一、高效液相色譜儀二、檢測器第二節(jié)

高效液相色譜儀2023/10/13生產(chǎn)廠家國外：Waters公司、Agilent公司（原HP）、SHMADZU（島津）公司、戴安等；國內(nèi)：大連依利特公司、上海分析儀器廠、北京分析儀器廠等。

2023/10/13HPLC儀器

2023/10/13液相色譜儀（2）2023/10/13液相色譜儀（3）2023/10/13液相色譜儀（4）2023/10/132023/10/13流程及主要部件

輸液系統(tǒng)

進樣系統(tǒng)

分離系統(tǒng)

檢測器

數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)2023/10/13一、輸液系統(tǒng)1）貯液瓶：

玻璃或塑料瓶，配有溶劑過濾器，其孔徑約2m；耐酸堿腐蝕；無色透明或棕色瓶；位置高于泵體，保持輸液靜壓差；密閉。溶劑應經(jīng)過0.45μm濾膜過濾（除去溶劑中的固體雜質(zhì)）。輸液管路頂端一般連有不銹鋼或玻璃制成的專用微孔過濾頭

2023/10/132）脫氣原因：在系統(tǒng)內(nèi)逸出氣泡，影響泵的工作；影響檢測器的靈敏度、基線穩(wěn)定性在梯度淋洗時會造成基線漂移或形成鬼峰除去氧氣的影響：流動相中的氧可能與樣品、固定相反應使其降解；與某些溶劑（如甲醇、四氫呋喃）形成有紫外吸收的絡合物，提高背景吸收；在熒光檢測中，可能會引起熒光淬滅現(xiàn)象；在電化學檢測中，氧的影響更大2023/10/13脫氣方法①加熱回流脫氣，②抽真空脫氣③超聲波振動脫氣，④吹氦脫氣⑤在線真空脫氣機脫氣Agilent1200HPLC在線真空脫氣機原理示意圖

2023/10/133)輸液泵主要部件之一，壓力：10-35MPa。泵：主要是柱塞往復泵式恒流泵要求壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕。2023/10/134)梯度洗脫裝置：等度洗脫、梯度洗脫梯度洗脫：隨時間程序地改變流動相組成（極性、pH或離子強度）。按多元流動相的加壓和混合順序，分為高壓梯度和低壓梯度兩種。高壓梯度:利用兩個輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后送入色譜柱，混合比由兩個泵的流速決定。低壓梯度:在常壓下用比例閥將多種溶劑按比例混合后，用1個泵加壓輸至色譜柱。便宜，易實施多元梯度洗脫，常用。2023/10/13二、進樣系統(tǒng)

1）六通進樣閥：進樣量準確，重現(xiàn)性好。

裝入樣品出口進樣采樣環(huán)泵入溶劑進色譜柱2）自動進樣裝置2023/10/13三、分離系統(tǒng)1）保護柱保護分析柱，擋住來源于樣品和進樣閥墊圈的微粒；與分析柱填料相同，粒徑大，易裝填；5cm長，使用50-100次。2023/10/132）色譜柱組成：柱管＋固定相柱端：隔膜片，阻止固定相逸出或流動相、樣品等帶入顆粒雜質(zhì)分析柱：內(nèi)徑2-4.6mm，柱長10-25cm制備柱：內(nèi)徑20-40mm，柱長10-30cm2023/10/133）柱溫箱精確控制柱溫可以提高tR

的重現(xiàn)性；較高的柱溫能增加樣品在流動相的溶解度，縮短分析時間；升高柱溫能增加柱效、提高R；分析高分子化合物或黏度大的樣品，高于室溫；分析具有生物活性的生物分子，低于室溫；常用柱溫范圍：室溫－65℃2023/10/134)柱效評價中國藥典（2005年版）規(guī)定：給出分析狀態(tài)下色譜柱的最小n，R，拖尾因子2023/10/13四、檢測系統(tǒng)對檢測器的要求：靈敏度高響應快重現(xiàn)性好線性范圍寬使用范圍廣死體積小對流動相流量和溫度波動不敏感2023/10/13(一)紫外檢測器（ultravioletdetector,UV）檢測原理和UV-Vis方法一樣。只是，此時所采用的吸收池為微量吸收池，通常其光程為2-10mm，體積約為1~10

L。

HPLC分析中，約有80%的物質(zhì)具