PAGE6-生物技術有限公司技術部標準操作程序StandardOperatingProcedures版本：V1：A0執行日期：2007-05-02共6頁標準操作程序項目：總膽固醇方法：酶法文件編號XX-SH-SOP-07-09編寫者日期審核者日期批準者日期頒發部門或個人接收部門或個人院長辦公司保管者院檔案室保管者醫務科保管者檢驗科主任臨床化學檢驗室發布日期：2007年4月2日實施日期：2007年4月3日前言為使臨床檢驗操作規范化，指導檢驗人員嚴格按規程進行正確的常規操作，保證檢驗質量，特制定本操作規程。本規程的編寫遵循了ISO15189《醫學實驗室——關于質量和能力的特殊要求》及WS/T227-2002《

臨床檢驗操作規程編寫要求》的有關規定并結合產品實際情況制訂，作為本產品的標準操作程序。本規程從2007年5月2日起實施，每2年復審1次。本規程由XX生物技術有限公司編制。本規程起草單位：生物技術有限公司技術部。本規程主要起草人：XXXXXXX、XXXXXXXXXX、XXX。本規程首次起草。XX生物技術有限公司技術部2007年4月2日目

錄1檢驗申請…………………32標本采集與處理…………………………33試劑及成份…………………………44方法原理……….…………45儀器……….……………….…………46校準液及校準模式………………………47質控品與室內質控規則…………………48標本檢測步驟………….…………………59結果計算…………………510操作性能………………511試劑使用的注意事項……………...……512參考范圍及醫學決定水平………………………..……513檢驗結果的報告及范圍………………………..………514臨床意義……….….……615結果審核分析以及相關項目的聯系..……………………..……..……616威脅生命的“緊急值”及報告規定.…………………..…617有關引用程序與文件………………..….618參考文獻附錄AXXX型生化分析儀參數總膽固醇測定標準操作規程1.檢驗申請單獨檢驗項目申請：血清總膽固醇（TotalCholesterol；,縮寫TCH）測定；組合項目申請：血脂測定。臨床醫生根據需要提出檢驗申請。2.標本采集與處理2.1受檢者的準備：采血前2周保持平時的飲食習慣，3d內避免高脂飲食，24h內不飲酒，空腹12h后采集標本。體檢對象抽血前應有兩周的正常狀況記錄。注意有無應用影響測試項目的藥物。此外，對于體檢者，采血的季節都應做相關記錄，因為樣本中各項目的含量有季節性變動，為了前后比較應在每年同一季節檢驗。應囑體檢對象在抽血前24小時內不做劇烈運動。2.2標本采集2.2.1除非是臥床的病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內外的分布，會影響測試項目的濃度。在采血前至少應靜坐5分鐘，一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過1分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶，不抗凝，置普通試管中。或采用含分離膠的黃色蓋子SST真空采血管，如為急診標本，使用淺綠色蓋子PST試管。2.2.2檢驗申請單和血標本試管上統一且唯一的標識符。2.2.3標本采集后，在檢驗申請單上填寫標本采集時間，如為急診標本，加上急查標識。2.2.4標本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責標本的接收并記錄標本的狀態，對不合格標本予以拒收。2.2.5下列標本為不合格標本2.2.5.1標本量不足：少于0.3ml的全血標本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.2.5.2對反應吸光度有干擾的標本，包括嚴重溶血、黃疸和渾濁的標本。2.2.5.3對無法確認標本與申請單對應關系的。2.2.5.4其他如標識涂改、標本試管破裂等。2.3標本處理2.3.1接收標本在30min內將標本離心分離出血清。吸出血清/血漿。處理樣品時要將其當成生物污染品。2.3.2標本保存時間：室溫（15～25℃）下可穩定1d，普通冰箱中（2～8℃）穩定7d。-20℃可保存數月；-70℃至少保存半年；避免反復凍溶。為避免標本中水分揮發使血清濃縮，對保存時間超過1d的標本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.3.3已完成測試的標本保持完整的識別號，置2～8℃冰箱內保存7d。2.4標本的注意事項2.4.1不建議采集抗凝標本，如果必須使用血漿，推薦的抗凝劑是肝素。2.4.2妊娠后期各項血脂都會增高，應在產后或終止哺乳后3個月查血才能反映基本血脂水平。2.4.3采血前最好停用影響血脂的藥物（如調脂藥、避孕藥、某些降壓藥、激素等）數天或數周，否則應記錄用藥情況。2.4.4血清標本出現溶血、脂血、黃疸或抗壞血酸的干擾情況參見抗干擾能力。3.試劑及成份3.1試劑本科使用的總膽固醇檢測試劑盒，由浙江生物技術有限公司生產,產品貨號為:XXX,試劑為液體試劑，其組份如下：主要組成份濃度Good′s緩沖液100mmol/L4-APP0.25mmol/L4-羥基苯甲酸鈉4mmol/L膽固醇酯酶300U/L膽固醇氧化酶500U/L過氧化物酶2500U/L3.2試劑盒保存及效期未啟封試劑盒在2～8℃保存，可儲存至失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉冰箱內穩定28d。開蓋后避免污染。當試劑變混濁，或者未開蓋的液體有沉淀時，表明試劑已變質，不能繼續使用。新打開試劑不宜與已用過的試劑混合在一起,否則易造成試劑穩定性下降。3.3試劑盒準備液態試劑型，即開即用，無特殊準備。4.方法原理4.1測定方法：終點比色法。4.2原理：膽固醇酯水解酶（CEH）將血清中的膽固醇酯（CE）水解成游離膽固醇（ChOL），膽固醇氧化酶（CHOD）將水解生成的膽固醇和血清中原來存在游離膽固醇氧化成Δ4-膽甾烯酮，并產生過氧化氫（H2O2），最后在過氧化物酶（POD）的作用下H2O2與4-氨基安替比林（4-AAP）和酚（三者合稱PAP）縮合，生成紅色醌亞胺色素（Trinder反應）。醌亞胺在500-550nm波長處有吸收峰，吸光度與標本中膽固醇呈正比。膽固醇酯酶膽固醇酯+H2O膽固醇+脂肪酸膽固醇氧化酶膽固醇+O2膽淄烯酮+H2O2過氧化物酶H2O2+4-氨基安替比林+苯酚醌亞胺+H2O5.儀器XXXX型號儀器。6.校準品與校準模式6.1校準品：使用復合校準血清或使用試劑盒提供的水標準液。6.2標準類型和校準點數目：線性模式，n個校準點。6.3校準周期：空白定標：每日需做試劑空白定標。全點定標：①更換試劑批號或出現質控漂移時；②儀器進行全面保養后；③儀器的重要零件更換后；均須需要全點定標。7.質控品與室內質控規則7.1質控品采用由XXX公司提供的兩個不同水平定值質控血清。7.2質控液重建方法：用蒸餾水溶解質控品，輕輕混勻，20min后即可使用。7.3質控品測定：在每一批標本中測定至少兩個水平質控血清各一次。7.4質控規則：采用Westgard多規則質控規則，由計算機程序進行檢索與判斷。7.5如出現失控情況，按室內質控標準操作程序采取各種有效的糾正措施及時糾正，并在確認重新回復到控制狀態后開始標本檢測。8.標本檢測步驟裝載試劑→進行校準→進行質控→輸入標本檢測項目→加載標本→標本測定→結果復核→報告。9.結果計算A測定A測定A標準血清中總膽固醇濃度（mmol/L）＝ΧCA標準式中：A測定——標本管吸光度；A標準——標準管吸光度；C——校準中液總膽固醇濃度（mmol/L）；10.操作性能10.1精密度：批內CV≤4％，批間相對極差CV≤6％。10.2準確度：測量結果在質控血清靶值±2SD范圍內。不同方法學試劑的質控結果之間會存在差異，使用時請確保質控選擇與試劑的方法學保持一致。10.3線性范圍：15mmol/L/L（血清與試劑用量之比為1:100時）10.4方法的有限性及干擾因素：10.4.1血清中多種非膽固醇甾醇液可參加與測定反應，但一般人血清中非膽固醇甾醇約占總膽固醇的1％，因此這種影響可以不計。10.4.2血紅蛋白高于2g/L時會引起正干擾；膽紅素＞170μmol/L時有明顯負干擾。抗壞血酸＞0.5g/L時會引起負干擾。高甘油三酯血癥（血清混濁）一般無明顯影響。11.試劑使用的注意事項11.1本試劑僅應用于體外診斷。11.2扔棄廢物應符合當地的法規要求。12.參考范圍及醫學決定水平合適膽固醇范圍：2.83~5.17mmol/L臨界高膽固醇范圍：5.17～6.45mmol/L高膽固醇范圍：>6.45mmol/L13.檢驗結果的報告及范圍13.1結果的報告13.1.1結果經審核確認準確無誤后發出報告。13.1.2報告單上標明結果的計量單位、參考區間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫學信息。13.1.3如收到標本的質量可能對測定結果有影響的也在報告單上指出。13.2報告范圍：血清與試劑用量之比為1:100時，測定上限為15mmol/L。超過此范圍的結果報告時必須附有證明該結果準確可靠的文字說明，并經上級主管技師審核后報告。14.臨床意義14.1總膽固醇除了可以作為高膽固醇血癥的診斷指標之外，不是其他任何疾病的診斷指標，對于動脈粥樣硬化和冠心病而言，TCH是一個明確的危險因子，與冠心病的發病率呈正相關，總膽固醇水平每增加1％，冠心病的危險性增加2％。14.2影響總膽固醇水平的因素有：①年齡與性別，TCH水平往往隨年齡上升，但到70歲或80歲后有所下降，中青年女性低于男性，50歲后女性高于男性；②長期的高膽固醇、高飽和脂肪酸和高熱量飲食可使總膽固醇增高；③遺傳因素；④其他，如缺少運動、腦力勞動、精神緊張等可能使總膽固醇升高。14.3高膽固醇血癥有原發性與繼發性兩類。原發的如家屬性高膽固醇血癥、低密度脂蛋白受體缺陷癥、家屬性apo-B缺陷癥、多源性（ploygenic）高膽固醇、混合性高脂蛋白血癥。繼發的見于腎病綜合征、甲狀腺機能減退、糖尿病、妊娠等。14.4低膽固醇血癥也有原發的與繼發的，前者如家屬性的無β或低β脂蛋白血癥；后者如甲亢、營養不良、慢性消耗性疾病等。嚴重肝病病人血清總膽固醇不一定很低，但由于血清卵磷脂膽固醇酰基轉移酶活力低下，血清膽固醇酯占總膽固醇的比例可低達50％以下。14.5不應憑一次血脂檢測結果作出血脂水平異常的診斷，有懷疑時應在兩月內進行再次或多次測定，且兩次測定至少要相隔一周；在判斷是否存在高脂血癥或決定防治措施之前，至少應有兩次血脂檢驗的記錄。15.結果審核分析以及相關項目的聯系15.1由資深專業人員負責檢驗結果的審核。15.2審核者認真審核每一個測定結果，對發出報告結果的可靠性負責，并在報告單的審核者處簽名。15.3相關項目：審核與血脂其他指標