豬鏈球菌滅活疫苗豬鏈球菌2型+馬鏈球菌獸疫亞種免疫效果檢驗(yàn)

豬鏈霉菌是由多種豬源鏈引起的。臨床表現(xiàn)為急性呼吸困難、關(guān)節(jié)炎、腦炎和急性死亡。這是豬最重要的疾病之一。近年來(lái)豬鏈球菌病在我國(guó)流行日趨嚴(yán)重,病原亦發(fā)生變化,其中最為重要的是豬鏈球菌2型呈世界范圍分布,是一種人獸共患病原菌,該病曾先后在江蘇南通、四川資陽(yáng)等地引發(fā)公共衛(wèi)生事件,造成極大的社會(huì)恐慌,嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展和人民的身體健康。摸清該病的流行規(guī)律,闡明致病機(jī)理,建立快速檢測(cè)方法,研制高效安全、針對(duì)性強(qiáng)的豬鏈球菌疫苗,解決生產(chǎn)實(shí)際問(wèn)題已成為迫切需要。由上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)組成的課題組自1998年以來(lái),對(duì)我國(guó)豬鏈球菌病進(jìn)行了系統(tǒng)地研究,并研制了豬鏈球菌滅活苗(豬鏈球菌2型+馬鏈球菌獸疫亞種)。本試驗(yàn)的目的是為了檢驗(yàn)豬鏈球菌滅活苗實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品的免疫效果,為疫苗的大批生產(chǎn)及推廣應(yīng)用提供參考數(shù)據(jù)。1材料和方法1.1接種兩種疫苗試驗(yàn)用健康母豬和21日齡健康仔豬由上海市兩個(gè)種豬場(chǎng)提供,兩個(gè)豬場(chǎng)未接種鏈球菌疫苗,近兩年也無(wú)鏈球菌病發(fā)生。15g～20gBalb/c小鼠購(gòu)自上海復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院。1.2菌獸疫種種5批實(shí)驗(yàn)室研制生產(chǎn)豬鏈球菌滅活疫苗(豬鏈球菌2型+馬鏈球菌獸疫亞種)5批,批號(hào)分別為20000125、20001214、20010226、20010312、20010327。經(jīng)純檢、細(xì)菌計(jì)數(shù)及無(wú)菌檢查合格后用于試驗(yàn)。1.3優(yōu)化中國(guó)獸藥屬c群C74-63馬鏈球菌獸疫亞種(Streptococcusequisubsp.zooepidemicus,SeZ),屬蘭氏分群C群,購(gòu)自中國(guó)獸藥監(jiān)察所;HA9801豬鏈球菌2型(Streptococcussuistype2,SS2)分離株,1998年8月從江蘇省急性敗血癥死亡豬的實(shí)質(zhì)器官中分離,中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所鑒定,上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心保存。1.4免疫狀況試驗(yàn)1.4.1攻毒方法及攻毒案例每批疫苗皮下注射15g～20gBalb/c小鼠20只,每只0.2mL,15d后加強(qiáng)免疫1次,每次0.2mL,間隔14d后,與對(duì)照小鼠10只,每組再分成2組(每組5只),分別用HA9801和C74-63攻毒,攻毒方法:腹腔注射2LD50(5.5×102cfu)劑量的C74-63強(qiáng)毒菌液,腹腔注射2LD50(1.2×108cfu)劑量的HA9801強(qiáng)毒菌液。觀察10d。1.4.2人工乳的選擇每批疫苗取妊娠母豬2頭,分別于產(chǎn)前35d～40d和15d～20d各肌肉注射1次,每頭3mL。產(chǎn)仔后隨機(jī)選出4頭～5頭仔豬人工哺乳作為對(duì)照。其余仔豬在吮食免疫母豬乳,仔豬3日齡時(shí)連同對(duì)照組,攻擊2LD50(4×107cfu)劑量的C74-63強(qiáng)毒菌液、2LD50(1.5×109cfu)劑量的HA9801強(qiáng)毒菌液,觀察10d。1.4.3免疫抑制試驗(yàn)20000125批疫苗肌肉注射21日齡健康豬20頭,其他批次疫苗各接種10頭,每頭2mL,20d后加強(qiáng)免疫1次,免疫劑量及免疫途徑與首免一樣。間隔15d后,連同對(duì)照組,攻擊2LD50(4×107cfu)劑量的C74-63強(qiáng)毒菌液、2LD50(1.5×109cfu)劑量的HA9801強(qiáng)毒菌液,觀察10d。2結(jié)果2.1豬鏈球菌2型ha98010株和馬球形獸疫接種后的毒力Balb/c小鼠經(jīng)5批疫苗20000125、20001214、20010312、20010226、20010327免疫接種試驗(yàn)后,用豬鏈球菌2型HA9801株和馬鏈球菌獸疫亞種C74-63株攻毒,疫苗平均保護(hù)率分別為90%(45/50)、74%(37/50)對(duì)照組全部死亡或發(fā)病(表1)。2.2批疫苗的保護(hù)率哺乳仔豬經(jīng)豬鏈球菌2型HA9801株和馬鏈球菌獸疫亞種C74-63株攻毒后觀察10d,5批疫苗20000125、20001214、20010312、20010226、20010327的平均保護(hù)率分別為88.09%(37/42)、79.06%(34/43),對(duì)照組全部死亡(表2)。(續(xù)表)2.3豬鏈球菌2型ha98010株與馬球形獸疫株的毒力經(jīng)5批疫苗20000125、20001214、20010312、20010226、20010327免疫接種試驗(yàn)后,用豬鏈球菌2型HA9801株和馬鏈球菌獸疫亞種C74-63株攻毒,疫苗對(duì)保育豬的平均保護(hù)率分別為90%(27/30)、76.7%(23/30),對(duì)照組全部死亡(表3)。3豬鏈球菌病滅活苗的免疫保護(hù)作用R群豬鏈球菌2型與C群馬鏈球菌獸疫亞種是當(dāng)前我國(guó)豬鏈球菌病的兩種主要病原。隨著養(yǎng)豬業(yè)規(guī)模化程度的不斷提高,同時(shí)由于近年來(lái)豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒2型感染等疫病的發(fā)生與流行,使豬鏈球菌病呈明顯的上升趨勢(shì),嚴(yán)重威脅養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。國(guó)內(nèi)已有商品化的C群馬鏈球菌獸疫亞種弱毒疫苗,而豬鏈球菌病滅活苗(豬鏈球菌2型+馬鏈球菌獸疫亞種)目前尚無(wú)產(chǎn)品面市。本研究利用從江蘇病豬體內(nèi)分離的R群豬鏈球菌2型強(qiáng)毒株HA9801與C群馬鏈球菌獸疫亞種強(qiáng)毒株ATCC35246,共制備了5批豬鏈球菌病滅活苗(豬鏈球菌2型+馬鏈球菌獸疫亞種)。滅活疫苗二次免疫后用豬鏈球菌2型及其馬鏈球菌獸疫亞種強(qiáng)毒攻擊,對(duì)哺乳仔豬的保護(hù)率分別達(dá)到88.09%(37/42,SS2)和79.06%(34/43,SeZ),對(duì)保育豬的保護(hù)率分別達(dá)到90%(27/30,SS2)和76.7%(23/30,SeZ),表明滅活疫苗對(duì)哺乳仔豬、保育豬均有良好的免疫保護(hù)作