實驗四蔗糖合成酶、酸性轉化酶、堿性轉化酶活力活力的測定參考TOC\o"1-5"\h\z\o"CurrentDocument"一、實驗意義和目的 2\o"CurrentDocument"二、實驗原理 2\o"CurrentDocument"三、材料、設備與試劑 3\o"CurrentDocument"四、實驗步驟 3\o"CurrentDocument"1.蔗糖合成酶活性測定實驗 3\o"CurrentDocument"2.轉化酶活性測定 4\o"CurrentDocument"五、實驗結果與分析 41.蔗糖合成酶活性測定 錯誤!未定義書簽。2.轉化酶活性測定 錯誤!未定義書簽。六、誤差分析 錯誤!未定義書簽。0=0-0HIHC-OHI

(HC-OHH2c-OHCOOH0=0-0HIHC-OHI

(HC-OHH2c-OHCOOH3,5- 水楊倒COOH3-S臥-乩砧基木楊播一、實驗意義和目的蔗糖作為植物體內主要的光合產物和運輸物質，其代謝強弱對許多生理活動都會產生顯著影響。蔗糖合成酶(SuSy)是植物進行蔗糖代謝的關鍵酶之一，與植物細胞組織和骨架的構建、植株的生長發育和果實的成熟以及植物對逆境脅迫的響應等方面密切相關，在植物的生長發育和代謝活動中具有重要作用。轉化酶也是催化蔗糖降解的重要酶類，為細胞的可溶性糖類貯庫提供可利用六碳糖，以用于細胞壁、貯藏多糖及果聚糖的生物合成，并通過與呼吸作用偶聯的氧化磷酸化產生能量，還是控制淀粉合成的關鍵酶，測定轉化酶活性對了解光合產物的貯存、轉運及累積都有重要意義。通過本實驗要掌握三種酶的作用、酶活力測定的原理和方法、學習酶活力的計算方法，了解糖類水解。二、實驗原理蔗糖合成酶催化蔗糖的水解反應：蔗糖+UDP蔗糖合成酶果糖+UDPG。2?轉化酶催化蔗糖的水解反應：蔗糖+H20—葡萄糖+果糖。根據催化反應所需的最適PH，可將轉化酶分為兩種：一種稱為酸性轉化酶，主要分布在液泡和細胞壁中，另一類轉化酶稱為堿性或中性轉化酶，主要分布在細胞質中。HC-OHIIC-O11｛融j I還煙撫 1 (Hc-oH 汕|II2c-Oh黃色的3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑與還原糖在堿性條件下共熱后，自身被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內，反應液里棕紅色的深淺與還原糖的含量成正比，在波長為540nm處測定溶液的吸光度，查對標準曲線并計算，便可求得樣品中還原糖的含量,從而計算得到相應酶活性。三、材料、器材與試劑材料：紅薯葉片器材：天平、研缽、恒溫水浴鍋、沸水浴鍋、離心機、分光光度計試劑：蔗糖合成酶活性測定提取液（50mMHepes-Na0H,PH7.5、把那幾種試劑抄下來）反應液（三種試劑抄下來）終止試劑（兩種試劑）轉化酶活性測定提取液同上反應液酸性Inv:醋酸……；堿性Inv：試劑終止試劑DNS同上!1!、實驗步驟!1!、實驗步驟蔗糖合成酶活性測定實驗繪制標準曲線準確稱取lOOmg無水葡萄糖,溶于蒸餾水并定容到100ml,使用時再稀釋10倍，得到100口g/mL葡萄糖溶液，將各管快速搖動混勻后，在沸水浴中加熱10min，取出冷卻，按照下表加入各試劑，最后在540nm波長下，以吸光度為縱坐標，含葡萄糖量（ug）為橫坐標繪制標準曲線。試劑管號123456100ug/mL葡萄糖溶液（mL）00.20.40.60.81.0蒸餾水（mL）21.81.61.41.21.0DNS(mL)555555葡萄糖量（ug）020406080100②酶液提取剪取紅薯葉片葉尖部分進行稱量得0.3245g,放入研缽中并加入2mL提取液進行研磨，然后用3mL提取液進行洗滌，全部轉移進離心管中。放入離心機中，在轉速為15000g下離心20分鐘，然后將上清液轉入另一個離心管中放入冰塊中備用。③反應取一支試管，用移液槍加入450uL反應液和200uL酶液，此時開始計時，放入30°C恒溫水浴鍋中保溫30分鐘。終止反應30分鐘后，向試管中加入250uLTricine-K0H和500uLDNS試劑，放入沸水浴中加熱10分鐘，然后取出冷卻至室溫，加入4mL蒸餾水。吸光度測定在540nm波長下，測定吸光度，記錄數據，計算酶活。轉化酶活性測定酶液提取同上反應取兩支試管，分別加入200uL蔗糖，然后其中一支試管中加入2200uL醋酸-NaOH，另一支加入2200uL醋酸鈉-醋酸，再分別加入100uL酶液，計時，放入30C恒溫水浴鍋中保溫30分鐘。終止反應兩支試管分別加入1000uLDNS試劑，再放入沸水浴中加熱5分鐘，然后取出冷卻。吸光度測定在540nm波長下，測定吸光度，記錄數據，計算酶活。五、實驗結果與分析)—XXU1V2xWxtX:反應液催化產生的葡萄糖總量（ug）V1:提取酶時加入的緩沖液體積（mL）V2:酶反應時加入的酶液體積（mL）W:樣品重量（g）T:反應時間（h）葡萄糖糖量（ug）020406080100X1X2（酸性）X3（堿性）A5400.16190.61551.21501.86542.48903.06001.50830.16630.4031校正后A54000.45361.05311.70352.32712.89811.50830.16630.4031根據標準曲線得待測液中葡萄糖量X1=1-5083+0-0711=53.18ug0.0297則待測液中蔗糖合成酶活性二一531業5 =8194-14（u°?°-1?人-1）0.2X0.3245X0.5酸性條件下：根據標準曲線得待測液中葡萄糖量X2=0-1663+0-0711=4-00ug0-0297X2待測液中酸性轉化酶活性二一400X5 =1232.67（^?°-1?人-1）0-1X0-3245X0-5堿性條件下：根據標準曲線得待測液中葡萄糖量X3=°-4031+0-0711=7-95ug0-0297X2待測液中堿性轉化酶活性二一795X5 =2449-92（^?°-1?人-1）0-1X0-3245X0-5從計算結果可知，蔗糖合成酶活性最高，其次為堿性轉化酶和酸性轉化酶影響本次實驗結果準確性的因素主要有以下幾點：1.研磨不充分和研磨液未完全轉移進離心管中都會使得最后計算所得到的酶活性偏低由于人為因素，反應時間并非精確的30min整個實驗并非一人完成，因個人習慣不同也會造成實驗過程中存在誤差待測液較少。將比色皿潤洗后，剩下的待測