甘肅泉酒鎖陽中總黃酮的提取工藝研究

鎖陽科鎖陽科的單株植物主要屬于系列性植物，通常寄生在系列性植物根部。是所有寄生蟲的后代。目前,大量研究證明,鎖陽黃酮類化合物主要為兒茶素(Catechin)、柑桔素4/-O-吡喃葡萄糖及一種以柑桔素為苷元的配糖體。近幾年研究表明,黃酮類化合物有明顯的抗潰瘍、抗菌、抗炎、降血脂等藥用保健功能;有防止動脈硬化或栓塞等效果;,可作血管保護劑;對胸悶、心悸及早搏均有一定作用;對眩暈綜合征、急性耳鳴、口臭等癥狀有防治功能。作為天然來源的黃酮類化合物,能有效地清除自由基和脂質過氧化物,捕捉生物體內的超氧化物及過氧離子,切斷生物體內導致人體衰老與病痛的脂質過氧化物連鎖反應,螯合金屬離子使之鈍化,防止脂肪氧化酶作用,從而具有抗衰老作用。是一種具有廣泛開發前景的天然抗氧化劑。目前,對鎖陽中黃酮類化合物提取工藝及生理活性報道不多。鎖陽為蘭州太保制藥有限公司的主要生產原料,主要原料來源與甘肅酒泉、內蒙、新疆,生產中發現,鎖陽浸膏黃酮含量不穩定,特此對提取工藝和測定方法進行考察和優選,用正交試驗設計方法優選適合本公司生產條件的鎖陽中總黃酮類化合物的提取工藝,為生產工藝的改進提供科學依據。1設備1.1sz202型熱電溫度干燥箱KQ3200型提取清洗器(昆山市提取儀器有限公司);SZ202型電熱溫度干燥箱(浙江諸暨縣馬劍電熱儀器廠);HH-S恒溫水浴鍋(江蘇金壇縣醫療儀器廠)。1.2試劑：蘆丁對照品泰康制藥廠提供乙醇、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、硝酸鋁均為分析純試劑。1.3藥品嘉峪關市藥品檢驗所提供2方法和結果2.1黃樹莓原汁、亞硝酸鈉溶液、10.5,10.5精密稱取蘆丁對照品2mg,置于10ml容量瓶中,加入50%乙醇適量,提取處理使之溶解,放冷。加50%乙醇水溶液至刻度,搖勻。精密吸取0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5ml蘆丁儲備液,分別置于10ml容量瓶中,先加入0.3ml5%亞硝酸鈉溶液,放置6min后,再加0.3ml10%硝酸鋁,再放置6min后,加4ml4%氫氧化鈉溶液,最后用50%的乙醇定容至10ml放置15min后,以0號液做空白液在510nm處測吸光度。其吸光度與濃度做線性回歸,得蘆丁含量與吸光度的回歸方程為Y=12.88X-0.0032,r=0.9996。2.2方法研究2.2.1穩定性測定取同一供試品在0min,5min,10min,30min,60min,120min時間測定吸光度,結果表明,樣品在120min內穩定。RSD=1.73%。2.2.2提取溶液制備精密稱取已測知含量的鎖陽樣品份,分別加入相應量的對照品,精密稱定鎖陽粉末約1.0000g,以50%乙醇為溶劑5ml回流提取1.5h,濾過,定容至50ml容量瓶中,備用。吸取備用溶液1ml置于10ml容量瓶中,用50%乙醇定容,精密吸取溶液1ml照2.1項下的方法顯色,測定吸光度,由線性回歸方程計算樣品中總黃酮的含量,測得平均回收率為100.97%,RSD=3.6%。2.2.3準確度的研究取同一供試品溶液重復測定5次,計算其RSD=0.73%。2.2.4重復試驗精密稱取鎖陽粉末5份,每份1.0000g,依2.2.2項制備供試品,測定,計算總黃酮含量,RSD=2.03%。2.3鎖陽粉添加量的測定以乙醇濃度、提取時間、固液比為因素,以乙醇50%、60%、70%,提取時間60,90,120min,固液比1∶40,1∶50,1∶60(g/ml)為水平,精密稱取鎖陽粉末1.0000g,采用L9(34)正交表進行實驗,因素水平見表1,實驗安排見表2。2.4黃酮類化合物的提取效率從表2通過極差分析可知A,B,C這3個因素對鎖陽中黃酮類化合物提取率的影響次序為A>B>C,通過表3方差分析,固液比提取時間、乙醇濃度對黃酮類化合物的提取效率影響無統計學意義,測定方法也準確可靠,所以影響鎖陽浸膏黃酮含量主要影響因素不在提取工藝。根據極差分析乙醇濃度選擇A3,固液比選擇C2,提取時間選擇B3,提取的最佳工藝為A3B3C2,即乙醇濃度70%,提取120min,固液比1∶50。3黃酮類化合物的提取用正交實驗優化提取工藝,實驗結果表明,以60%乙醇水溶液作為溶劑,固液比為1∶50,提取120min,提取效果最好,可提高總黃酮提取率,為鎖陽浸膏黃酮類化合物提取改進工藝提供了參考,但各因素影