茯苓多糖的制備

椰子是多孔菌科的一種杏仁菌。從那里提取的椰子糖具有腫瘤、改善人體免疫功能等作用。11.1化合物15-3-甲基苯基-1,3,4-三酮3.4-甲基甲基5,5,5-四甲基-5-羥基甲基5-羥基甲基5-羥基甲基5-1,5,5,5,5,5-三酮3-甲基5,5,5-氫-1,5-三酮3-甲基5,5,5,5-四甲基-5-羥基甲基5-,5-甲基-5-,5-甲基-5,5,5,5-甲基-5-羥基苯基5,5,5,5,5,5,5-甲基-5--5-羥基苯基5-甲基-5,5-甲基-5-羥基苯基5-甲基-5-羥基甲基5-羥基甲基5-甲基-5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5-四甲基-5--5--5--5--5--5--5--5--5--5--5--5--5---5---5---5---5---5---5---5---5---5---5----5-----5-------------------------------------------------------------------------------------------------------------茯苓,NaOH溶液(0.5mol/L),乙醇溶液(95%),醋酸溶液(10%),丙酮(A.R),乙醚(A.R),二甲基亞砜(DMSO)(A.R),正丁醇:無水乙醇:水(3.5:3:3),茚三酮試劑,氨制硝酸銀試劑,α-萘酚,濃H1.2微量移液器2-0l托盤天平,分析天平,吸濾瓶,布氏漏斗,真空減壓機,磁力攪拌器,干燥箱,四氟乙烯轉(zhuǎn)子,微型高速粉碎機,冰箱,可調(diào)式微量移液器(0-1000μl)。22.1茯苓多糖的提取將茯苓用粉碎機粉碎至能通過60目篩。取茯苓粉末共15g,溶于3℃的0.5mol/LNaOH溶液3000ml中。加入四氟乙烯轉(zhuǎn)子在磁力攪拌器中攪拌,至粉末全部溶解,此時溶液呈粘稠狀態(tài)。置于冰箱中4℃冷藏、過夜。次日抽濾,棄去殘渣保留液體。濾液用10%的醋酸溶液中和,直至用廣泛pH試紙測其pH6-7之間。再加入等量95%乙醇,于3℃放置過夜。次日抽濾,獲取沉淀。接著用流水透析2d后,依次用900ml蒸餾水洗滌,300ml無水乙醇、300ml丙酮、200ml乙醚洗滌。之后,放入干燥器中,減壓抽干。置干燥箱中58℃干燥30min,即得茯苓多糖粗品。呈淡黃色細顆粒狀結(jié)晶,重10.7g。2.2茯苓精制品的制備稱取以上茯苓多糖粗品5g,溶于500ml二甲基亞砜(DMSO)中,在室溫下用磁力攪拌器攪拌15h后,加入500ml蒸餾水,繼續(xù)攪拌20min,之后,放置2h,抽濾。沉淀用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌,置干燥箱中60℃以下,干燥30min,即可得茯苓精制品,稱量質(zhì)量為4.44g。計算得率:10.7/15×4.44/5×100%=63.344%2.3制備樣品液配制樣品液:精稱多糖精制品80.2mg,溶于100ml的蒸餾水,制成樣品液Ⅰ。精稱多糖粗品80.2mg,溶于100ml的蒸餾水,充分溶解制成樣品液Ⅱ。2.4多酚識別2.4.1樣品溶液b1ml于一干燥潔凈試管中,加入α-萘酚試液數(shù)滴,振搖混勻,沿試管壁加入濃硫酸。2種溶液的交界面顯紫紅色。2.4.2蛋白或肽類分布的檢測用毛細管吸取樣品液Ⅰ點于2張層析紙上;同樣用毛細管吸取樣品液Ⅱ點于2張層析紙上,作好標記。用正丁醇:無水乙醇:水(3.5:3:3)展開劑,展開約2h后取出。點樣品Ⅰ的1份以氨制硝酸銀試劑噴霧,于105℃烘烤5-10min,顯示褐色斑示多糖位置。另1份以茚三酮試劑噴霧,于110℃烘烤5min,顯紫色斑應是蛋白(或肽類)位置,但并沒有出現(xiàn)。點樣品液Ⅱ的2張層析紙同樣處理。結(jié)果1份顯示黃色斑,另1份顯示紫色斑。3去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)經(jīng)定性檢查結(jié)果表明,本法能有效的除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì),所以樣品液Ⅰ不顯示紫色斑。4dmso-堿提取多糖茯苓多糖有多種提取方法,有以水為溶媒的冷浸、熱浸、水煮等方法,還有以堿液為溶媒的濃堿提取法及稀堿提取法。這些方法提取的多糖收率低,并含有水溶性的雜蛋白等物質(zhì)。用濃堿(2mol/LNaOH)浸提,雖然收率比水提法高,但因其溶液稠度較大,難以過濾,