高效液相色譜法測定呈味核苷酸二鈉的含量

磷酸二鈉（imp和gdp）通常由淀粉制成。通過發芽法或酶分解法獲得的混合物具有強烈的增鮮效果，被廣泛應用于各種食品中。目前，我國的imp和gdp含量檢測方法主要是紫外分光光度法。當樣品中含有大量蛋白質或其他氨基酸時，檢測結果與實際值相差很大。采用高效液相色譜法，通過液相溶液反復分配，通過優化色度條件，可以充分分離各種核酸，并獲得具有精確定標的偏差偏差。在2%范圍內，保持不變的性質，并獲得標準樣品的含量差異（imp）。5'肌苷酸鈉（5'肌苷酸鈉（imp）和5'環己烯酸鈉（5'環磷酸鈉（pg））的標準鉻ct。在本實驗中，我們需要對雞進行必要的預處理，以獲得雞中含有某些氨基酸的二鈉的味道。與滴定法相比，高效液相色譜法的定量測定結果具有更高的重復性，該方法也為香生產提供了一定的技術支持。1材料和方法1.1imp/gm水合物純度甲醇、乙腈,色譜純,美國Fisher公司;IMP、GMP標準品,美國Sigma公司,IMP和GMP水合物的純度均為99%,其中,IMP水分含量26%,GMP水分含量21%;四丁基磷酸銨,色譜純,美國Sigma公司;磷酸二氫鉀,分析純,天津市廣成化學試劑有限公司.1.2科學分析e2695型高效液相色譜儀(配有可變波長紫外檢測器和示差檢測器,Empower色譜工作站),美國Waters公司;XS105DU型分析天平,德國梅特勒·托利多公司;SymmetryshiledRP18型分離柱,4.6mm×150mm,5μm,美國Waters公司.1.3方法1.3.1檢測條件及檢測波長洗脫液:0.02mol/L磷酸二氫鉀(0.02%四丁基磷酸銨)的超純水溶液∶乙腈=97∶3(v/v);反相色譜柱(SymmetryshiledRP18,4.6×150mm,5μm);檢測波長254nm;流速0.8mL/min;進樣量5μL.1.3.2標準溶液的配制分別稱取IMP、GMP標準品0.04024,0.03081g,置于50mL容量瓶中,用超純水超聲溶解并定容至刻度,搖勻,冷藏于保鮮柜,作為標準儲備液,該儲備液每毫升相當于IMP干基589.64μg,GMP干基481.92μg,進樣前用0.45μm微孔濾膜過濾.1.3.3超聲過濾稱取雞精樣品0.2g左右(準確至0.0001g),用超純水超聲溶解并定容至25mL,搖勻,用0.45μm微孔濾膜過濾后待測.2結果與分析2.1mp與imp的標準曲線圖在50～480μg/mL質量濃度范圍內,HPLC的響應峰面積與GMP的標準品濃度呈線性關系:y=12180x-78215(式中x為響應峰面積,y為GMP的標準品濃度),相關系數R=0.9999;在60～600μg/mL質量濃度范圍內,HPLC的響應峰面積與IMP的標準品濃度呈線性關系:y=9305.7x-85880(式中x為響應峰面積,y為IMP的標準品濃度),相關系數R=1.0000.實驗建立的GMP與IMP的標準曲線圖如圖1和圖2;GMP與IMP的HPLC色譜圖如圖3和圖4.2.2色譜條件選擇參閱目前國內外報道的呈味核苷酸二鈉高效液相色譜分離條件,先后采用了不同流動相對其分離效果進行了優化選擇,結果如表1.由表1可知,用普通的磷酸鹽緩沖液和碳十八色譜柱很難將二者完全分離,如圖5.而當選擇辛烷磺酸鈉為離子對試劑時,樣品無保留,選擇四丁基磷酸銨效果較好.另外,流動相中乙腈的含量對分離效果影響較明顯,通過反復對比實驗論證,流動相中添加0.02%的四丁基磷酸銨,3%的乙腈分離效果最好,樣品分離效果的色譜圖如圖6.優化后的呈味核苷酸二鈉色譜分離條件可獲得分離度較好的譜圖,但由于流速過低,樣品保留時間不穩定.通過更換色譜柱,采用SystemRP18反相柱,柱溫提高到40℃,流速提高到0.8mL/min,獲得了定性重復性與定量重復性的相對標準偏差(RSD)<2%的樣品IMP和GMP的分離色譜圖,獲得了滿意結果.2.3精密度和標準曲線通過實驗分析,獲得了雞精樣品中呈味核苷酸二鈉的含量即:IMP質量含量為0.54%,GMP質量含量為0.60%,兩次測定結果的精密度GMP為0.73%,IMP為1.17%,保留時間相對標準偏差RSD為0.036%和0.047%.譜圖如圖7.3呈味核苷酸二鈉的質量檢測本文以四丁基磷酸銨和磷酸二氫鉀配以一定比例的乙腈為流動相,采用高耐水系WatersRP18色譜柱,獲得了定性定量重復性均較優的IMP和GMP分離方法,測得雞精樣品中呈味核苷酸二鈉的總質量含量為1.14%,其中IMP質量含量為0.54%,GMP質量含量為0.60%;測定結果的精密度GMP為0.73%,IMP為1.17%,檢測結果滿意.使用該方法測定IMP和GMP的HPLC色譜圖中,2種物