光門自動關(guān)閉），使讀數(shù)模式調(diào)至[T]上，在調(diào)節(jié)[0%T]旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”；④調(diào)節(jié)T=100％。輕輕蓋上吸收池蓋（將參比溶液置于光路），調(diào)節(jié)透光率[100%T] 旋鈕，使數(shù)學(xué)顯示為“100.0”；⑤測定。使讀數(shù)模式調(diào)至[A]，輕輕拉動比色皿座架拉桿，使