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文檔簡介
宮頸hpv負(fù)荷量與子宮頸癌及其癌前病變的關(guān)系
隨著各種檢測方法和宮頸疾病的發(fā)展,生宮頸癌的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈下降趨勢,但在中國,發(fā)病率仍然是女性腫瘤的第一位,是女性死亡的主要原因。近十余年來,越來越多以大規(guī)模人群為基礎(chǔ)的流行病學(xué)資料顯示,人乳頭狀瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV),尤其是高危型HPV感染與子宮頸癌和癌前病變的發(fā)生密切相關(guān)。目前,國外有文獻(xiàn)報道,子宮頸感染患者的HPV負(fù)荷量與宮頸病變的嚴(yán)重程度有關(guān)。半定量PCR和雜交捕獲(hybridcapture,HC)方法是定量檢測HPV感染的主要方法。我院于2001年12月~2002年5月在山西省子宮頸癌高發(fā)區(qū)的9075例已婚婦女進(jìn)行篩查,采用目前世界上最新的雜交捕獲二代(hybridcaptureⅡ,HC-Ⅱ)方法定量檢測其宮頸HPV-DNA的含量,并進(jìn)行初步分析,現(xiàn)報道如下。數(shù)據(jù)和方法一、感染情況篩查2001年12月~2002年5月,我院對山西省襄垣縣和陽城縣的9075例已婚婦女宮頸的HPV感染情況進(jìn)行了篩查。選擇年齡在35~50歲、無子宮切除和宮頸手術(shù)史、篩查時為非妊娠狀態(tài)、無盆腔放療史、從未參加過普查的已婚婦女,共9075例。其中,2087例為HPV陽性婦女,隨后對這些婦女進(jìn)行了陰道鏡檢查、子宮頸多點(diǎn)活檢和頸管診刮術(shù)(行陰道鏡檢查的醫(yī)生不知道宮頸HPV檢測結(jié)果)。二、凍存樣品的制備用美國Digene公司提供的專用HPV取樣器,插入子宮頸外口,順時針或逆時針轉(zhuǎn)動5圈,慢慢取出取樣器放入標(biāo)有受試者編碼的含有保存液的小瓶中,置-20℃冰箱凍存,隨后送我院實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢查。三、dna雜交體的制備采用美國Digene公司提供的HC-ⅡHPV-DNA檢測試劑盒檢測樣本中HPV-DNA含量(以此表示HPV負(fù)荷量),其原理是利用放大抗體捕獲的信號和檢測化學(xué)發(fā)光信號。具體操作步驟(按試劑盒說明進(jìn)行):(1)樣本DNA雙鏈被釋放并分解為核苷酸單鏈。(2)DNA單鏈與RNA探針結(jié)合為RNA-DNA雜交體。(3)特異性抗體將RNA-DNA雜交體固定在微孔壁上。(4)結(jié)合有堿性磷酸酶的多個二抗與RNA-DNA雜交體結(jié)合,放大信號。(5)堿性磷酸酶使酶底物發(fā)光,根據(jù)光的強(qiáng)弱確定堿性磷酸酶的含量,從而確定RNA-DNA雜交體的含量。HC-Ⅱ采用96孔平板法,可一次檢測13種高危型HPV(即HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68)。四、高危型hpv陽性檢測HPV陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn)定為:HPV-DNA含量為檢測樣本的相對光單位(relativelightunit,RLU)/標(biāo)準(zhǔn)陽性對照的RLU≥1.0,相當(dāng)于標(biāo)本中檢出的HPV負(fù)荷量≥1.0pg/ml,即診斷為高危型HPV陽性。所有宮頸病變的診斷均以陰道鏡下多點(diǎn)活檢和頸管診刮術(shù)的組織病理學(xué)檢查結(jié)果作為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。五、統(tǒng)計(jì)方法本研究采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件中的t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。結(jié)果一、急性子宮頸炎臨床病理資料2087例HPV-DNA陽性婦女中,67.2%(1402/2087)為子宮頸炎,包括慢性子宮頸炎47.5%(991/2087)、急性子宮頸炎19.7%(411/2087);31.8%(663/2087)為子宮頸癌前病變,包括CINⅠ14.6%(305/2087)、CINⅡ8.2%(172/2087)、CINⅢ8.9%(186/2087);而子宮頸浸潤癌(SCC)只有1.1%(22/2087)。二、不同級別和子宮頸癌前病變和scc的hpv-dna含量比較慢性子宮頸炎的HPV-DNA的含量為150±11,急性子宮頸炎為108±13;CINⅠ為332±29,CINⅡ?yàn)?58±35,CINⅢ為370±31;SCC為593±86。其中,子宮頸癌前病變(CINⅠ~Ⅲ)和SCC的HPV-DNA含量均明顯高于慢性宮頸炎,差異有極顯著性(P<0.01);SCC的HPV-DNA含量也明顯高于子宮頸癌前病變(P<0.05)。不同級別的子宮頸癌前病變(CINⅠ~Ⅲ)的HPV-DNA含量呈遞增趨勢,但差異無顯著性(P>0.05)。急、慢性宮頸炎的HPV-DNA含量比較,差異也無顯著性(P>0.05)。討論一、新生兒患者子宮頸癌和癌前病變的篩查HC-Ⅱ是由美國Digene公司開發(fā)的、獲得美國食品藥品管理局惟一批準(zhǔn)的、用于臨床非放射性檢驗(yàn)HPV-DNA的新技術(shù)。有高危型和低危型兩種探針。本研究采用96孔平板法、高危型探針,可同時檢測13種高危型HPV,工作效率高、成本低,具有較高的敏感性和特異性,陰性預(yù)測值較高。目前,歐洲某些國家已推薦用HC-Ⅱ檢測HPV與細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合對大規(guī)模人群進(jìn)行子宮頸癌和癌前病變的篩查,為臨床醫(yī)生提供更具有選擇性和經(jīng)濟(jì)效益的隨訪計(jì)劃。本組資料也充分體現(xiàn)了HC-Ⅱ檢測HPV用于大規(guī)模人群篩查的優(yōu)越性,用較短的時間在宮頸癌高發(fā)現(xiàn)場篩查了9075例婦女,其中2087例婦女HPV陽性,進(jìn)一步做了陰道鏡檢查及子宮頸多點(diǎn)活檢和頸管診刮術(shù),經(jīng)組織病理學(xué)診斷明確了HPV陽性婦女現(xiàn)存的宮頸病變狀態(tài)。為采用子宮頸HPV感染預(yù)測宮頸病變的臨床價值奠定了基礎(chǔ)。HC-Ⅱ檢測HPV感染還存在一些缺點(diǎn),(1)檢測的是多種高危型HPV混合在一起,難以明確宮頸病變中特異的HPV類型。(2)HC-Ⅱ的高危型探針與低危型探針有交叉反應(yīng),文獻(xiàn)報道至少可檢出22種HC-Ⅱ高危型探針外的HPV類型。(3)HC-Ⅱ檢測HPV-DNA是以檢測標(biāo)本的RLU/標(biāo)準(zhǔn)陽性對照的RLU表達(dá)樣本中HPV-DNA的含量,受樣本中脫落細(xì)胞的取樣量和宮頸病變大小等因素的影響。因此,HC-Ⅱ不是檢測宮頸HPV-DNA含量的精確定量方法。二、不同級別子宮頸癌前病變與pv-dna的相關(guān)性目前的研究結(jié)果顯示,不同方法測定的HPV-DNA含量與宮頸病變嚴(yán)重程度的關(guān)系存有爭議,但是多數(shù)文獻(xiàn)報道HC-Ⅱ檢測的HPV-DNA含量與宮頸病變的嚴(yán)重程度無關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn),SCC的HPV-DNA含量顯著高于子宮頸癌前病變(P<0.05)和慢性子宮頸炎(P=0.000);而且還發(fā)現(xiàn),不同級別的宮頸癌前病變,由CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ,其HPV-DNA含量呈遞增趨勢,但差異無顯著性(P>0.05),說明子宮頸HPV-DNA的含量可能與子宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展有關(guān),高水平的HPV-DNA含量可能促進(jìn)子宮頸從慢性子宮頸炎狀態(tài)逐步進(jìn)展到子宮頸癌前病變的CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ,進(jìn)而發(fā)生SCC。本組結(jié)果與terHarmsel等和Nicolas等采用半定量PCR方法及Vince等采用HC-Ⅱ方法的研究結(jié)果相似。但不同級別的子宮頸癌前病變的HPV-DNA含量間比較,差異均無顯著性(P>0.05),可能是因?yàn)?(1)CINⅠ和CINⅡ病變中常有一定比例的低危型HPV感染,與HC-Ⅱ檢測的高危型探針發(fā)生了交叉反應(yīng),干擾了HC-Ⅱ?qū)Ω呶P虷PV-DNA含量的測定。(2)HC-Ⅱ檢測HPV-DNA陽性閾值按廠商提供的檢測樣本的RLU/標(biāo)準(zhǔn)陽性對照的RLU≥1.0,陽性閾值太低,檢測宮頸病變的敏感性很高而特異性相對偏低,干擾了不同級別宮頸癌前病變的HPV-DNA含量的差異。(3)不
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