不同產地生姜中總酚的測定

生姜是姜科植物的姜。它是一種新鮮的根，味道辛辣味道，味道略帶溫暖。該植物藥食兩用,同時也是常見的中藥炮制輔料,為歷版《中國藥典》所收載,既可作為調味品,又具有很好的藥用價值。具有解表散寒、溫中止嘔、化痰止咳、解魚蟹毒的功能。主要用于風寒感冒,胃寒嘔吐,寒痰咳嗽,魚蟹中毒等。文獻研究表明,生姜的辛辣味主要是其中含有姜辣素類物質,該類物質是酚的同系物,對鮮姜的化學成分研究表明,其中除6-姜酚外,還含有4-、7-、8-、10-姜酚,4-、6-、8-、10-、12-姜醇,5-脫氧姜辣素、甲基-6-異姜酚、6-異姜烯酚、6-、8-、10-、12-姜二酮等多種酚類成分。生姜由于具有很好的抗氧化性能,目前在化妝品、食品添加劑、洗滌護膚等方面應用廣泛。現代藥理學研究表明,生姜中的姜酚類物質具有抗氧化、抗腫瘤、抗神經損傷和細胞保護、抗嘔吐等藥理活性。研究表明,6-姜酚具有抗炎活性,在體內、體外試驗中,該化合物均在分子水平顯示出能調節相應的細胞信號傳導通路的作用;10-姜酚、8-姜醇、10-姜醇等均具有抑制COX-2的作用。《中國藥典》2010年版僅測定了生姜中6-姜酚的含有量,對于其它酚類化合物的含有量沒有相應的測定方法。國內文獻也尚未見有關生姜中總酚含有量測定的相關報道。本實驗建立了生姜中總酚的測定方法,同時對我國不同地域的生姜中總酚量進行了測定,一來為生姜的質量控制奠定基礎,二來也為生姜的合理應用提供試驗和理論依據。1儀器和試劑盒1.1sartorusb211d型電子天平電子天平的表征島津UV—2401紫外可見分光光度計;SartoriusBP211D型電子天平;TCG—16G臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)。1.2相關試劑和儀器沒食子酸對照品(110831-200803,中國藥品生物制品檢定所,供定量測定用);水為二次蒸餾水;其它試劑均為國產分析純。生姜產地分別為四川西昌、海南海口、湖南永州、福建永春、江西贛州、浙江臺州、山東信豐、山東沂蒙山、四川德陽、江蘇徐州。以上生姜均為2012年5月收集得到。2方法和結果2.1試劑的制備2.1.1對照品貯備液的制備精密稱取沒食子酸對照品適量,置于50mL量瓶中,加80%乙醇稀釋至刻度,搖勻,制成0.203mg/mL的對照品貯備液。2.1.2上清液液的制備取生姜藥材,洗凈,拭干,切成細末,精密稱取該細末約20.0g,加80%乙醇30mL,浸泡1h,超聲(工作頻率40kHz,功率250W)30min,離心(4000r/min)5min,取上清液置50mL量瓶中,殘渣加80%乙醇洗滌兩次,每次5mL,同前離心,合并上清液,加80%乙醇定容,搖勻。即得。2.1.3硫酸溶液的制備稱取20.0g鎢酸鈉和5.0g鉬酸鈉置于圓底燒瓶中,加140mL水溶解,加入85%磷酸溶液10mL和濃鹽酸20mL,溶解后混勻,文火回流10h,然后加入3.0g硫酸鋰及15mL雙氧水,加熱沸騰15min至亮黃色,不得帶微藍和綠色。冷卻,移入250mL棕色量瓶中,加水定容,搖勻,暗處保存。2.2最大吸收波長確定精密吸取對照品溶液和供試品溶液各0.1mL,分別加80%乙醇0.4mL,加3mL水,加10%福氏試劑2.5mL,加7.5%碳酸鈉2.0mL,加水2.0mL,混勻,45℃水浴40min,取出,搖勻,室溫放置10min后,于400~800nm范圍內進行光譜掃描,結果表明,對照品溶液和供試品溶液的最大吸收波長均為765nm,見圖1。2.3測定項目的準備精密吸取對照品貯備液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL,分別加80%乙醇0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.0mL,加3mL水,加10%福氏試劑2.5mL,加7.5%碳酸鈉2.0mL,加蒸餾水2.0mL,混勻,45℃水浴40min,取出,搖勻,室溫放置10min后,765nm處測定吸光度。以吸光度為縱坐標,質量濃度為橫坐標繪制標準曲線,求得回歸方程為Y=0.0809X+0.0798,r=0.9999。線性范圍為2.03~10.15μg/mL。2.4精密度測試取質量濃度為6.09μg/mL的對照品溶液,重復測定6次,記錄其吸光度的值,RSD為0.14%,結果表明儀器精密度良好。2.5穩定性測定精密吸取新鮮配制的生姜供試品(四川西昌)溶液0.1mL置于10mL的棕色具塞試管中,照2.2項下操作,分別于0、0.5、1、1.5、2h測定其吸光度,RSD為0.34%,結果表明本法所測樣品在2h內保持穩定。2.6細末密度的測定取產自四川西昌的生姜藥材,洗凈,拭干,切成細末,分別精密稱取該細末約20.0g,平行6份。分別制成供試品溶液,照2.2項下操作,結果其中所含總酚的平均質量分數為0.080%,RSD為0.64%,結果表明所測樣品的重復性良好。2.7對照品貯備液取沒食子酸對照品適量,加80%乙醇溶解,配成質量濃度為0.8054mg/mL的溶液,作為加樣對照品貯備液。取產自四川西昌的生姜藥材,洗凈,拭干,切成細末,精密稱取該細末約10.0g,平行6份,精密加入加樣對照品貯備液10.0mL,加80%乙醇20mL,照2.1.2項下操作,測定吸光度的值并計算回收率,得平均回收率為100.53%,RSD為1.07%。結果見表1。2.8總酚含量測定取各產地的生姜藥材,洗凈,拭干,切成細末,各精密稱取約20.0g,每個產地平行3份,按供試品溶液制備方法制備。精密吸取上述各供試品溶液0.1mL置10mL的棕色具塞試管中,照2.2項下操作,測定吸光度的值,每份平行測定兩次。根據標準曲線計算其中總酚的含有量。結果見表2。3結論3.1有機生姜的來源本課題組根據我國的生姜種植情況,共收集了10個產地的生姜:山東信豐、山東沂蒙山、四川西昌、四川德陽、湖南永州、江西贛州、福建永春、浙江臺州、江蘇徐州、海南海口。這些生姜都是當地農家種植的有機生姜,由于生姜采收期為每年的9、10月份,剛采收上來的姜稱為“嫩姜”,我們收集的時候已經是次年的5月份,這個時候是“老姜”,也就是我們平時見到的生姜。這些都是從當地農民家的地窖里取出來的。從外形看,除山東和徐州的生姜個頭較大外,其它產地的生姜個頭都比較小,也就是我們常說的“本生姜”。3.2本實驗對來自不同區域的生姜進行了總酚值測定。結果表明，全國不同地區的生姜總酚值差異很大。最小的是海南海口生產的生姜，質量比為0.108%。最低的是山東省新豐市和江蘇省徐州市的生姜，質量比為0.054%，僅為海南海口生姜的1.2%推測可能與生姜的生長環境及氣候等因素有關。3.3在實驗過程中，參考相關文獻[12-13]，研究了試劑的用量、反應時間和其他因素對顏色的穩定性的影響3.3.1由于姜中酚類物質的抗滲透性較低，在選擇提取物時，50%、60%和80%乙醇作為提取溶劑，并在30分鐘內獲得溶液的顯色率后，測量結果表明，溶液在超聲下是穩定的3.3.2由于在整個實驗過程中使用的試劑，如福氏試劑和碳酸鈉，都是親水試劑，因此在濃度的乙醇溶液中結晶，最終影響最終顯色反應后溶液的澄清度。實驗結束后，確定“加入10%福氏試劑2.5ml、加入7.5%碳酸鈉2.0ml和加入2.0ml”。對于這樣的試劑比例，顯色溶液的滲透性和穩定性都