生物化學實驗基本知識主編：齊錦生編委：孔德娟齊錦生許麗輝楊崇輝周秀霞羅湘衡君智煒張曉玲王芳實驗室要求一、實驗課的目的1、加深理解：加深對生物化學基本理論的理解。2、掌握技術：掌握生物化學的基本實驗方法和實驗技術（四大基本技術：離心、電泳、層析、比色）及分子生物學的一些基本技術和方法。3、培養能力：培養學生的思維能力、動手能力和表達能力。4、掌握精髓：科學的精髓是實事求是、敢于探索、善于創新的精神，要對實驗中出現的一切反?，F象進行討論，并大膽提出自己的看法。二、生化實驗室規則和要求1、預習：課前要預習實驗教材，了解實驗目的、原理，熟悉操作規程。2、秩序：自覺遵守紀律，維護教學秩序，不準遲到、早退，保持安靜，嚴禁談笑打鬧，聽從教師指導，未經教師同意，不得隨意離開實驗室。3、整潔：搞好實驗環境和儀器的衛生整潔，實驗臺面必須保持整潔，儀器藥品要井然有序，公用試劑用畢，應立即蓋嚴放回原處，勿使藥品試劑撒在實驗臺面和地面。實驗完畢，需將藥品試劑排列整齊，儀器要洗凈倒置放好。固體廢物，如濾紙、棉花、血塊不得倒入水池中，以免堵塞下水道；一般性廢液可倒入水池中沖走，但強酸強堿或有毒有害溶液必須用水高度稀釋后，方可倒入水池中，同時放水沖走，以免腐蝕水管。全體同學由班長安排輪流值日，負責當天實驗室衛生、安全和一些服務性工作，經教師驗收合格后，方可離開實驗室。4、節約：使用儀器、藥品、試劑及各種物品必須厲行節約，并節約水電。應特別注意保持藥品和試劑的純凈，嚴防混雜、亂用和污染。使用和洗滌儀器應小心仔細，防止損壞，貴重儀器使用前應熟悉使用方法，嚴格遵守操作規程，嚴禁隨意開動，發現故障后應立即報告指導教師，不要自己動手檢修，如有損壞按學校規定賠償。5、安全：注意人身和國家財產安全是至關重要的，要時刻注意防火、防水、防電、防危險品、防事故，以免發生意外。實驗室內嚴禁吸煙。使用乙醚、苯、乙醇、丙酮等易燃品時，不允許在電爐、酒精燈上直接加熱。實驗中須遠離火源，如有危險發生，應首先關掉電源；有機溶劑著火時，勿用水潑，以免擴大燃燒面積，可用沙土、滅火器具滅之。用火時必須嚴格做到：火著人在，人走火滅。用畢電器后及時切斷電源。加熱試劑、液體時，管口不要對人，要十分小心操作，避免灼傷人。實驗室內一切物品未經本室負責教師批準，嚴禁攜帶出室外，有毒物品尤其如此。借物必須辦理登記手續。謝生物娛化學底實驗失技術紫概述潔一、攀層寇析法和層析借是利聯用混哭合物訪各組菜分物巖理化抵學性然質（醫如：何溶解垂度、裂吸附姑能力鳥、電粘荷和址分子捉量等信）的漠差別稍，使雷各組碼分在等支持惜物上借集中叫分布岡在不興同區鍬域，贈借此表將各縱組分朱分離靜。真層析任系統飾分為抹兩個它相：鋒固定宇相和魚流動智相。怪由于保各組腳分受見固定曲相的屆阻力飼和受弱流動賴相的冬推力望影響尺不同熊，各嶺組分嘩移動組速度針也各恒異，龜從而各使各修組分凍得以蠅分離備。此坑法首棚先用脆于有中色物棋質的戀分離泄，故乳又稱司色層仗析法府。叉層析詠法是買近代丘生物皮化學因最常獵用的號分析椒法之職一，楚此法承可以襪分離米性質疼極為紀相似資、而記用一博般化勁學方瓶法難六以分團離的互各種傻化合州物，施如各未種氨蜻基酸度、核概苷酸今、糖濱、蛋謙白質手等?？顚游鼍址ㄓ袡M多種民類型慘，根止據所棚用兩闊組分跑不同可分為側以下林幾類寒：吸痕附層色析、并分配界層析齊、離填子交翠換層暴析、慣凝膠形層析板和親俘和層竊析等槍；根容據操爸作方犧式不室同分蝕為：叮柱層信析、跨薄層銳層析傍和紙孫層析痰等。筒（一掃）誼吸附怠層析瞇法：剩吸附爪層析息法（調ab現so飾rp見ti碰on知c荷hr研om向at絞og漢ra局ph泛y帆）是晨混合宰物隨斗流動闖相通膚過吸吩附劑霞時，障由于肢吸附脅劑對悲不同阿物質跟有不娃同的程吸附覽力而邁使混深合物宵分離師的方逢法。漿吸附悠層析犁根據行操作衫方式吵的不松同，辟分為程柱層勞析與恢薄層擠層析支兩種螞。院1、跳柱層暫析法圾：柱炎層析椅法是誕用一絕根玻掛璃管帖柱，魯下端萬鋪墊勻棉花戚或玻沾璃棉帝，管顧內加鳳吸附掏劑粉害末，欣用一孩種溶壯劑潤兔濕后勵，即邪成為持吸附征柱，鑄如圖患1中罵的（年1）廟。然但后在茂柱頂查部加悲入要螺分離續的樣果品溶謙液，覆如圖啦1中病的（醉2）浴。假軟如樣霉品內殺含兩授種成堤分A污和B貧，則板二者的被吸辭附在茅柱上框端，出形成似色圈成，如身圖1姨中的早（3干）。葛樣品害溶液閘全部涉溶入哲吸附巡柱中羅之后勵，接本著就耀加入謊合適幫的溶狹劑洗融脫，軟如圖附6-熱0-剖1中忠的（鼓4）響。A疑與B計就隨寬著溶壁劑的切向下籍流動肯而移霸動。孟最后竄分離深情況尖如圖吸1中算的（寸5）浴所示剃。宜圖扶6-餅0-裂1置二元孔混合瞇物的杜柱層賽析示母意圖圈在洗詢脫過稍程中唉，管由內連汗續發狡生溶略解、畜吸附影、再票溶解蓬、再螞吸附堪的現彎象。工例如鞏，被益吸附臭后的司A粒蚊子被襪溶解詞（解士吸作舊用）掘隨溶鍵劑下釀移，貫但遇抹到新它的吸碼附劑跑，又物將A慌粒子情吸附宣，隨哄后，忽新溶醬劑又睡使A苗粒子煤溶解提下移較。由朽于溶旋劑與尿吸附沙劑對購A與垃B的逼溶解與力與梁吸附績力不屋完全合相同些，A舊與B冒移動旦的速受率也什不同宮，經鴿一定良時間穗，如扮此反巧復地喂溶解牧與吸挪附，駝而形愛成兩鵲個環帖帶，貢每一牽環帶賢是一遷種純華物質箱。如忌A與星B有墓顏色糞可看脊到色廚層；核如樣慎品無晝色，纏可用裳其它猾方法姿使之貓顯色夢，為召進一求步鑒增定，悶可將滔吸附你柱從栗管中竄頂出并來，值用刀剖將各洽色層妻切開榮，然悠后分伯別洗蠢脫，層現在曉多采皮用溶康劑洗潤脫法墨，即時連續狂加入絲溶劑撥，連兔續分戒段收狼集洗勻脫劑岔，直飼到各唱成分諒順序米全部秩從柱丟中洗研出為駱止。熟最常黎用的價吸附運劑是霉硅膠遣和氧軍化鋁哄。硅罷膠的桶吸附淚能力領和含弱水量帆關系羞極大滴，硅像膠吸左水后極，吸恰附能到力下渠降，龜常用騎于分獵離非杜極性削的和烈極性風不強風的有誠機物垂，如疑甘油千脂、域磷脂賓、膽聰固醇備等。柳2、存薄層騰層析堂法：村薄層擦層析翁法是忙吸附碎劑在辜玻璃經板上騾均勻剛地鋪野成薄奉層，菌把要酸分析搶的樣返品點森加到涌薄層梁上，伯然后諸用適舉當的機溶劑柱展開船，而叫達到鴉分離李、鑒董定的縱目的鴨。其疫優點況是：逐設備單簡單恐，操指作容您易；靠層析級展開枝時間洪短，子分離勺時幾盾乎不離受溫污度的免影響我；可述采用蔽腐蝕悼性的雕顯色澤劑，峽且可寧以在毯高溫參下顯斬色；因分離可效率圣高。碑薄板趴的制錯備：介所用榴玻璃主板表黑面必王須光繞滑、啊清潔帆。價根據哄制薄隱板的晴方法舟不同播薄板乎可以疼分為戴軟板起和硬艇板兩紅種。買軟板匪即不攻加粘辰合劑雪，將閱吸附企劑干糠粉直拋接均暖勻鋪鏈在玻萌板上簡；制泳作簡啦單方匪便，鴉但是腸易被宴吹散底。硬辱板即孕用粘陽合劑野如水齊或其勝他液懷體，共將吸裁附劑憤調成煎糊狀啞再鋪甩板，慈經干晃燥后蕩才能廁使用制；制某備雖策然較艘繁瑣滾，但哈易于固保存齊。具漆體制張備方柄法如龍下：忙（1優）軟那板：漠選用銳一根月直徑哭約為灶1~年1國.2漢cm搭的玻駁璃管柜，根眨據薄磁層的撐厚度螺在玻改璃管節兩端騰纏幾雙圈膠蹦布，鍛膠布枯的厚澆度按避需要堡的薄瞧層厚帝度而糠定?？v常用井的厚稼度約濱為宜0.論4廣~循1m城m述左右聞。把選干的晌吸附驗劑倒肆到玻圈璃板范上，敲玻板白的一助端固婚定，啞防止闊推玻沙璃管仙時玻撿板移腫動，摧然后胸將玻缸璃管察壓在鍋玻板羞上，蹤把吸森附劑倚由一天端推誰向另沫一端夕，即安成薄淡板。欺要求漠：光亦滑、網平整匪、厚紙度均牧勻。婆（2些）硬季板：臣將適瞧當調昂好的筒吸附卻劑倒搶在兩夾塊3住mm頑玻板暖中間渣所夾貓的一勇塊船2m端m址厚度雀的玻刮板上餓，然巡后用我一塊澇邊緣蠶光滑凳的玻猶片把打吸附濕劑刮邪向一妥邊，膠即成艱厚度鉛一定宿的薄夜板。衣下面輪介紹發氧化寧鋁和偏硅膠博硬板仿的制銹備方垃法。唯氧化痰鋁硬崗板：倚稱取銳氧化盒鋁G情25木g置（G月表示粉石膏簡，這擺種氧稠化鋁音中含莫5%校鍛石查膏）寒，加筆水2于5萬ml示，在架燒杯期中調無成糊惰狀，柄鋪層怕，先濫在空單氣中虎干燥夸，后踩置于除20陵0~倦22抄0顆℃渣烘箱器中烤碧4小林時即海可使銜用?；⒐枘z絮硬板山：稱芝取硅從膠G摩30濁g奧，加補水爺60陸~休90址ml皮，在距燒杯服中調王成均旺勻糊野狀，聽立即蘭鋪層課，室則溫內仆干燥胸后置砍烘箱翻中烘咐干。靜此外其，也翅可用舟淀粉薪或羧擇甲基濁纖維陶素鈉捉（C查MC澤）作愚粘合田劑制決板。繁薄層奔層析餡的操脅作步對驟是晝：點柱樣、思展開蔽、顯送色。歸（二幣）分剪配層技析：仿分配察層析修是利泉用混脖合物型在二莊種或骨二種算以上睜的不駱同溶廳劑中獎的分氣配系筍數不饑同而波使物瘦質分錘離的臘方法蘿。如螺用帶跌水的聾材料粒（載崗體）姐作為仔液相企（固雹定相采），擔加入猶與水豎不相韻混合芽或僅枝部分熱混合責的溶陳劑（少流動泉相）衫，則廳混合蠻物各仗組分少在兩詢相間槐發生篩不同邊的分衫配現膛象而并逐漸玻分開丑，形會成色渣層。昌載體腰在分扇配層廣析中努只起若負擔位固定析相的態作用己，它顏們是能一些段吸附趴力小經、反繡應性康弱的乏惰性謙物質標，如舟淀粉滿、纖更維素截粉、鴿濾紙魯等。蒜固定戲相除來水外姜，還燥有稀蔽硫酸掉、甲凳醇、繼仲酰屠胺等呀強極霉性溶搞液。犧流動求相則似采用命比固錄定相撫極性剩小或線非極蒼性的亞有機輪溶劑棒。紙鞭層析搜是最閱廣泛園應用岡的一益種分摧配層摩析。住紙層施析法羅以濾卷紙為刃載體帥，濾恰紙上么吸附股著水聯（約嶼含2酷0%鄉—箱22南%）素是經抹常用蟲的固療定相宜，此怠類有樂機溶等劑如霸醇、粒酚等綢為常董用的燦流動有相。寨把欲遍分離勾的物偵質加失在紙裙的一瞧端，馳使流北動溶不劑經碧此移暴動，搏這樣丟就在撈兩相冊間發賞生分順配現泰象。哪由于松物質想分配善系數誰的不翅同，遙就逐它漸在脈紙上栽集中蝦于不從同的螺部位秋。在感固定憲相中奇分配噸趨勢崇較大度的成迷份，滴隨流慎動相次移動蹄的速播度就口慢；按反之羽，在頂流動撈相分均配趨智勢較堪小的敬成分蠢，移哈動速江度就靈快。另物質圓在紙季上移舞動的訊速度禿可以虧用R塘f稼表示局：纖色斑嗽中心瞧至原笑點中壩心的喉距離鑼R胳f恒初=引──謎──犯──文──廊──惑──防──標溶劑功前緣鑼至原澆點中效心的婚距離列物質揮在一干定溶符劑中取的分王配系烏數是感一定汪的，爭故移利動速巖率（店R伏f案值）她也恒謎定，濕因此快，可準以根述據R混f襲值來淘鑒定吉被分險離的打物質灘。尿紙層摘析法梳按操鉆作方吼法分混成兩爐類，殼即：介垂直肆型和翅水平棒型。野垂直言型是狀將濾凱紙條盤懸起顏，使松流動恨相向聲上或耐向下咸擴散甜；水贏平型嘆是將蕩圓形由濾紙刮置于裳水平鏟位，頸溶劑康由中金心向糠四周盤擴散競。煮垂直向型使誘用較也廣，金按分滑配物躍質的繼多寡曲，將跪濾紙蒙截成爺長條醉，在娘某一甜端距墊邊緣床2~怕4罵cm朗處點沖樣，穴待干怒后，辱將點肉樣端識邊緣丘與溶幅液接庫觸，五在密醫蓋的橫玻璃撓缸內王進行荒展開賤見圖已6-糧0-瘡1芬母缸傭型圖6峽-0借-2啞垂直籍紙層杰析嘩上述賭方法恒只用劣一種壽溶劑述系統稅進行篇一次洽展開臉，稱字為單輕向層嶼析。瑞如果醒樣品拜成分恢較多眠，而償且彼壟此的鄉R界f徹值相妖近，驢單向載層析棵分離處效果搶不佳際，可載用雙羅向層彼析法廢，即柳在長地方形籮或方艙形濾草紙的顫一角恥點樣目，卷眠成圓湯筒形示，先愛用第草一種歷溶劑脹系統眠展開減，展背開完丑畢吹連干后按轉9慢0魄o耐，再超放于涌另一茄種溶兔劑系仍統中頁，向暮另一釘方向令進行鴨第二置次展鳴開，仗如此腸各成功分分惹離較樣為清皆晰。襯見圖尋6-插0-甲3武錫呆沈舍駕滿梢圖6蓄-0勿-3材（三隊）離考子交嗽換層隆析：揚離子賓交換戶層析帝法（播io喝n盟e酒xc立ha認ng果e幻c莫hr慎om性at鋪og細ra肉ph妥y賄I教EC議）是訊利用雪離子專交換貼劑對劈需要壤分離研的各趁種離企子有羅不同指的親汽和力利而達趨到分裕離的旨目的境，這吵種柱鉗層析剛稱為珍離子叨交換肆層析飲。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附館件9易在合歪成凝則膠時坦，調才節葡株聚糖爬和交譽聯劑概的配大比，紡可以賣獲得蟲具有膀不同財大小信網眼撓的葡掀聚糖葛凝膠不。G偷表示課交聯槳度，嘉G越摟大，棗網孔膚結構鏈越緊癥密，王吸水互性差飯，膨奪脹也濱小，失適用疲于分秘離小籍分子乒物質避；G鎖越小畏，網搭孔結堵構疏卷松，貞吸水低量大餅，適寧用分齊離大各分子蔑物質額。商耕品凝斧膠的掙型號市采用搭“抹吸水延量匪”州的1彼0倍膠數字教表示犁，例哪如，油每指g典凝膠理吸水透量為曉2.梁5g唇即定閃為G召—鹿25絹型。們各種鬼型號震葡聚翼糖凝女膠的澇性質第見下糠表。過（表層7）室各種年型號矮葡聚夢糖凝姑膠的雖性質擔型號宇分離筑范圍群（分觸子量羞）莊吸水冬量拉g/夢g文干凝右膠哭膨脹次體積嚼ml兩/g跳干凝肯膠摔浸泡浴時間阻（小巴時）紛蛋白苦質鎖多糖谷20五--撲25費0節90粗--布10閱0勵0似G志--沿10犁G亭—蘿15殘G秧—黃25界G順—精50松G逐—侵75巷G敢—遍10吩0青G沫—堆15豪0托G你—冬20惡0碧<7石00倍<1油50灣0唯10芝00尋∽記50桃00片15稱00奔∽雖30扁00啞30月00擇∽筑70變00按0鋒40躬00像∽夜15女00基00我50原00株∽疊40下00脹00跳50總00腦∽匙80借00套00飽<7解00惱<1遠50盲0剖10揀0討∽系50診00烘50扯0喜∽超10弊00蹤0惹10嚷00瘋∽項50騰00念0報10醉00共∽投10安00得00熔10感00傲∽槍15躁00慘00處10蝦00螞∽滅20潤00春00兇1.混0拜±亭.0秤1縮1.片5舒±箏0.瞧2蛾2.川5許±稅0.村2治5.贏0戒±剝0.圣3附7.拍5具±丹0.廁5茅10道±訂1.此0性15謹±捆1.壘5泛20咽±嫌2.事0杏2光∽邀3斑2.鍋5米∽協3.紛5塘4艦∽姜6擦9抽∽巴11打12看∽碑15華15絡∽謀20群20挎∽合30鐘30擦∽裹40響3侍3披3凈3緣24立72郊72童72萍1未1敢1立1找3礙5誘5盈5枕喝陜由癢上表傳可見犬，篇Se賞ph屠ad休ex肢—皮G值勇越大眨，吸馳水量敬越大逮，分處離范今圍（怎分子物量）磁越大則聚丙宋烯?；郯纺┠z其艘商品哀名為永生物匆凝膠假P（萄B短io隸-猴Ge核l兔P）世，是此用丙傍稀酰潔胺（易ac織ry舌la鄰mi劇de老，次簡稱獎Ac確r愚）和餡交聯聚劑亞獲甲基擇雙丙暖烯酰銹胺（耀N，搖N館ˊ槳—船me婦th東yl牛en繩e剃b征is鴨ac吃ry堪la蝴mi艇de蹄，簡卻稱B蛛is震）在鎮催化溝劑的蜓作用史下聚曬合而連成。綱其結危構式嬸如下故：羞（方嘗程式目4）籃張龍叼翔仙P9以0農聚丙遍烯酰旁胺凝鋸膠聚秒合的鵲催化禿體系詳有兩貍種：采（1恥）化緣學聚貫合：狹催化比劑多茂采用邪過硫長酸銨盲（該am叔mo掘ni自um君硬pe臘rs票ul貴fa倉re搭，A趣P）悠或過憐硫酸克鉀，涉此外瞞還需盒要一桑種脂軍肪族帆叔胺厚作為禿加速約劑，以最有釣效的芹加速菌劑為孔N，寧N，箭N竿ˊ饅，N注ˊ—蜓四甲擾基乙廈二胺器（N涌，N鳥，N價ˊ擾，N杰ˊ—才te孔tr挺am縮et舊hy耳l振e列t災hy漿le燕ne銳di坑am絞in畏e邪，T踢EM鼠ED擦），撇其次筋為三勻乙醇猴胺及脅二甲宰氨基適丙腈國（3坊-儀di女me紋th份yl蝶am教in儲op描ro如pi拆on發it能ri慰le需,D亡MP拖N）拐。在厲叔胺災的催栽化下個，由正過硫通酸胺沸形成拘氧的傘自由無基，舒后者蓋又使部單體希形成諷自由喉基，惱從而尺引發努聚合影作用宋。因錯為叔餃胺要西處于罰自由紀堿狀狼態下君才有驅效，申所以惰在低睬pH珠時，比常會鮮延遲教聚合伏作用續。分嗎子氧勢阻止坐鏈的蕩延長愉，防奸礙聚蔬合作行用，沫一些瞞金屬性也能戴抑制勻聚合隆。冷簡卻可毀以使虜聚合土速度膨變慢脖，通插常控抄制這露些因繼素使散聚合億在一抖小時援內完辟成，倉以便坊使凝賊膠的惑性質唇穩定箏。雀（2石）光之聚合欲：通五常用積核黃堡素作錄催化費劑，禽不一江定加翻TE外ME恨D即稠能聚傍合，紋但加焰入則窩可加松速聚骨合。獨光聚沸合通頑常需嗎要有炎痕量宜氧存泳在，斗核黃躍素經少光解乖形成除無色光基，販后者圖被氧搏再氧衰化形哨成自局由基截，從絞而引邁發聚耕合作量用，塵但過蜻量的飼氧會津阻止剛鏈長惕的增仍加，群應該亭避免數過量功的氧項存在碗。光詠聚合頌通常蔽用日猜光燈鞠或普蘿通鎢腫絲燈澡泡作夸光源豐，直遮接日錄光或慰室內幻強散暗射光淡也可鼓以。住用核鴿黃素紐進行火光聚趟合的喬優點羽是：賣①御核黃筒素的通用量載很低畢（旨1m洽g/砌10簽0m景l）果；淺②啄通過跪光照破可以凝預定卷聚合利時間年，但時光聚奮合的顆凝膠誼孔較蝴大，三而且蓮隨時絕間延屠長而假逐漸岔變小臘，不陳太穩例定，痕所以銳用它構制備險大孔刷凝膠欣較適賭合。套化學留聚合乒的凝壇膠孔妄徑較絨小，父因而猴采用罵過硫中酸胺抵—喜TE樹ME哲D催北化系脂統制網備小蒼孔凝翻膠（跡分離籃膠）芝，而匆且各幣次制川備的渾重復德性好寄。項凝膠脅濃度抖和交兵聯度乳與孔五徑大鞋小的毅關系廳：凝敲膠濃液度與捆被分井離物老的分遞子量叔大小泛的關更系，覺大至扭范圍絨如表耍：轉(表紗8)嚼M仁r土范圍市與凝搬膠濃忘度的線關系援M陰r哀的范蔥圍怪適用啦的凝捐膠濃之度%樣蛋轉白質否濃式<揀10態4攪芒珍1奏∽虛4旁×拌10局4敵透梅4室×躺10癢4喘∽牢1牲×宵10禍5摘讀靜1哄∽擾5毫×脅10宵5喬唱旦>5敢×身10丹5欺20南∽裝30遼15偽∽振20清10涉∽寺15聞5出∽括10描2謹∽棄5介核貪酸緩跳食<1匙0煙4卡閥喜10敞4傘∽召10撈5薄忙庫10器5奪∽棋2惡×蠢10勉6牲15追∽灑20懷5粉∽乞10績2愛∽橫2.主6肉聚丙服烯酰召胺凝洪膠的鹽機械守強度異好，照有彈纖性、雹透明盟、相騰對的哀化學捏穩定安，對第pH壩和溫粗度變凱化較乘穩定繡，在肥很多暫溶劑鏈中不接溶，拒是非廚離子次型的錘，沒肅有吸礙附和牛電滲叮作用癢。原提料成集分要扣采用棉高純攏度制嗓品，辟通過陵改變筑濃度浩和交駁聯度燦，可存以控掏制孔賽徑變機動在支極廣愚泛的侵范圍訂，并誼且制弊備凝壽膠的求重復表性好躲，由去于純蘭度高誦及不女溶性閥，因關此還沖適于遞少量私樣品西的制粥備，盯不致稱污染碎樣品袍。煤（表緒9）足聚丙唉烯酰山胺凝耐膠的餐技術歉數據村型號療排阻歡的下佩限（討M均r袖）放分級窄分離舅的范邀圍桌（M刺r佳）炮膨脹挑后的村床體換積卷ml膊/g蟲干凝粒膠絲所需右最少孫時間歡（室碌溫，己小時她）快B勺io向-g拋el么-P床-2搞B耽io巡-g觸el完-P泳-4傷B件io捆-g叛el狗-P嚷-6嘩B運io鹽-g屬el性-P駛-1廉0池B名io穗-g曲el覽-P尊-3尊0苗B馳io交-g燭el鐵-P握-6波0沉B份io拘-g孩el譜-P后-1努00扣B仁io蝶-g儉el懇-P勺-1敲50齊B堆io個-g政el駝-P殖-2春00指B忽io屯-g塞el早-P寨-3欄00棵16志00飼36跨00善46題00嘗10返00索0倉30男00災0御60漠00農0車10料00跌00贈15巧00頁00進20各00鞠00網30施00爺00兼20喊0—卻20隔00卻50蛇0-謠--喜40究00眾10活00撫--才-5討00最0冷50怎00稼--訪-1至70攏00覽20攔00煎0-盟--修50貞00疼0粗30預00駛0-扭--祥70氧00勵0安40斬00況0-瞎--瓶10陷00什00鏈50澆00賺0-不--舉15下00較00形80睬00屯0-進--尸30止00祥00筍10省00側00拾--夜-4摟00層00央0錦3.芝8活5.鹽8權8.賞8復12旁.4堆14否.9代19塵.0死19爪.0薄2隙4.蹤0朗34掌.0換40起.0鬧2-弓--消4踢2-洞--賠4結2-睡--側4偷2-嘴--濕4枯10涌--跳-1磨2專10難--望-1魚2恒24聯24姜48躲48赤下面陣幾張愛表列炎出凝捕膠層恐析介餃質的補一些顫性能孟指標楚，供很讀者黨參考弊。竹表1站0監各繳種凝小膠所折允許耀的最伙大操字作壓森凝膠碰建議映的最仁大靜濫水壓患（遞cm屆H穩2棗O趟）伙**旬Se伯oh獵ad傘ex躬G-鄰10緩G-繼15和G-合25傭G-擊50手Se祝oh穗ad訂ex真G忽-7層5互Se勺oh刮ad井ex獄G看-1跳00鄭Se演oh街ad身ex闖G灰-1趣50暮Se謊oh俊ad虹ex寬G弟-2暫00治Bi售o-通Ge犯l教P-處2派P-幣4較P-窩6賢P-假10黨P-士30悄P-迫60袖B突io預-G麗el仿-P腹-1略00顆B它io胖-G蓄el耳-P晝-1塞50輩B筒io葡-G執el紫-P炭-2恐00速B補io潑-G糠el垃-P腸-3鉛00性Se幅ph熔ar殘os憲e爹2B橡4B否Bi度o-畫Ge樣l傲A-億0.嬌5M魯A-顛1.禁5M始A-測5M絕Bi街o-嗓Ge給l醫A-飛15酸M男Bi近o-噸Ge惰l俯A-務50碰M蟻Bi印o-引Ge宇l央A-巖15帥0M扭10稠0(卵98早.0臂6P慰a)棟10俘0(君98深.0器6P鏈a)引10福0(附98載.0佩6P壁a)鬼10熟0(攝98嬸.0瑞6P懶a)葬50榮(4疑9.雞03融P免a)不35鞋(3蕉4.毒32塔P椒a)腿15屠(1致4.蹲71泛P他a)睛10冶(9殖.8構06拆P虜a)呆10軋0(協98交.0尺6P勝a)摧10工0(競98藝.0幼6P償a)癢10餃0(懂98音.0歇6P模a)值10擾0(穿98降.0瓦6P叉a)旁10儉0(碰98叢.0肢6P玉a)府10隸0(春98萌.0咱6P偽a)道60蘇(5設8.菌83消Pa緊)錦30堵(2由9.燦42薦Pa工)員20揭(1啊9.銹61受Pa委)基15功(1絡4.屬71膝Pa指)抗1疫*蟻(0金.9倒80魂6P歲a)幣1(禁0.委98地06茶Pa雖)范10維0(覺98較.0喉6P饞a)游10對0(倆98壞.0野6P辯a)眉10相0(燥98政.0圈6P繞a)拒90爬(8仍8.土25桃Pa見)艱50婦(4禁9.替03薯Pa倍)拼30凳(2絡9.撕42廣Pa呀)箱*警娛溪每罩cm敬凝膠巾濃度刮窮*斃*陷駕1覽c乘m麻H源2脊O=剪0.豆98卷06萄Pa改（表棵11偶、）暴見附續件1累0等（表括12庫）見尿附件惹11堅--脹-1凡、2階下面瘦介紹蝶幾種謠染料透的性涌能及財染色宅原理要：資1、懶氨基諷黑1烘0B蠟（田am耳in掛o贏bl晴ac塑k倍10閥B）籮C愉22勁H以13斷O臭12書N厭6急S攜3笑Na務3恭,岔Mr割=7掌15忘,衛λ本ma腸x=太62幣0封~6廟30堵nm臉。氨領基黑緊是酸掠性染躁料，蹤其磺孕酸基飲與蛋盛白質仙反應膛構成蜘復合登鹽，帥是最形常用興的蛋促白質榆染料慨。促但用緞氨基趙黑染勵SD公S-阻蛋白嶼質時祖效果睜不好癢。另托外，也氨基鑄黑染杠不同纏蛋白奧質時普的著嗚色度膠不等的、色夢調不邊一（增有藍開、黑盆、棕鼠等）外，作駛同一絞凝膠斯柱的大掃描嶼時誤隊差較助大，爹需要配對各祝種蛋賀白質緩作出規本身侄的蛋涉白質蘆染料聲量（得吸收監值）填的標夫準曲這線。配（方查程式肅5）合插入移分子狡式甚張倘龍翔網P9速1澆2、妙考馬個斯亮鼠藍G嘉25揚0，妨又名倘Xy狐le觸ne悲b烤ri瞧ll曠ia秀nt書c鹿ya影ni奏n逢G浪。比頭考馬酬斯亮野藍R蜓25之0多誦二個夠甲基淚。M摘r=打85冤4,賤λ代ma辛x=尾59它0鏟~6冰10重nm捧。染峽色靈吐敏度宵不如萄R2胡50貿，但饅比氨概基黑隆高3兔倍。名優點臣在于姓它在咽二氯筑乙酸賊中不圣溶而曉成膠禾體，倡能選霞擇地頭染色洋蛋白院而幾咳乎無蘭本底儉色。壯所以吉常用御于需耳要重臣復性班好和予穩定列的染歌色，削適于艇作定閘量分半析。秘3、負考馬蠅斯亮英藍R償25側0（叼Co易om耕as背si豆ve憂b粗ri享ll鎮ia銀nt絞b瞎lu旗e株R2漢50溝），段C傭45膛H璃44黃O巧7估N雄3叔S匆2鏈Na警,鉤Mr楚=8寺24嶄,估λ隔ma嘴x=勒56近0埋~5結90梳nm摔。染半色靈屆敏度隸比氨硬基黑帝5倍旨，但路蛋白惰質濃汁度超內出一爪定范斤圍時籃，對坑高濃孔度蛋公白的善染色片不合噴乎B霜ee涂r修定律爸，用奪作定齒量分貴析時議，要威注意翠這點狐。北（方丙程式謠6）猛插入寸分子怖式暢張自龍翔籍P9朵2牢4、眠1-平苯胺沿基-慰8-悔萘磺晌酸（慈1-泥an集il揮in冶o-癥8贊-n歪ap賺ht辭ha劫le弟ne敞s科ul旁fo踢ni諒c網ac烏id艇，甚AN揉S攝）本弟身無亞熒光效，但拜與蛋蜘白質踏結合哀后則奶產生尾熒光勤。將桂凝膠瘡放在文此染跟料溶垃液浸陳1~謀3分黎鐘，冊用長等波紫犯外燈貨照射身時，煮產生懷黃色壩熒光架，可夏顯示姿蛋白腸質1哀00關定厘，如梅果不擱明顯樣，可狗將凝熔膠取綁出暴竟露于燃空氣哨或鹽退酸氣泰中，棵或浸藍沒在貿3m作ol陵/L頂鹽酸構中幾皺秒至講2分責鐘，糕使表濫面蛋劫白質錘稍變蒙性，將然后財再用叢AN灘S染沾色，因這樣際可顯嘉示蛋昏白質桃20邀卡君夸這樣嶼的染宵色優梢點是些可保暢留凝轎膠內渠部的叮酶和華抗體絮的活跟性。政可將鴉該區理帶切明下來攝進行播酶活重力測原定；蒼也可龍直接埋把凝裂膠搗扎碎研泡細，弊用作潤抗原則來注堂射動劃物，烤聚丙手稀酰圍胺不仙影響灰抗體厭的產遺生。端（五憤）親策和層簡析法疾：被生物糖體中禍許多陜高分猛子化助合物惡具有風與某紋些對撤應的裙專一奏分子滔可逆綢結合偉的特嶺性，勾例如振，酶誦、蛋車白與楊輔酶屈，抗欺原與唇抗體踩、酶宰與酶捷抑制竊劑、騾激素范與受館體等船體系玩，都蓬具有門這種欲特性渴。生貿物高菊分子簡與配梁體之巾間形別成可奴解離耗的專州一絡卡合物見的能大力稱垮為親起和力鼠。根芽據這榜種具司有親描和力啦的生翅物高滴分子屆與配機基間其可逆尺性結耗合和允解離淚的原倍理而籃建立蛛的層任析技賠術稱躬為親棟和層斯析（播af奔fi漢ni咱ty衣c糧hr叨om程at鄙og士ra塑ph輝y再）。墻親和當層析質的優編點是民：在最溫和辛條件榜下進謝行，銳操作煩簡單暗，效斑率高強。親雷和層圍析在弦分離磁、純養化的芒效率擴上可匯以說床是最價佳的耐方法轉。親絹和層杯析是月由吸襪附層督析發速展起令來的餡，它伏相對索于建壓立在乒物理爸化學鄭原理藏（如堵分子防顆粒秧大小方、分儲子帶撿電荷津狀況排等）押的分濾離方秧法而捐言，缸可稱治為甘“館生物勉專一口吸附種”異的層余析分桌離方幣法。肅在親雀和層營析過或程中受，被費分離珠的生勢物分洞子在外一定筍條件渾下，危有選勺擇性展地即嘗高度窩特異暖性地哨被結拳合到略共價究偶聯快的不硬溶性可載體憲的配夾基親救和吸咽附劑蔑上，侮然后暈改變折原有侍條件息，如鴿選用完競爭宜性抑波制劑灶、底膛物、鐵輔助殿因子樓，或畝采用咳不同造pH雹的緩弄沖液鋼、高泡濃度梅鹽，雷變性筒劑等憐，又父可有妹選擇戴性地屠從親最和吸灣附配洪基上豪把要持分離箱的物廉質洗王脫下椒來。罪通過蛾親和墨層析吹，被捕分離省物質樹的純執度有槍時一做次即裁可提童高幾松倍、醒十幾芳倍甚怖至幾具百倍咸，活竿化回勵收率遷也是俊非常恩高的吩。妻親和龜層析李法的添基本鞠過程店如下域：滲1、哄偶聯屠：將姿欲分渾離的霜高分音子物蹄質X安（如沖抗原惱）的館配基挺L（訪如抗而體）棵在不透影響麗其生錦物功為能的壓情況番下與書水不演溶性拋的載摩體相紐結合償（稱毀為固減相化厘或固跪定化鵲），架制成甩親和枝吸咐騰劑或旺免疫芬吸附蓬劑。臂2、邀裝柱究：在邪層析潑柱內堵裝入從固相爭化的犁配基桌—承親和牲吸附糾劑（烘稱為酷親和居柱）鳴。測3、榴親和鋸吸附擔：含遵有高卡分子綠物質雄X的謝混合趕液（貧如粗妙勻漿怎提取筋液或旱血清卷等）門，在宴有利物于配杰基和白高分槐子之胃間形燦成復肝合物芬的條蓮件下逝，進岸入親惡和吸社附劑男的層疏析柱角?；鞜弦浩逯兄簧裼心芷蚺c配嚴基形灣成復董合物段的高種分子架X被象吸附致，而唱所有究不能修形成逗復合僻物的腦雜質揪則直布接流栗出。問親和戚柱進參一步坡用緩陽沖液摧洗滌憲，以沙盡可松能地共除去加非親滾和吸好附的訓物質率。捏4、族洗脫欲：改想變洗宣脫條棋件，濕促使宣親和當吸附顫劑匪—輕高分挎子復爐合物臟解離旦而釋挺放出幸高分嘩子的鏟物質蜻X，芽便得爸到欲杯純化閣的活芹性物現質。氧5、家再生培：將洗欲分聾離、佩純化著的生拘物大育分子缺從親抵和吸肺附劑找中洗怎脫的蜜過程磨，就億是再蘭生的揀過程色。再膠生后攔的親屬和吸尼附劑期可直取接用驕于又券一周槽期的但純化俊工作稀。取用親脆和層尾析法瘡分離化大分僑子化護合物違可用尼下圖浮表示閱：嶺（圖時6、臭7）擱張龍餡翔P護37潛2年從理插論上鎮說，休親和蹈層析翻可以屠用來境純化薄各種濫酶、喚抗原惑、抗解體、麥維生姿素結霞合蛋笛白、關傳遞弦蛋白盯、激胳素和米藥物容的受爹體、墓核酸廉、多鉤酶系污統以美至完求整的弊細胞絡。復固定駕化的敵配基你也可王用來蝴探討瞧生物惰體內尸大分按子和迫配基類間的型作用福方式脹。這誼種固茅相吸往附劑梁還可羅作為青生物臭大分戰子的動結構僑與功蓋能研掃究的緒工具潛。格下面勾對親碑和層臥析法挑中的尿幾個咽需要賓注意比的問騰題進祥行分輔析討嫌論：癥首先親，載搬體的屆選擇壺。奸使親窯和物鹿一方沿固相敬化的商水不襖溶性酸化合鑰物稱沒為載廣體。身其應屠具備籮下述圣特性落：1兆、高式度親商水。少使固投相吸著附劑逃易與本水溶便液中宴的生米物高涼分子門接近息。2喘、惰蠟性載柴體?？漭d體沉的非耍專一披性吸喉附應們盡可薯能小斧。3肉、具蝶有相坐當量省的化奸學基貴團可泡供活酷化或瓣化學原改變丹。4售、有磨較好軌的物鉤理和均化學刊的穩撫定性輸，能略經得僚起配可基固擠定化怒和親咬和柱厚層析李時可杯能采少用的斯各種續條件眾（如柏pH亡、離典子強芬度、彩溫度而、變晚性劑洪和去醬污劑栽）的叼影響古。5易、具河有多辦孔的稈網狀徐結構儉，能蘭使被統親和作吸附參的大夜分子獨自由州通過翻，從罷而增辟加配川基的忌有效鐘濃度甲。6窄、有泊良好亞的機升械性勝能，加為使悠親和后柱有攪較好臣的流夾速，擁載體框最好貍是均退一的禾珠狀稈顆粒時。緒常用育的載堂體有箏纖維塊素，凍聚丙燃烯酰潮胺凝吵膠，喊瓊脂爸糖凝才膠。說（表皺13薪）李珠狀轉凝膠敲分離孝范圍弦珠狀騙凝膠漫分離懶范圍四（M蘆r田）侵瓊脂果糖:捐Se顫ph缸aa蔥ro鋒se酷扁2B磁Se爸ph屆aa椒ro長se狀4茅B汁Se嗚ph棋aa敘ro絲se盞6輩B提聚丙籍烯酰腥胺:馬Bi修o-鍋ge點l-切p-畢30蹲0田Bi踩o-文ge東l-患p-云15漢0繼4屑×貫10唯7專3件×帝10誰7窄4宋×很10鴉6頭5偉×胃10潮5棉1.升5需×浴10放5墻其次范，配征基的帖選擇非。暈作為原理想堂的配到基，同它首驢先必滅須對縮欲純滿化的讓大分感子具瞧有很譯高的搜親和型力。寬另外狡，小慚分子駐配基立必須證具備梳可修移飾的球功能千基團擊，通透過這腐些基聯團與決載體鼠形成溫共價康鍵。舅這些風共價徐鍵的溉形成炊應不忙致嚴斯重地鍋損害俊配基陽與欲螺純化岔蛋白前質的租親合給力，賽用于雀親和愧層析踐的配如基有輸酶的慢底物澇類似赤物、恨效應宿物、林酶的失輔助錘因子按及抗樂體（令或抗匠原）饒等。巾第三算，幾燙種類撇型的圖免疫夸吸附方劑。面把抗拆原或法抗體類用共查價鍵躍或其燕它方刮式連庸接在郊固相渴載體飯上，鴉用以惕分離猾和純練化相痕應的鼓抗體愧或抗功原的熟方法堅稱為用免疫老吸附鏡法，悄固相酷化的張抗原藍或抗曾體稱忘為免朝疫吸潛附劑梁，根栗據載庫體的江性質沖不同腿，配封基和刺載體懸的連違接方信式大猶體可唇分為瘡三種誤類型趣。教1、宵使配賄基吸老附在決某些忘載體效的表螞面。躍常用誼的載恥體有欺皂土援、玻第璃粉薦（或好微球扶）、茂石英拜粉、句羥基愁磷灰撒石、菠氧化這鋁、惰硬脂榮酸鋇逮等。趙其優牛點：曉操作卵簡單蓋，條潮件溫法和。帆其缺稱點：蒙吸附翁不穩旅定而因影響令被分憑離物再質的郊純度股。剖2、糟使配閥基網熟絡在削某些帆載體慎化合撲物的圖網狀辜結構閃中。戀常用蓬的載苦體有醬聚丙伯烯酰互胺凝陷膠、笨淀粉角凝膠顯、交幅聯葡柔聚糖騰凝膠喚等。價此方諷法使餓用的織條件自也很寬溫和襯；只驢要凝悄膠的嚷交聯拜度和米配基睜分子讓大小途選配零合適煙，就只可得詢到效必果很桶好的胸免疫塔吸附鞭劑。翁3、毀使配票基通撲過共服價鍵守和載猴體結嘴合。飽常用曬的載啟體有手瓊脂還糖、雞纖維腰素交兄聯葡釀聚糖簽、聚覺丙烯狗酰胺逮及多洽孔玻乞璃等濟，此臉種方及法適沫用于緩大分件子化撈合物乖及小脊分子黃化合僅物。獵由于購與載踐體化置學的現結合繼，因踐此增課強了柴配基賺對p劇H、終離子嘉強度斃及溫沖度耐辛受力獻。它攻也是乎目前皆親和損層析昂方法別中最便廣泛趣采用睜的一碌種類徒型。統4、躺使用般偶聯牛劑直央接把稱配基報的許辟多分托子彼慌此連宵接起臭來。壩這樣專的偶污聯劑多有戊博二醛礦、氯涉甲酸黑乙酯隸，乙星基丁甜烯二稻酸酐線，環夾已基河碳二摧亞胺勸等。蔑但如奪果條懸件掌濾握不軍好，招很易吉引起良生物絮大分枯子的葛失活潔。蘋第四推、親伍和層范析條述件的矛選擇爹1、貨吸附壯：生遙物大蓬分子溝的親允和純此化最作好采尤用柱食層析囑法。薪親和鉤柱所侮用的盛平衡唯緩沖填液其姨組成朗、p血H和罷離子鞏強度謝都應叫選擇燈配基押與生牽物大妙分子摧之間悼的作枝用最飾強、為最有紫利于接形成竹復合掌物的君條件介。上畝柱的贈樣品際應該竭溶于絲親和歸柱的奴平衡場緩沖領液中巡，并波在上戴柱前討對緩蝴沖液丹透析話平衡幻。掉2、還洗滌蛙：樣撫品通倒過親森和柱處后，殺連續邀用大深量緩祥沖液導洗去拉無親比和力沫的生自物大浙分子停，且痛還常駝用不號同的陸緩沖池液洗南滌，由這樣指可進看一步秧除去剩非專票一吸程附的迎物質鐮，而鼻在親銷和柱作上只滔留下俗有專求一作搜用的珠親和耀物。穴3、割洗脫顏：洗釘脫正涂好與柔吸附撒相反服，所墻選取楊的條蹤件應溫該能付減弱俊純化頓對象皆與吸毛附柱俯之間增的相浮互作睬用，饞使得啄復合餅物完剖全解售離。示通過鉗改變喊緩沖哨液的握條件攜，如盜改變登pH急、離熊子強西度、聚有機拘溶劑宇的濃偏度等鋤，有學選擇喊性地按從載若體上駱把被抓分離材物洗熟脫下爪來。碗4、說親和肥柱的撲再生敘：當賓洗脫泡結束萄后，恨連續慈用大濱量洗嬸脫劑勺徹底轉洗滌請親和跨柱，常然后步再用正平衡辣緩沖逗液使代親和豪柱充掘分平窩衡，朱經過艦這樣合處理政，親纏和柱乳可反刊復使岸用。當下面木各表蟲列出男一些到親和劈層析層介質桌的技圈術數艷據，礎供讀獨者參停閱。嗓（表故14者）念張龍層翔P揉50烤3僵—嬸50惜7（乖十三貼）親價和層蚊析介甩質的選技術陸數據欣1橫—拔6。演綜上務所述鎮，五剖種層炎析技牙術在榮分離顆各種唐化合粥物時哄各有虛其優山越之舉處，嫂也有礦不足帥之處參。因纏此，般應根貨據具園體分久離化對合物忙的種植類及題要求委，選夜擇不睡同的敢層析獄方法家及層迫析介凱質，床以達翼到迅能速、星準確屆地分碗離目護的。悄現就欄如何決選擇鑄層析征介質融，列稱表如沫下，代供讀貫者參發閱。粥（表邁15懷）氣張龍蝴翔P和49腔7（線七）烤如何慮選擇父層析餃介質呈。傭妙墻偉P4祖98征按純蜘化步榜驟選啞擇層杠析介墻質。藝（表傍16講）賀二、筒比色時和分饞光分庸析法臨（孔和德娟砍）壞（一軋）原信理袍光線慶的本紡質是撥電磁云波的鼓一種千，有齡與電叮磁波剃和越X梨線類哀同的安性質旱。光謠線有皇不同鄉的波淚長，瞇肉眼凈可見猛彩色尚光稱塊為可笛見光竊，波丘長范黎圍在畝40有0豐~檢75勻0桃nm渴，小往于4侵00聚nm喉的光錫線稱歪為紫侮外線爸，大科于7烏50趴nm混的光孕線稱冤為紅紋外線介，如典表所獎示。摧（表構17御）見任書P矩19謎愛蓄當嫂光線騰通過脾透明錄溶液天介質仁時，涂其輻蔑射能盯量一所部分吧被吸揭收，參一部昏分被慢透過霉，所青以光自線射洞出溶鵝液介配質之捷后，根光能冠減少疊。例示如，壯可見截光通股過有瘡色溶求液介醋質后河，或烏紅外拜線通貌過多板種氣去體后旅均被死吸收悟部分治光能植。這顯種光屠能的主吸收酒和透至過可蠻用于績某些媽物質支的定略量分日析。辮采窯螞分唉光分嫂析所臘依據饑的定舅律是拒La設mb速er德t暮和例Be捷er悲定律城La調mb穿er奏t鏈式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