初始污染菌檢測1/6/20241參考標準《中華人民共和國藥典》2005版附錄微生物限度檢查法ISO11737-1:2006Sterilizationofmedicaldevices–Microbiologicalmethods–Part1:DeterminationofapopulationofmicroorganismsonproductsGB/T19973.1/ISO11737-1:1995醫療器械的滅菌微生物方法第一部分：產品上微生物總數的估計GB15980-1995一次性使用醫療用品衛生標準1/6/20242檢測環境及檢驗量應在環境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向空氣區域內進行一般供試品的檢驗量為3~10個獨立包裝的同批次供試品。（見ISO11737-1:2006A8.1）1/6/20243實驗材料及設備營養瓊脂培養基、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液濾器、微孔濾膜（孔徑0.45微米，直徑50mm）、量筒、剪刀、鑷子、培養皿過濾裝置、電子天平、壓力蒸汽滅菌器、生化培養箱等1/6/20244主要步驟采樣供試液制備培養菌落計數1/6/20245供試液的制備用？ml氯化鈉-蛋白胨緩沖液浸提？小時（包括最內層包裝的內壁）-所需供試液的用量和浸提時間需驗證處理方法：振動、沖洗、擦拭法、袋蠕動、超聲、渦旋混合、攪拌1/6/20246轉至培養基膜過濾法—適用于微生物濃度較低的懸液平板傾注—適用于微生物濃度較高的懸液平板涂布—適用于微生物濃度較高的懸液螺旋涂布1/6/20249薄膜過濾法1/6/202410培養藥典中的培養條件：細菌30-35℃48h霉菌、酵母菌23-28℃72h必要時，可適當延長培養時間至5-7天1/6/202411菌落計數計數方法：將平板置菌落計數器或從平板的背面直接以肉眼用標記筆點計，以投射光襯以暗色背景，仔細觀察，計數。必要時可以借助于放大鏡、菌落計數器。菌落特征：

⑴形態特征：常為白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡黃色（如果培養基中加入0.1%TTC(氯化三苯基四氮唑試劑)，菌落為紅色）⑵邊緣整齊或不整齊，表面有光滑、粗糙，皺褶、突起或扁平。⑶大小差異很大。1/6/202412計數方法的驗證—回收率驗證試驗至少應進行3次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。A試驗組供試液+試驗菌（50~100cfu）B菌液組試驗菌（50~100cfu）C供試品對照組D緩沖液對照組緩沖液+試驗菌（50~100cfu）(A-C)/B>70%D/B>70%1/6/202413菌落計數報告規則—平板法選取細菌、酵母菌平均菌落數在30～300之間、霉菌平均菌落數在30~100之間的稀釋級作為報告菌落數的依據。1）如只有1個稀釋級平均菌落數符合上述規定，則將稀釋級的菌落數乘以稀釋倍數報告。2）如有兩個相鄰稀釋級的平均菌落數在30～300之間，則先計算兩稀釋級菌落數的比值。高稀釋級的平均平板菌落數×稀釋倍數比值=————————————————————低稀釋級的平均平板菌落數×稀釋倍數當比值≤2時，則以2個稀釋級的平均菌落數均值報告；當比值>2但不超過5時，則以低稀釋級的平均菌落數乘以稀釋倍數報告；當比值大于5，或高稀釋級的菌落數大于或等于低稀釋級的菌落數等異常情況時，應查明原因再進行檢查，必要時，應進行方法的重新驗證。3）如各稀釋級平均菌落數均在300以上，則按最高平均菌落數乘以稀釋倍數報告；如各稀釋級平均菌落數均在30以下，則按最低平均菌落數乘以稀釋倍數報告。4）如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級的平板有菌落生長，但平均菌落數小于1時，以＜1乘以最低稀釋倍數的值報告菌數1/6/202414菌落計數報告規