實(shí)驗(yàn)六薄層色譜層析一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)薄層色譜法的原理和方法；2、學(xué)會(huì)利用薄層色譜分離提純有機(jī)化合物的規(guī)范操作；2、掌握比移值的計(jì)算方法；3、了解比移值的影響因素。二、實(shí)驗(yàn)原理基本原理：利用混合物中各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其他親和作用的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)，進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配等作用，從而將各組分分開(kāi)。分類：柱色譜、紙色譜、薄層色譜、氣相色譜、

液相色譜薄層色譜(thinlayerchromatography)常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固－液吸附色譜。是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種微量、快速而簡(jiǎn)單的色譜法，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。一方面適用于小量樣品（幾到幾十微克，甚至0.01μg）的分離；另一方面若在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚，將樣品點(diǎn)成一條線，則可分離多達(dá)500mg的樣品。因此又可用來(lái)精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外，在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時(shí)，常利用薄層色譜觀察原料斑點(diǎn)的逐步消失來(lái)判斷反應(yīng)是否完成。依其所采用的薄層材料性質(zhì)和物理、化學(xué)原理的不同，可分為吸附薄層色譜、分配薄層色譜、離子交換薄層色譜和排阻薄層色譜等。吸附薄層色譜采用硅膠、氧化鋁等吸附劑鋪成薄層，將樣品以毛細(xì)管點(diǎn)在原點(diǎn)處，用移動(dòng)的展開(kāi)劑將溶質(zhì)解吸，解吸出來(lái)的溶質(zhì)隨著展開(kāi)劑向前移動(dòng)，遇到新的吸附劑，溶質(zhì)又會(huì)被吸附，新到的展開(kāi)劑又會(huì)將其解吸，經(jīng)過(guò)多次的解吸-吸附-解吸的過(guò)程，溶質(zhì)就會(huì)隨著展開(kāi)劑移動(dòng)。吸附力強(qiáng)的溶質(zhì)隨展開(kāi)劑移動(dòng)慢，吸附力弱的溶質(zhì)隨展開(kāi)劑移動(dòng)快，這樣不同的組分在薄層板上就得以分離。一個(gè)化合物在吸附劑上移動(dòng)的距離與展開(kāi)劑在吸附劑上移動(dòng)的距離的比值稱為該化合物比移值Rf溶質(zhì)的最高濃度中心至原點(diǎn)中心的距離溶劑前沿至原點(diǎn)中心的距離溶質(zhì)的最高濃度中心至原點(diǎn)中心的距離溶劑前沿至原點(diǎn)中心的距離比移值Rf＝薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板（10×3cm左右）上均勻的涂一層吸附劑或支持劑，帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點(diǎn)線上，涼干或吹干后置薄層板于盛有展開(kāi)劑的展開(kāi)槽內(nèi)，浸入深度為0.5cm。待展開(kāi)劑前沿離頂端約1cm附近時(shí)，將色譜板取出，干燥后噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。記下原點(diǎn)至主斑點(diǎn)中心及展開(kāi)劑前沿的距離，計(jì)算比移值（Rf）。展開(kāi)劑是影響色譜分離度的重要因素。一般來(lái)說(shuō)，展開(kāi)劑的極性越大，對(duì)特定化合物的洗脫能力也越大，一般常用展開(kāi)劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油醚<己烷<甲苯<苯<氯仿<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇<水<乙酸。三、主要試劑和材料蒽、香草醛、芴酮及其混合物；薄層層析硅膠G；薄玻璃板；環(huán)己烷：乙酸乙酯（5：1或6：1）；0.5%羧甲基纖維鈉(CMC-Na)水溶液；毛細(xì)管(內(nèi)徑小于1mm)A蒽B芴酮C香草醛四、實(shí)驗(yàn)裝置薄層色譜示意圖五、實(shí)驗(yàn)步驟在洗滌干凈的玻板（15×3cm）上均勻地涂上一層吸附劑或支持劑，待干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點(diǎn)線上，晾干或吹干后，置薄層板于盛有展開(kāi)劑的展開(kāi)槽內(nèi)，浸入深度為0.5cm。待展開(kāi)劑前沿離頂端約1cm附近時(shí)，將板取出，干燥后噴以顯色劑或在紫外燈下顯色或直接觀察。制板（簡(jiǎn)易平鋪法）（1）二塊15×3cm玻片，洗凈，控水取7.5cm×2.5cm載玻片4塊，用去污粉搽洗，再用水淋洗，最后浸入無(wú)水乙醇中，取出晾干。取用時(shí)手指只可接觸載玻片的邊緣，不能接觸載玻片兩面。（2）調(diào)糊：3g硅膠G和8mL0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液在小燒杯中攪勻。在50mL燒杯中，放入約3g硅膠，加入0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液8mL，調(diào)成糊狀。（3）鋪層：用牛角匙將此糊狀物傾倒于上述玻璃片上，用食指和拇指拿住玻璃片，做前后、左右振搖擺動(dòng)，反復(fù)數(shù)次，使流動(dòng)的糊狀物均勻地鋪在載玻片上。每組鋪二塊。（4）活化：將已涂好硅膠G的薄層板放置在水平的長(zhǎng)玻璃片上，室溫放置0.5h后，移入烘箱，緩慢升溫至110℃，恒溫0.5h。取出稍冷放入干燥器中備用。點(diǎn)樣：（1）畫(huà)線——起始線和前沿線

（2）毛細(xì)管點(diǎn)樣——斑點(diǎn)大小和斑點(diǎn)間間距。用內(nèi)徑小于1mm的毛細(xì)管取樣品溶液，在距離薄層板底端8~10mm處，垂直地輕輕接觸薄層板，斑點(diǎn)直徑要小于2mm，一塊薄層板可點(diǎn)2個(gè)樣品，注意保持一定的距離，但斑點(diǎn)不能太靠邊。展開(kāi)：展開(kāi)劑選擇；展開(kāi)方法——傾斜上行法。取一有蓋的廣口瓶作色譜器，加入展開(kāi)劑（用環(huán)己烷︰乙酸乙酯=3～5︰1），展開(kāi)劑高度不要超過(guò)5mm，以免淹沒(méi)斑點(diǎn)，然后將已點(diǎn)好樣品的薄層板放入色譜器中，蓋緊，等展開(kāi)劑上升到接近薄層板上沿時(shí)，打開(kāi)蓋子，迅速用鉛筆或小針在前沿作一記號(hào)取出，晾干。顯色：直接觀察并量取a、b值，計(jì)算比移值。先用肉眼觀察有無(wú)可見(jiàn)的斑點(diǎn)，然后放在紫外線分析儀下觀察熒光斑點(diǎn)，并用小針輕輕勾劃斑點(diǎn)的輪廓，最后放入盛有碘片的瓶中進(jìn)行顯色。樣品：蒽、香草醛、芴酮及其混合物【操作要點(diǎn)及注意事項(xiàng)】

1、調(diào)漿時(shí)要將硅膠加到CMC-Na中，以免生成太多的團(tuán)塊,漿液要有一定的流動(dòng)性，稠度以能沿玻棒成細(xì)線性下滴為宜。2、鋪板時(shí)一定要鋪勻，特別是邊、角部分，晾干時(shí)要放在平整的地方。3、點(diǎn)樣時(shí)點(diǎn)要細(xì)，直徑不要大于2mm,間隔0.5cm以上，濃度不可過(guò)大，以免出現(xiàn)拖尾、混雜現(xiàn)象。4、展開(kāi)用的燒杯要洗凈烘干，放入板之前，要先加展開(kāi)劑，蓋上表面皿，讓燒杯內(nèi)形成一定的蒸氣壓。點(diǎn)樣的一端要浸入展開(kāi)劑0.5cm以上,但展開(kāi)劑不可沒(méi)過(guò)樣品原點(diǎn)。當(dāng)展開(kāi)劑上升到距上端0.5－1cm時(shí)要及時(shí)將板取出，用鉛筆標(biāo)示出展開(kāi)劑前沿的位置。5、制板和活化：鋪板厚度0.25-1mm且均勻；晾干；一塊一塊鋪；活化時(shí)烘箱要從低溫開(kāi)始

6、點(diǎn)樣：畫(huà)線時(shí)不能將板劃破；點(diǎn)樣斑點(diǎn)直徑小于2mm，斑間距1-1.5cm，標(biāo)準(zhǔn)左樣品右；點(diǎn)樣結(jié)束干燥后再進(jìn)行下一步

7、展開(kāi)：展開(kāi)劑用環(huán)己烷：乙酸乙酯混合物（5：1或6：1）