化妝品微生物檢驗1ppt課件化妝品因含有水分，油脂，蛋白質，多元醇等，為微生物的生長創造了良好的條件，造成產品變質。為了抑制微生物的繁殖和消費者使用過程中的產品污染，往往在化妝品中加入防腐劑(尼珀爾金甲脂、乙酯、丙脂及苯氧乙醇等)，但不能過量。因此，化妝品一方面為微生物的生長繁殖提供了良好的環境；另一方面由于防腐劑的應用又可抑制微生物的生長。為了避免測試結果可能出現假陰性（實際應該生長或是污染了，由于防腐劑的存在而導致結果不生長或是結果偏小），需要添加中和劑。2ppt課件化妝品中常用的中和劑樣品中：國際方法：尼泊金酯類防腐劑的中和劑：吐溫80（30g/L）和卵磷脂(3g/L)+普通肉湯。化妝品安全技術規范：培養基成分中直接有卵磷脂（1g）吐溫80（7g）。（稀釋法也能同步起到中和的效果）生產用水中的余氯：每125ml水樣中加入0.1mg硫代硫酸鈉。（注意添加方式和使用范圍）3ppt課件化妝品衛生標準4ppt課件微生物檢驗方法（2015版化妝品安全技術規范）GB/T7918.1-1987化妝品微生物標準檢驗方法總則菌落總數（2015版化妝品安全技術規范）GB/T7918.2-1987化妝品微生物標準檢驗方法耐熱大腸菌群（2015版化妝品安全技術規范）糞大腸菌群：GB/T7918.3-1987化妝品微生物標準檢驗方法銅綠假單胞菌（2015版化妝品安全技術規范）GB/T7918.4-1987化妝品微生物標準檢驗方法綠膿桿菌金黃色葡萄球菌（2015版化妝品安全技術規范）GB/T7918.5-1987化妝品微生物標準檢驗方法金黃色葡萄球菌霉菌和酵母菌：（2015版化妝品安全技術規范）

5ppt課件方法比較側重點2007版化妝品衛生規范2015版化妝品安全技術規范儀器和設備規格沒有規定有：天平/培養箱樣品采集全部操作應在無菌室內進行，或在相應條件下，按無菌操作規定進行。全部操作應在符合生物安全要求的實驗室中進行如檢出糞大腸菌群或其它致病菌，自報告發出之日起該菌種及被檢樣品應保存一個月。直接刪除如為5mL則加到45mL滅菌生理鹽水，混勻后，制成1：10檢液。直接刪除2007版化妝品衛生規范與2015版化妝品安全技術規范對比：總則6ppt課件7ppt課件總則重點1.具有代表性。2.不少于2個包裝單位的取樣中共取10g或10mL。3.供檢樣品，應嚴格保持原有的包裝狀態。容器不應有破裂，在檢驗前不得打開，防止樣品被污染。4.應置于室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。4.宜先取出部分樣品做微生物檢驗。5.嚴格上微生物無復測一說。（可能的因素多），因此對微生物檢驗人員要求嚴格。6.生物安全開始重視。8ppt課件詳細操作步驟側重點2007版化妝品衛生規范2015版化妝品安全技術規范菌落總數定義嗜中溫的需氧性菌落總數需氧性和兼性厭氧菌落總數TTC121℃/20min高壓滅菌溶解后過濾除菌，或115℃高壓滅菌20minWHO更改糞大腸菌群（Fecalcoliforms）耐熱大腸菌群Thermotolerantcoliformbacteria大腸培養溫度和培養時間置44℃±0.5℃培養箱中培養24h～48h置44.5℃±0.5℃培養箱中培養24h，如既不產酸也不產氣，繼續培養至48h霉菌和酵母菌置28℃±2℃培養72h置28℃±2℃培養5d（讀數時間靈活）9ppt課件詳細操作步驟重點1.所配制培養基可冷藏和冷卻備用為分步驟檢測提供基礎。2.菌落總數和霉菌酵母菌總數a.單位CFU/g或CFU/ml。b.二位有效數字，在二位有效數字后面的數值，應以四舍五入法計算。c.“不可計”注明稀釋度。ColonyFormingUnitsd.特有的形態和培養特性（霉菌和酵母菌）。10ppt課件樣品的制備液體樣品膏、霜、乳劑半固體狀樣品固體樣品樣品的制備注意事項無菌容器、材料及操作樣品的均一性玻璃珠磁力攪拌均質器11ppt課件樣品的檢驗及保管

及時檢驗樣品應放在室溫陰涼干燥處樣品先進行微生物檢驗(原料)，再做其他指標須防止微生物的再污染和擴散測試方法：12ppt課件菌落總數檢驗菌落總數（Aerobicbacterialcount）：化妝品檢樣經過處理，在一定條件下培養后（如培養基成分、培養溫度、培養時間、pH值、需氧性質等），1g（1mL）檢樣中所含菌落的總數。所得結果只包括一群本方法規定的條件下生長的嗜中溫的需氧性和兼性厭氧菌落總數。測定菌落總數便于判明樣品被細菌污染的程度，是對樣品進行衛生學總評價的綜合依據。13ppt課件測試流程48小時出結果（30-300）：數據處理混合平板的制備細菌的培養檢查結果、觀察與計數供試液的制備書寫檢驗記錄單14ppt課件TTC亦不可多加會抑制菌落生長為便于區別化妝品中的顆粒與菌落，可在每100mL卵磷脂吐溫80營養瓊脂中加入1mL

0.5％的TTC溶液，如有細菌存在，培養后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無變化。15ppt課件接種陽性菌計算回收率推薦了解：人員培訓能力掌握的檢驗重要指標。有條件可做視具體樣品測試結果。在膏霜類化妝品中,微生物都是吸附或附著于顆粒狀的原料中,檢測時不易洗脫下來,因此,需要驗證檢測方法的有效性。16ppt課件耐熱大腸菌群未檢出2天，檢出3-4天耐熱大腸菌群Thermotolerantcoliformbacteria系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在44.5℃培養24h—48h能發酵乳糖產酸并產氣。該菌主要來自人和溫血動物糞便，可作為糞便污染指標來評價化妝品的衛生質量,推斷化妝品中有否污染腸道致病菌的可能。17ppt課件產酸：黃色產氣：氣泡產酸產氣書寫檢驗記錄單不產酸不產氣增菌培養供試液的制備配培養基和稀釋液檢查結果判斷44.5±0.5℃24-48h分離培養蛋白胨水培養最終結果判斷44.5±0.5℃24±2h靛基質特征菌落36±1℃18~24h雙倍膽鹽乳糖EMB瓊脂液面玫瑰紅色紫黑色★糞大腸菌群檢查流程圖鏡檢18ppt課件結果報告根據發酵乳糖產酸產氣，平板上有典型菌落，并經證實為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質試驗陽性，則可報告被檢樣品中檢出耐熱大腸菌群。19ppt課件銅綠假單胞菌未檢出2天，檢出4天銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃±1℃條件下能生長。該菌對人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等。在自然界中分布甚廣，空氣、水、土壤20ppt課件最終結果判斷增菌培養供試液的制備書寫檢驗記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養基和稀釋液革蘭染色、鏡檢→氧化酶試驗綠膿菌素試驗生化試驗硝酸鹽還原試驗

42℃生長試驗明膠液化試驗★銅綠假單胞菌檢查流程圖SCDLP培養基十六烷三甲基溴化銨瓊脂36±1℃18~24h36±1℃18~24h特征菌落灰白色、扁平、周圍有水溶性藍綠色素鏡檢21ppt課件十六烷三甲基溴化銨平板SCDLP培養基黃綠色菌膜灰白色濕潤氧化酶試驗粉紅/紫紅色22ppt課件綠膿菌素試驗鹽酸層呈粉紫色氯仿層呈藍綠色硝酸鹽還原產氣試驗N2明膠液化試驗明膠培養基（高層）明膠液化23ppt課件結果報告被檢樣品經增菌分離培養后，經證實為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗皆為陽性者，即可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌；如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產氣和42℃生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。24ppt課件金黃色葡萄球菌未檢出2天，檢出3天金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。該菌是葡萄球菌中對人類致病力最強的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴重時可導致敗血癥。25ppt課件革蘭染色、鏡檢→生化試驗:血漿凝固酶試驗甘露醇發酵試驗最終結果判斷增菌培養供試品的處理書寫檢驗記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養基和稀釋液36±1℃36±1℃SCDLP培養基或7.5%NaCl肉湯24±2hBairdParker’s或血瓊脂24~48h特征菌落★金黃色葡萄球菌檢查流程圖鏡檢耐鹽分26ppt課件BairdParker’s平板灰/黑色血漿凝固酶試驗血漿凝塊液態血漿甘露醇高鹽瓊脂27ppt課件結果報告凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長，經染色鏡檢，證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，并能發酵甘露醇產酸，血漿凝固酶試驗陽性者，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。28ppt課件霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌數測定（Determinationofmoldsandyeastcount）化妝品檢樣在一定條件下培養后，1g或1mL化妝品中所污染的活的霉菌和酵母菌數量，藉以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般衛生狀況。本方法根據霉菌和酵母菌特有的形態和培養特性，在虎紅培養基上，置28℃±2℃培養5d，計算所生長的霉菌和酵母菌數。（5-50）29ppt課件革蘭氏染色30ppt課件檢驗結果正確的保證設備方面：恒溫培養設備高壓滅菌器（驗證）超凈工作臺（生物安全柜）均質器(旋渦混合器)天平（0.1g）顯微鏡（可要可不要無硬性要求）31ppt課件壓力滅菌器的檢定（強檢）出廠合格證：只是表示該儀器設備符合出廠標準。安全需要強檢（安全閥和壓力表）。至于溫度性能緊急時可以用廠家校準證書替代。問題1：量值得傳遞過程？結論？量值溯源過程？32ppt課件常規潔凈工作臺？33ppt課件試劑要求：無菌容器（？）及溶液；試劑充足；空間充分（10平方米2人操作）；

培養基的制備（有效期的確認）與質量控制（促生長與回收率的驗證）推薦項；34ppt課件目前大部分微生物實驗室35ppt課件人員操作方面：無菌操作，避免污染；一定專業技術或工作經驗（招聘與外部審核時）相互協作；測試結果的證明。36ppt課件日常維護：設備的計量與保證；超凈臺及時清潔與殺菌（操作前后半小時）；檢驗后材料的及時處理；環境衛生（沉降菌的檢測每周）。37ppt課件油性樣品如何處理稀釋液生理鹽水-極性溶劑、液體石蠟-非極性溶劑、吐溫80-非離子型表面活性劑，分子一端是親水基團，一端是親油基團，常用作增溶劑和油/水乳化劑。決定了加入的順序。問題238ppt課件微生物許可檢驗項目問題3檢驗項目非特殊用途化妝品特殊用途化妝品育發類染發類燙發類脫毛類美乳類健美類除臭類祛斑類防曬類菌落總數○○

○○

○○耐熱大腸菌群○○

○○

○○金黃色葡萄球菌○○

○○

○○銅綠假單胞菌○○

○○

○○霉菌和酵母菌○○

○○

○○39ppt課件注：①指甲油