血清學診斷學習目標知識目標掌握血清學試驗概念、類型及應用理解血清學試驗的特點和影響因素能力目標在進行微生物的血清學診斷時，具備選擇正確試驗方法和應用的能力主要內容血清學試驗的概念血清學試驗的特點影響血清學試驗的因素血清學試驗的類型及應用重點與難點重點血清學試驗的概念和特點血清學試驗的類型及應用血清學試驗的原理難點血清學試驗的概念由于抗體主要存在于血清中，所以將體外發生的抗原抗體結合反應稱為血清學反應或血清學試驗。血清學試驗的特點特異性和交叉性敏感性可逆性反應的二階段性最適比例與帶現象用已知測未知特異性和交叉性特異性

抗原只能與相應抗體結合，而不能與其他抗體相結合。交叉性兩種不同的抗原之間含有共同的抗原決定簇，則發生交叉反應。敏感性抗原抗體的結合還具有高度敏感性的特點，不僅可檢測定性，還可以定量檢測微量、極微量的抗原或抗體。可逆性抗原與抗體的結合是分子表面的結合，這種結合是可逆的，結合條件為0℃～40℃、pH4～9。如溫度超過60℃或pH降到3以下，或加入解離劑時，則抗原抗體復合物又可重新解離，并且分離后抗原或抗體的性質仍不改變。反應的二階段性

第二階段

抗原抗體復合物出現可見反應階段。此階段反應慢、需數分鐘、數十分鐘或更久。第一階段抗原與抗體的特異性結合階段，此階段反應快、僅數秒至數分鐘，但不出現可見反應。最適比例與帶現象只有抗原和抗體的比例合適時，才能出現肉眼可見的反應現象。如果抗原過多或抗體過多，則抑制可見反應的出現，稱為帶現象。前帶

后帶前帶后帶用已知測未知所有的血清學試驗都是用已知抗原測定未知抗體，或用已知抗體測定未知抗原。影響血清學試驗的因素電解質：血清學反應須在適當濃度的電解質參與下，才出現可見反應。溫度：在一定溫度范圍內，溫度越高，抗原、抗體分子運動速度越快，這可以增加其碰撞的機會，加速抗原抗體結合和反應現象的出現。酸堿度：血清學反應通常用pH6～8，過酸或過堿都可使復合物解離，pH值在等電點時，可引起非特異凝集。振蕩：適當的機械振蕩能增加分子或顆粒間的相互碰撞，加速抗原抗體的結合反應，但強烈的振蕩可使抗原抗體復合物解離。雜質和異物：試驗介質中如有與反應無關的雜質、異物存在時，會抑制反應的進行或引起非特異性反應。

血清學試驗的類型凝集試驗沉淀試驗補體結合試驗中和試驗免疫標記技術凝集試驗的概念細菌、紅細胞等顆粒性抗原，或吸附在紅細胞、乳膠等顆粒性載體表面的可溶性抗原，與相應抗體結合后，在有適量電解質存在下，經過一定時間，復合物互相凝聚形成肉眼可見的凝集團塊，稱為凝集試驗。凝集試驗的類型直接凝集試驗間接凝集試驗直接凝集試驗概念：顆粒性抗原與相應抗體在電解質的參與下，直接結合，凝集成團的現象，稱直接凝集試驗。類型：按其操作方法可分為玻片法和試管法。1．玻片凝集試驗方法：在玻璃板或瓷片上進行。特點：簡單、快速。用途：定性試驗，如細菌鑒定、血型鑒定等。1、2為陰性3為強陽性4為弱陽性2．試管凝集試驗方法：在試管中進行。特點：準確、耗時。用途：定量試驗，如診斷布氏桿菌病，測定抗體的凝集價。間接凝集試驗概念：將可溶性抗原或抗體與載體連接后，再與相應的抗體或抗原作用，所出現的特異性凝集反應為間接凝集試驗。類型：

間接血凝試驗乳膠凝集試驗協同凝集試驗致敏紅細胞紅細胞抗原紅細胞抗原致敏紅細胞被檢抗體紅細胞凝集間接血凝試驗原理沉淀試驗的概念可溶性抗原與相應的抗體結合，在適量電解質存在下，經過一定時間，形成肉眼可見的白色沉淀，稱為沉淀試驗。沉淀試驗的類型環狀沉淀試驗瓊脂凝膠擴散試驗免疫電泳環狀沉淀試驗方法：在小口徑試管中進行。原理：試管內，下層沉淀素與上層沉淀原在液界面應形成白色沉淀環。用途：主要用于抗原的定性試驗，如炭疽桿菌的Ascoli試驗、鏈球菌的血清型鑒定、血跡鑒定等。白色沉淀環沉淀原沉淀素瓊脂凝膠擴散試驗原理

1%瓊脂凝膠孔徑為85nm，能使許多可溶性抗原與抗體在凝膠中擴散。當抗原與抗體在凝膠中的一定位置上相遇時，則兩者結合形成沉淀線。瓊脂凝膠擴散試驗類型單向單擴散單向雙擴散雙向單擴散雙向雙擴散方法用途雙向雙擴散方法此法系采用1%瓊脂倒于平皿或玻片上，制成凝膠板，可按需要打孔。將抗原、抗體分別滴入孔內，放置濕盒中，在37?C濕箱中24-72h后觀察。雙向雙擴散用途

抗原的比較和鑒定：在抗原與抗體孔間形成沉淀帶。每一種抗原成分出現一條沉淀帶。如兩個相鄰孔之間抗原相同，則沉淀帶融合，如1、2；抗原不同，則互相交叉，如3；部分相同則部分融合，另外不同部分則交叉，如4?？贵w的檢測：測抗體時，加待檢血清的相鄰孔應加入標準陽性血清作為對照，以資比較。測定抗體效價時可倍比稀釋血清，以出現沉淀帶的血清最大稀釋度為抗體效價。傳染性法氏囊抗原、抗體特異性結合出現的沉淀線白色沉淀線免疫電泳免疫電泳技術是把凝膠擴散試驗與電泳技術相結合的免疫檢測技術。即將瓊脂擴散置于直流電場中進行，讓電流來加速抗原與抗體的擴散并規定其擴散方向，在比例合適處形成可見的沉淀帶。補體結合試驗試驗系統、原理和結果判定反應系統已知抗原（抗體）待檢血清（抗原）補體綿羊紅細胞溶血素如溶血則為陰性如不溶血則為陽性指示系統反應結果的判定中和試驗概念：根據抗體能否中和病毒的感染性而建立的免疫學試驗。原理：病毒與抗血清中抗體特異結合后失去感染易感動物、雞胚或細胞活性。舉例

IBDV

9～11d雞胚24～48h雞胚死亡

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