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文檔簡介
宮頸hpv負荷量與子宮頸癌及其癌前病變的關系
隨著各種檢測方法和宮頸疾病的發展,生宮頸癌的發病率在世界范圍內呈下降趨勢,但在中國,發病率仍然是女性腫瘤的第一位,是女性死亡的主要原因。近十余年來,越來越多以大規模人群為基礎的流行病學資料顯示,人乳頭狀瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV),尤其是高危型HPV感染與子宮頸癌和癌前病變的發生密切相關。目前,國外有文獻報道,子宮頸感染患者的HPV負荷量與宮頸病變的嚴重程度有關。半定量PCR和雜交捕獲(hybridcapture,HC)方法是定量檢測HPV感染的主要方法。我院于2001年12月~2002年5月在山西省子宮頸癌高發區的9075例已婚婦女進行篩查,采用目前世界上最新的雜交捕獲二代(hybridcaptureⅡ,HC-Ⅱ)方法定量檢測其宮頸HPV-DNA的含量,并進行初步分析,現報道如下。數據和方法一、感染情況篩查2001年12月~2002年5月,我院對山西省襄垣縣和陽城縣的9075例已婚婦女宮頸的HPV感染情況進行了篩查。選擇年齡在35~50歲、無子宮切除和宮頸手術史、篩查時為非妊娠狀態、無盆腔放療史、從未參加過普查的已婚婦女,共9075例。其中,2087例為HPV陽性婦女,隨后對這些婦女進行了陰道鏡檢查、子宮頸多點活檢和頸管診刮術(行陰道鏡檢查的醫生不知道宮頸HPV檢測結果)。二、凍存樣品的制備用美國Digene公司提供的專用HPV取樣器,插入子宮頸外口,順時針或逆時針轉動5圈,慢慢取出取樣器放入標有受試者編碼的含有保存液的小瓶中,置-20℃冰箱凍存,隨后送我院實驗室進行檢查。三、dna雜交體的制備采用美國Digene公司提供的HC-ⅡHPV-DNA檢測試劑盒檢測樣本中HPV-DNA含量(以此表示HPV負荷量),其原理是利用放大抗體捕獲的信號和檢測化學發光信號。具體操作步驟(按試劑盒說明進行):(1)樣本DNA雙鏈被釋放并分解為核苷酸單鏈。(2)DNA單鏈與RNA探針結合為RNA-DNA雜交體。(3)特異性抗體將RNA-DNA雜交體固定在微孔壁上。(4)結合有堿性磷酸酶的多個二抗與RNA-DNA雜交體結合,放大信號。(5)堿性磷酸酶使酶底物發光,根據光的強弱確定堿性磷酸酶的含量,從而確定RNA-DNA雜交體的含量。HC-Ⅱ采用96孔平板法,可一次檢測13種高危型HPV(即HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68)。四、高危型hpv陽性檢測HPV陽性的判斷標準定為:HPV-DNA含量為檢測樣本的相對光單位(relativelightunit,RLU)/標準陽性對照的RLU≥1.0,相當于標本中檢出的HPV負荷量≥1.0pg/ml,即診斷為高危型HPV陽性。所有宮頸病變的診斷均以陰道鏡下多點活檢和頸管診刮術的組織病理學檢查結果作為診斷的金標準。五、統計方法本研究采用SPSS10.0統計軟件中的t檢驗進行分析。結果一、急性子宮頸炎臨床病理資料2087例HPV-DNA陽性婦女中,67.2%(1402/2087)為子宮頸炎,包括慢性子宮頸炎47.5%(991/2087)、急性子宮頸炎19.7%(411/2087);31.8%(663/2087)為子宮頸癌前病變,包括CINⅠ14.6%(305/2087)、CINⅡ8.2%(172/2087)、CINⅢ8.9%(186/2087);而子宮頸浸潤癌(SCC)只有1.1%(22/2087)。二、不同級別和子宮頸癌前病變和scc的hpv-dna含量比較慢性子宮頸炎的HPV-DNA的含量為150±11,急性子宮頸炎為108±13;CINⅠ為332±29,CINⅡ為358±35,CINⅢ為370±31;SCC為593±86。其中,子宮頸癌前病變(CINⅠ~Ⅲ)和SCC的HPV-DNA含量均明顯高于慢性宮頸炎,差異有極顯著性(P<0.01);SCC的HPV-DNA含量也明顯高于子宮頸癌前病變(P<0.05)。不同級別的子宮頸癌前病變(CINⅠ~Ⅲ)的HPV-DNA含量呈遞增趨勢,但差異無顯著性(P>0.05)。急、慢性宮頸炎的HPV-DNA含量比較,差異也無顯著性(P>0.05)。討論一、新生兒患者子宮頸癌和癌前病變的篩查HC-Ⅱ是由美國Digene公司開發的、獲得美國食品藥品管理局惟一批準的、用于臨床非放射性檢驗HPV-DNA的新技術。有高危型和低危型兩種探針。本研究采用96孔平板法、高危型探針,可同時檢測13種高危型HPV,工作效率高、成本低,具有較高的敏感性和特異性,陰性預測值較高。目前,歐洲某些國家已推薦用HC-Ⅱ檢測HPV與細胞學檢查聯合對大規模人群進行子宮頸癌和癌前病變的篩查,為臨床醫生提供更具有選擇性和經濟效益的隨訪計劃。本組資料也充分體現了HC-Ⅱ檢測HPV用于大規模人群篩查的優越性,用較短的時間在宮頸癌高發現場篩查了9075例婦女,其中2087例婦女HPV陽性,進一步做了陰道鏡檢查及子宮頸多點活檢和頸管診刮術,經組織病理學診斷明確了HPV陽性婦女現存的宮頸病變狀態。為采用子宮頸HPV感染預測宮頸病變的臨床價值奠定了基礎。HC-Ⅱ檢測HPV感染還存在一些缺點,(1)檢測的是多種高危型HPV混合在一起,難以明確宮頸病變中特異的HPV類型。(2)HC-Ⅱ的高危型探針與低危型探針有交叉反應,文獻報道至少可檢出22種HC-Ⅱ高危型探針外的HPV類型。(3)HC-Ⅱ檢測HPV-DNA是以檢測標本的RLU/標準陽性對照的RLU表達樣本中HPV-DNA的含量,受樣本中脫落細胞的取樣量和宮頸病變大小等因素的影響。因此,HC-Ⅱ不是檢測宮頸HPV-DNA含量的精確定量方法。二、不同級別子宮頸癌前病變與pv-dna的相關性目前的研究結果顯示,不同方法測定的HPV-DNA含量與宮頸病變嚴重程度的關系存有爭議,但是多數文獻報道HC-Ⅱ檢測的HPV-DNA含量與宮頸病變的嚴重程度無關。本研究發現,SCC的HPV-DNA含量顯著高于子宮頸癌前病變(P<0.05)和慢性子宮頸炎(P=0.000);而且還發現,不同級別的宮頸癌前病變,由CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ,其HPV-DNA含量呈遞增趨勢,但差異無顯著性(P>0.05),說明子宮頸HPV-DNA的含量可能與子宮頸癌的發生和發展有關,高水平的HPV-DNA含量可能促進子宮頸從慢性子宮頸炎狀態逐步進展到子宮頸癌前病變的CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ,進而發生SCC。本組結果與terHarmsel等和Nicolas等采用半定量PCR方法及Vince等采用HC-Ⅱ方法的研究結果相似。但不同級別的子宮頸癌前病變的HPV-DNA含量間比較,差異均無顯著性(P>0.05),可能是因為:(1)CINⅠ和CINⅡ病變中常有一定比例的低危型HPV感染,與HC-Ⅱ檢測的高危型探針發生了交叉反應,干擾了HC-Ⅱ對高危型HPV-DNA含量的測定。(2)HC-Ⅱ檢測HPV-DNA陽性閾值按廠商提供的檢測樣本的RLU/標準陽性對照的RLU≥1.0,陽性閾值太低,檢測宮頸病變的敏感性很高而特異性相對偏低,干擾了不同級別宮頸癌前病變的HPV-DNA含量的差異。(3)不
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