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文檔簡介
實驗十一
動物細胞融合技術【實驗目的】
掌握動物細胞融合的原理和方法。【實驗原理】
通過培養和誘導,兩個或多個細胞合并成一個雙核或多核細胞的過程稱為細胞融合(cellfusion)或細胞雜交(cellhybridization)。基因型相同的細胞融合成的雜交細胞稱為同核體;來自不同基因型的雜交細胞則稱為異核體。誘導細胞融合的方法有三種:生物方法(病毒)、化學方法(聚乙二醇PEG)、物理方法(電激和激光)。化學和物理方法可造成膜脂分子排列的改變,去掉作用因素之后,在恢復過程中便可誘導相接觸的細胞發生融合。
細胞融合
【實驗材料】:
雄雞紅血球【實驗步驟】
1、取1-2ml雞血紅細胞懸液于離心管中,再加入4ml0.85%生理鹽水溶液,1500rpm離心5min,棄上清,沉淀血細胞。然后加入4mlGKN溶液懸浮雞血細胞洗滌一次。再加入5mlHanks溶液離心洗滌一次,棄上清,用手指輕彈離心管底部,使沉淀的血細胞團塊松散。。
2、37℃水浴中向離心管中加入1ml50%
PEG6000溶液(GKN溶液配制)37℃預熱),邊加邊搖,1min內加完,然后37℃水浴靜置2min3、加入5mlHanks液終止PEG作用。4、離心(2000rpm,10min),棄上清,沉淀中再加入1mlHanks液,制成懸浮液,滴片。5、染色:加等體積的詹納斯綠B溶液,染色3min,蓋上蓋玻片,吸去多余溶液,高倍鏡下觀察。
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