實驗名稱：葉綠素的提取與分禪實驗報告撰寫人：TangChen注：本實驗報告僅供參考，不得抄襲。非作者允許禁止私自轉載，違者將追究法律責任。一、 實驗目的1、 掌握從菠菜中提取葉綠素的方法2、 了解薄層層析的原理，掌握薄層層析一般操作和定性鑒定的方法二、 實驗原理高等植物體內主要含有葉綠素a、葉綠素b、§一胡蘿卜素和葉黃素4利1、 葉綠素的提取葉綠素a：C55H72O5N4Mg葉綠素b：C55H7o06N4Mg葉綠素a、葉綠素b同為毗咯衍生物與金屬鎂的配合物，是植物進行光合作用必須的催化劑，易溶于石油醍等非極性溶劑中。胡蘿卜素:6版胡蘿卜素是一種橙色天然色素、屬于四糖類，為一條長鏈共斬多烯，有a、6、Y三種異構體。其中，p異構體在葉綠體色素中含量最多。葉黃素葉黃素是一種黃色色素，與葉綠素同存在于植物體中，是胡尊卜素的羥基衍生物，較易溶于乙醇，在乙醍中溶解度較小。?>>>根據它們的化學特性，可將它們從植物葉片中提取出來，并通過萃取、沉淀和色譜方法將他們分離開來。2、 薄層色譜薄層色譜是用來快速分離和定性分析微量物質的一種極為重要的實驗技術，具有設備簡單、操作方便而快速的特點。薄層層析按分離機制不同可分為吸附層析、分配層析、離子交換層析等。(1)吸附層析中樣品在薄層板上經過連續、反復的被吸附劑吸附及展開劑解吸附過程,由于不同的物質被吸附劑吸附的能力及被展開劑解吸附的能力不同，放在薄層上以不同速度移動而得以分離。通常用比移值(Rf)表示物質移動的相對距離：色斑最高濃度中心至原點中心的距離Rf= 展開劑前沿至原點中心圖注：1一起點線；2—展開劑前沿；a一色斑最高濃度中心至原點中心的距離；b一展開劑前沿至原點中心的距離。物質的比例值隨化合物的結構、吸附劑、展開劑等不同而已，但在一定條件下每一種化合物的比例值都為一個特定的數值。故在相同條件下分別測定己知和未知化合物的比移值，在進行對照，即可對未知化合物進行對照。三、 實驗儀器和試劑1、 儀器：小燒杯、層析缸、載玻片（100mmX25mm）干燥器、電吹風、毛細管、移液管、研缽、布氏漏斗、分液漏斗、抽濾裝置。2、 試劑：硅膠、0.1%CMC、石油醍（60~90°C）、乙醇、丙酮、乙醍、飽和NaCI溶液、無水Na2SO4o四、 實驗步驟1、 制板將硅膠加0.1%CMC,調成漿狀（硅膠：CMC=1:3~4）,將其涂在載玻片上，為使其坦平，可將載玻片用手端平晃動，至平坦為止，放在平靜平坦的臺面上，晾干之后放入105°C烘箱中活化1小時，取出放入干燥器內待用。2、 葉綠素的提取在研缽中放入約5g波菜葉，加入10mL2:l石油醒和乙醇混合液，適當研磨。將提取液用滴管轉移至分液漏斗中，加入10mL飽和NaCI溶液（防止生成乳濁液）除去水溶性物質，分去巳0層，再用蒸僧水洗滌兩次。將有機層轉入干燥的小錐形瓶中，加入2g無水Na2SO4干燥。干燥后液體傾至另一錐形瓶中。如顏色太淺，可在通風柜中進行蒸發濃縮。3、 點樣用根內徑1mm的毛細管，吸取適量提取液，輕輕點在距薄板一端1.5cm處，平行點兩點，兩點相距lcm左右。若一次點樣不夠，可待樣品溶液揮發后，再在原點處點第二次，但斑點直徑不得超過2mm。4、 展開先在層析缸中放入展開劑（石油醍（60-90°C）一丙酮一乙暇（體積比為3:2:1））加蓋使缸內蒸氣飽lOmin,再將薄板層斜靠于