厚樸枝中厚樸酚及和厚樸酚的提取

厚樸是木蘭科植物的干燥根、枝和莖的皮膚。它具有抗癌、腫瘤、蠕蟲、抗菌和潰瘍等功能。1材料和方法1.1厚植物的提取厚樸枝產自貴州,45℃干燥6h,用粉碎機粉碎,過12目篩,得干燥厚樸枝粉備用。厚樸酚及和厚樸酚標準對照品中國藥品檢測所;甲醇為色譜純;水為超純水、二次蒸餾水;NaOH、HCl、乙醇均為分析純。1.2實驗儀器和儀器LC-2010AHT型高效液相色譜儀日本島津公司;NJL07-3型實驗專用微波爐山東科弘微波能有限公司;華安HA121250201型超臨界流體萃取裝置江蘇南通化安超臨界流體萃取有限公司;KQ-250E超聲波清洗器昆山市超聲儀器有限公司;粉碎機;12目過濾篩;電子天平。1.3方法1.3.1流動相、柱溫度ShimdzuVP-ODSC18色譜柱(150mm×4.6mm,5μm);流動相:甲醇-水(75:25,V/V);流速:1.0mL/min;柱溫:25℃;進樣量:10μL;檢測波長:294nm。1.3.2標準品溶液的線性回歸精密吸取10μL已用0.45μm微孔濾膜過濾、質量濃度分別為0.012、0.024、0.048、0.096、0.192mg/mL的標準品溶液于高效液相色譜儀,將測得的峰面積值Y與質量濃度X(mg/mL)進行線性回歸。1.3.3提取技術研究1.3.3.過干燥部門對kh值的提取純水加熱回流提取:稱取干燥厚樸枝粉10.250g,加蒸餾水200mL,加熱溫度在(90±1)℃條件下回流24h,過濾,濾液采用高效液相色譜進行檢測。堿水加熱回流提取:稱取過干燥厚樸枝粉10.250g置于錐形瓶中,首先加入150mL0.5%的NaOH溶液,在94℃水浴中回流60min,過濾,濾渣再用100mL0.5%的NaOH溶液回流60min,過濾,合并濾液,加入6mol/LHCl溶液調節pH值至7,提取液采用高效液相色譜進行檢測。乙醇加熱回流提取:稱取10.250g干燥厚樸枝粉4份,分別置加熱提取器中,取體積分數分別為30%、50%、70%、100%的乙醇溶液100mL,在溫度為(90±1)℃條件下加熱回流24h,過濾,量取體積,濾液采用液相色譜進行檢測。1.3.3.超聲提取方法稱取過12目篩干燥厚樸枝粉10.250g,以無水乙醇為提取劑,按料液比1:40(mg/mL)、超聲強度中等(功率150W)、溫度為25℃,分別在0.5、1、1.5、2、2.5、3h各取出10mL提取液采用高效液相色譜進行檢測,每次取出提取液后再補充10mL無水乙醇回去繼續超聲波提取。1.3.3.3.微波提取以微波功率、乙醇體積分數、料液比和時間為探討因素,采用正交試驗L1.3.3.萃取裝置的選擇稱取干燥厚樸枝粉末100g裝入料筒,放進萃取釜,按工藝要求開啟萃取裝置,根據文獻[12],調節萃取溫度35℃、萃取壓力22MPa,CO2結果與分析2.1標準曲線的繪制精密吸取10μL質量濃度分別為0.012、0.024、0.048、0.096、0.192mg/mL標準溶液于高效液相色譜儀,將測得的峰面積值Y與質量濃度X(mg/mL)進行線性回歸。結果表明厚樸酚與和厚樸酚在質量濃度為0.012~0.192mg/mL范圍內與峰面積具有良好的線性關系,厚樸酚的回歸方程為:Y=102.2乙醇體積分數和提取時間的確定首先,為了探討加熱回流提取厚樸枝中厚樸酚及和厚樸酚的效果,本實驗比較了純水提取、堿水提取和醇提取的得率。結果表明當采用純水提取時,厚樸酚得率為0.031mg/g,和厚樸酚得率為0.037mg/g;而用0.5%NaOH溶液的提取得率高于水提取,分別為厚樸酚得率1.128mg/g,和厚樸酚得率0.119mg/g。這是因為厚樸酚與和厚樸酚難溶于純水,而溶于稀堿溶液得到鈉鹽,故提取得率增大。但是相對于純水回流加熱提取效果而言,乙醇溶液提取厚樸酚與和厚樸酚的得率明顯提高。為了確定最佳乙醇溶液加熱回流提取厚樸酚工藝,本實驗探討了乙醇體積分數和提取時間的影響。由圖2可知,當乙醇體積分數從30%增加到70%時,厚樸酚、和厚樸酚以及總酚的提取得率也隨之增加;70%乙醇提取厚樸酚與和厚樸酚得率分別為4.865mg/g和1.538mg/g;當乙醇體積分數大于70%,厚樸酚、和厚樸酚以及總酚的提取得率反而下降,因此可以確定加熱回流提取厚樸酚類最佳的乙醇體積分數為70%。這是因為厚樸酚與和厚樸酚易溶于有機溶劑,故隨著乙醇體積分數的增加其得率明顯增加,同時厚樸酚類具有脂溶性和揮發性等特性,在提取過程中當乙醇體積分數在70%以上時,有效成分極易揮發而使提取得率降低。采用70%的乙醇溶液加熱回流提取厚樸酚及和厚樸酚,當提取時間為3h時,厚樸酚與和厚樸酚的得率分別為4.203、1.530mg/g。在24h內,隨著提取時間增加,得率增加。當提取時間增加到24h,厚樸酚與和厚樸酚的得率分別為5.929、1.878mg/g;當提取時間超過24h,得率增加很小。所以,在加熱回流提取實驗中,選用回流時間為24h。2.3超聲輔助提取由圖3可知,隨著超聲波輔助提取時間增加,厚樸酚、和厚樸酚及總酚得率隨之增加。在中等強度的超聲波輔助提取1h后,增加超聲提取時間,提取得率提高不大。因此,超聲波提取最佳工藝條件:在中等強度的超聲波場中,常溫下浸取1h,此時厚樸酚、和厚樸酚和總酚單次提取得率分別為6.154、1.274、7.428mg/g。2.4微波輔助萃取由表2可以得出,各因素對厚樸酚提取的重要性為B>A>C>D,最優方案為B2.5萃取溫度的影響干燥厚樸枝粉未100g,CO從表3可以發現,萃取壓力在20~22MPa時,厚樸酚及和厚樸酚的得率影響較小。在超臨界溫