艷莊化妝品微生物檢驗操作方法文件編號：QC-QS-C15-101制定日期：2008.09.03版本：Z頁號：1/51：本方法包括化妝品微生物檢測的五項指標：細菌總數、霉菌和酵母菌總數、糞大腸菌群、銅綠假單孢菌、金黃色葡萄球菌。2：樣品的采集以及注意事項:2.1所采集的樣品，應具有代表性，一般視每批化妝品數量大小，隨機抽取相應數量的包裝單位。檢驗時，應分別從兩個包裝單位以上的樣品中共取10g或10ml,包裝量小于20g的樣品，采集量應適量增加，其總量應大于16g。2.2供檢驗樣品，應嚴格保持原有的包裝狀態，進口產品應為市售包裝。容器不應有破裂，在檢驗前不得打開，防止樣品被污染。2.3接到樣品后，應立即登記，編寫檢驗序號，并按檢驗要求盡快檢測。如不能及時檢驗，樣品應放在室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。2.4若只有一份樣品而同時需做幾種分析，如微生物、理化等，則先做微生物檢驗，再將剩余樣品作其它的分析。2.5在檢驗過程中，從打開包裝到全部檢驗操作結束，均須防止微生物的再污染和擴散，所用采樣用具、器皿及材料均應事先滅菌，全部操作應在無菌室內進行，或在相應條件下，按無菌操作規定進行。3：供檢樣品的制備：3.1液體樣品3.1.1水溶性的液體樣品，量取10ml加到90ml滅菌生理鹽水中，混勻后，制成1：10的檢液。3.1.2油性液體，取樣品10ml，先加5ml滅菌液體石蠟混勻，再加10ml滅菌的吐溫80，在40~44℃水浴中乳化，制成1：10的懸液。3.2膏、霜、乳劑半固體狀樣品3.2.1親水性的樣品，稱取10g，加到滅菌的帶玻璃珠加有90ml滅菌生理鹽水的三角瓶中（也可以在試管中進行），充分振蕩混勻，靜置15min，用其上清液作為1：10的檢液。3.2.2疏水性的樣品，稱取10g，放到滅菌的研缽（或試管）中，加10ml滅菌液體石蠟，研磨成粘稠狀，再加10ml滅菌吐溫80，研磨待溶解后，加70ml滅菌生理鹽水，在40~44℃水浴中充分混合，制成1：10檢液。3.2.3固體樣品，稱取10g，加到90ml滅菌的生理鹽水中，充分振蕩混勻，使其分散混懸，靜置，取上清液作為1：10的檢液。注：如有均質器，上述水溶性膏、霜、粉劑等，可稱10g樣品加到90ml滅菌生理鹽水，均質1~2min，疏水性膏、霜及眉筆、口紅等，稱10g樣品，加10ml滅菌液體石蠟，10ml滅菌吐溫80，70ml滅菌生理鹽水，均質3~5min確定日期核準審核擬案艷莊化妝品微生物檢驗操作方法文件編號：QC-QS-C15-101制定日期：2008.09.03版本：Z頁號：2/54：微生物檢驗操作：4.1菌落總數4.1.1定義：菌落總數是指化妝品檢樣經過處理，在一定條件下培養后（如培養基成分、培養溫度、培養時間、PH值、需氧性質等），1g(ml)檢樣中所含有菌落的總數。所得結果只包括一群本方法規定的條件下生長的中溫的需氧性菌落總數。測定菌落總數便于判明樣品被細菌污染的程度，是對樣品進行衛生學說總評論的綜合依據。4.1.2菌落總數檢驗程序：檢樣↓做成幾個適當倍數的稀釋液↓選擇2~3個適宜稀釋度，各以1ml分別加入滅菌平皿內↓每皿內加入適量卵磷脂吐溫80營養瓊脂37℃培養48±2h↓菌落計數↓報告4.1.3結果報告：應選擇菌落數在30~300個范圍之內的平皿計數，乘以稀釋倍數后，即為每g(ml)檢樣中所含的細菌菌落數。以CFU/g(ml)表示。4.2霉菌和酵母菌4.2.1定義：霉菌和酵母菌總數是指化妝品檢樣在一定條件培養后1g(ml)化妝品中所污染的活的霉菌和酵母菌菌落總數，籍以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般衛生狀況。本方法根據霉菌和酵母菌特有的形態和培養特性，在虎紅培養基上，置28℃培養72h，計算所生長的霉菌和酵母菌數。4.2.2霉菌和酵母菌檢驗程序：確定日期核準審核擬案艷莊化妝品微生物檢驗操作方法文件編號：QC-QS-C15-101制定日期：2008.09.03版本：Z頁號：3/5檢樣（1：10）↓若菌較多可做成幾個適當倍數的稀釋液↓選擇1~3個適宜稀釋度各以1ml分別加入滅菌平皿內↓每皿內加入適量虎紅培養基28℃培養72h↓霉菌和酵母菌計數報告4.2.3結果報告：判定結果時，應選取菌落數在5~50個范圍之內的平皿計數，乘以稀釋倍數后，即為每g(ml)檢樣中所含有的霉菌和酵母菌總數，以CFU/g(ml)表示。4.3糞大腸菌群4.3.1定義：糞大腸菌群系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢桿菌，在44.5℃培養24~48h能發酵乳糖產酸產氣。改菌來之人和溫血動物糞便，是重要的衛生指示菌。4.3.2糞大腸菌群檢驗程序檢驗（1：10）↓乳糖膽鹽發酵管44±0.5℃，24~48h↓↓↓不產酸產氣產酸產氣↓↓糞大腸菌群陰性↓↓↓報告EMB平板37℃18~24h蛋白胨水44±0.5℃24h↓↓↓↓觀察靛基質反應革蘭氏染色典型菌落↓↓↓報告確定日期核準審核擬案艷莊化妝品微生物檢驗操作方法文件編號：QC-QS-C15-101制定日期：2008.09.03版本：Z頁號：4/54.3.3結果報告：根據發酵乳糖產酸產氣，平板上有典型菌落，并經證實為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質試驗為陽性，則可報告檢樣中檢出糞大腸菌群。4.4銅綠假單孢菌4.4.1定義：銅綠假單孢菌屬于假單孢菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃條件下能生長。該菌對人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等.4.4.2綠膿桿菌檢驗程序檢樣（1：10）↓增菌培養：SCDLP37℃培養18~24h↓分離培養：十六烷基三甲基溴化銨瓊脂37℃18~24h↓↓↓↓↓↓↓革蘭氏染色氧化酶試驗綠膿菌素試驗硝酸鹽產生試驗明膠液化試驗42℃生長試驗4.4.3結果報告4.4.3.1用十六烷甲基溴化胺瓊脂平板分離的疑似綠膿桿菌菌落，經染色色鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，氧化酶陽性并產生綠膿菌素的，應報告檢出綠膿桿菌。4.4.3.2如果分離的疑似菌株為革蘭氏陰性并產生綠膿菌色素，而能液化明膠，硝酸鹽還原產氣和42℃生長試驗皆為陽性的，也應報告檢出綠膿桿菌。4.5金黃色葡萄球菌：4.5.1定義：金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽孢，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。4.5.2金黃色葡萄球菌檢驗程序檢樣（1：10）↓增菌培養：SCDLP37℃培養24h↓分離培養：BairdParker平板（或血瓊脂平板）37℃培養24~48h）↓↓↓↓革蘭氏染色甘露醇發酵試驗血漿凝固酶試驗4.5.3結果報告：4.5.3.1經增菌培養后，在分離平板上有典型或可疑菌落生長，經染色鏡