羥基蛋氨酸鐵(銅、錳、鋅)螯合率的測定長沙興嘉生物工程質檢中心氨基酸微量元素螯合物的生物利用率比無機離子的利用率高2~3倍，使用氨基酸微量元素螯合物是解決過量添加無機鹽造成環境污染這一難題的有效方法，同時也防止了無機鹽產生的不良影響及對維生素的拮抗作用。但氨基酸微量元素螯合物在飼料生產中應用還比較滯后，其原因除了價格因素外，缺乏合適的質量檢測方法，也是推廣應用的一個重要障礙，目前在產品標簽保證值中大多僅明示礦物元素和氨基酸的百分含量，用戶無法客觀地評價螯合物產品質量。本研究旨在為羥基蛋氨基酸螯合物的質量檢驗提供一種簡便實用的方法。1原理試樣經加熱溶解、離心分離，分成沉淀態螯合元素、可溶性螯合元素及游離態金屬離子。可溶性螯合元素及游離態金屬離子經過凝膠色譜，在規定條件下洗脫，實現可溶性螯合態金屬元素和游離態金屬離子的分離，從而可分別測得螯合態金屬元素和游離態金屬離子的含量，分別用原子吸收光譜法測定沉淀態螯合元素、可溶性螯合元素及游離態金屬離子的含量，即可計算出相應的氨基酸螯合物的螯合率。2試劑和材料實驗用水應符合GB6682中三級用水的規格，使用試劑除特殊規定外，均為分析純。2.1克拉克—魯布斯（Clark—lubs）緩沖溶液的配制2.1.1pH7.0的克拉克—魯布斯（Clark—lubs）緩沖液的配制分別量取1.0mL氫氧化鈉(0.1mol/L)溶液,12.5mL硼酸(0.4mol/L)溶液，12.5mL氯化鉀(0.4mol/L)溶液，注入100mL容量瓶，稀釋至刻度。2.1.2pH9.0的克拉克—魯布斯（Clark—lubs）緩沖液分別量取20.8mL氫氧化鈉(0.1mol/L)溶液,12.5mL硼酸(0.4mol/L)溶液，12.5mL氯化鉀(0.4mol/L)溶液，注入100mL容量瓶，稀釋至刻度。2.1.3pH10.0的克拉克—魯布斯（Clark—lubs）緩沖液分別量取43.7mL氫氧化鈉(0.1mol/L)溶液,12.5mL硼酸(0.4mol/L)溶液，12.5mL氯化鉀(0.4mol/L)溶液，注入100mL容量瓶，稀釋至刻度。2.2乙二胺四乙酸二鈉溶液[C(EDTA)=0.1mol/L]。稱取37.2g乙二胺四乙酸二鈉加熱溶于100mL水中。2.3葡聚糖凝膠（G-15）2.4鹽酸（1+10）贈3盟儀器附槐3.特1請恒溫季水浴社鍋滋30吉~8補0樂℃累可調丈叨3.斑2幼原子異吸收懶分光嶄光度帽計單波長準范圍阿19商0~念90座0n哭m脊側3.附3據離心碑機張轉速膀能達屬到3示00福0r訓/m喇in質。建爪3.瓜4艦色譜反柱3墻00染×糖9m辯m足4修測定揭步驟衡怨4.鐮1仰試樣板預處凈理背稱取定試樣東約0同.5帥g，訓精確寄到0陶.0書00卵2g金，置望于2授5m餃L離批心管尼中，伏加入少15蓬mL主水，辣于6靈0采℃銷水浴耳中，綠加熱杯30顫mi比n，陶不時民攪拌妨，使火試樣嗚充分捉溶解蹄，于闊25甲00鴉r/勢mi緒n離鎮心1蜻0m把in枕。將血上清藝液小群心移櫻入2而5m分L容撒量瓶祝中，稿沉淀齡用4仆mL狐×塞3熱芹水（襖60細℃饒）洗皺滌，擦離心促，上售清液灘一并唱移入該25血mL園容量紀瓶中凝，定沾容，書得可鏈溶性或螯合握態金患屬元賢素溶納液，越稱為胞A液扇。沉悟淀用特10廳mL踏鹽酸黎溶液翻（2劃.4布）溶汪解，挖轉入猛25禽mL款容量你瓶中蠢，用勿水稀度釋至林刻度弱，得欄沉淀遺態螯瞇合態怒金屬捐元素遭溶液曾，稱日為B潔液。閃4.版2滑凝膠堅色譜嫌柱的倡制備嚷稱取責約1破0g方G-泳15浮凝膠易，配把制成畜適當旅粘稠斥的懸烘浮液封，靜駛置3絮h，襲沿玻屆璃棒縮將排秀盡氣川泡的棚凝膠防懸浮俱液一訪次傾武入色尊譜柱摩內，貓待凝磨膠全掠部傾芹入柱呈內后昂，開乘啟柱憤下面鍛的出責口開蠶關，引流出續液體做，使顆凝膠駝自然砍沉降害。控藝制凝息膠部遍分長測度在毛15伶~2趕0c踏m。召開啟很柱下累部出灰口開求關，謙用約殘50唯mL敞pH照7.帽0的隊洗脫撿液洗賣滌凝移膠色淹譜柱繩。業4.筆3劣上樣贈排出依洗脫估液至維凝膠鉤表面條近于蹦流干秩，關杯閉出玩口開遍關；默用移蘇液管紹移取鉛0.打2m艙L溶些液A擴，吸傷管口斜離床襪表面狼約1棍mm帝，小煮心加迷入樣登品液瓦，使器之均初勻滲獄入床僵表面挑；打加開出瓦口開宣關，概使樣甚品流使入凝耕膠床練，用妙少量洗洗脫婚液小班心洗少滌柱配壁周套圍及勵殘留贊在床璃表面識的樣歲品；烘注入禾洗脫瀉液，跑測定拿Cu漂、F拳e、賀Zn反的螯唐合物絮時，暈用p宮H9佛.0元硼酸媽洗脫阿液；暈測定傭Mn詳的螯紙合物使時，謀用p化H1桐0.嗎0硼唱酸洗危脫液沫。稱4.棍4池洗脫紅分離役用相貿應p騾H的載洗脫喉液洗訂脫，曠流速雞為0絨.7秘mL筆/m呼in纏，收姓集洗江出組聰分約粉10挪0m灶L，磨定容毯至1傻00棕mL呢，得逢可溶發性螯如合金糠屬元識素溶橡液，森稱為閣C液狐。可木溶性翅螯合障金屬檢元素潑分離碰完成敲后，潛在凝侍膠柱賴頂端蓄用吸徒管移商入1喪mL嘴E疤DT萌A(亂2.類2)婚溶液閑，用帳pH搖7.誕0硼效酸洗燃脫液談繼續蹈洗脫扯，合球并所弦有洗星出組殲分，犯定容困至1單00晚mL疲，得滾游離器態金爪屬離你子溶幻液，淹稱為約D液虧。騰5芬測定健將上角述A誠液、幻B液驢、C早液、漸D液辮稀釋備至一合定濃縫度（牙稀釋矛倍數價視含您量而淡定）款，按話GB益/T糟13絡88籃5上滅機測你定，寧分別聲測定握溶液爛中金變屬元阿素的淋含量豆。眼6月螯合四率的真計算陽黑受泊利淘框氨基惱酸螯腎合物亂螯合掀率按涂式(浸1)姻計算賣：X=ABS()\#"0"蒙……民…漢(1輝)謙式中仇：X截—胳氨基棚酸螯淺合物嘉螯合逝率%披；臣停芽削m亭a品、m墳b估、m膊c盜、m卸d吳—鵝分別脆為A嬌、B欺、C織、D盆溶液刊中金許屬離隸子的甜含量黨(u濱g/辨mL果)喘；華市趣裁V兄a驗、V慮b夠、V萬c命、V諒d毯—賢分別堪為A芹、B族、C胞、D找溶液援的體云積(齡mL帆)細。棵7、懶結果痰及討識論遣7.能1.胖凝膠惰樹脂者的選徒擇護選用倡的凝揉膠樹鋪脂應抄是惰吼性的罰、不各與溶顫質分柏子發投生反諷應，星可反華復使存用不齡改變虜其凝倚膠性憶能；家盡可刻能低膊的電活荷，笛以免遭發生載離子泡交換嫁反應銜；足毅夠高任的機掠械強瘡度。憶因此彩，我帝們選飛用葡邊聚糖洋凝膠僵樹脂狐。本另實驗裹是進絹行組私分分周離，宗對于稠分配始系數殖差別臣較大哲的物蹈質的苦分離并，通撤常選貞用交輝聯度磁大的慘葡聚抄糖凝跳膠樹伸脂。籮根據夸被分胃離物框的分腹子量分，我絞們選家用G哈15農葡聚仇糖凝臂膠樹桐脂。撲7.仿2.怕洗脫改條件程的選機擇光7.覺2.削1強流動昨相的音選擇蔬本實跪驗中欺流動賣相的埋作用移是推舌動被錫分離宗物質初通過蘆色譜曬柱，昂此時怎各組揀分的鳥通過度色譜講柱移嶄動的渡速率罰因分既子的悅大小杜不同愛而各僅異，識因此碼，流禍動相鋼應選蹦用不環與被球分離假物質脂反應控的惰秤性水黑溶液宅。本紅實驗窯選用緩克拉肚克晚—聚魯布蜜斯（加Cl果ar乒k錄—墾lu薄bs堂）緩牽沖溶拌液即蓮硼酸統-氫肥氧化同鈉-騎氯化酷鉀組縫成的貓緩沖培體系工。策7.被2.予2凝洗脫肥液p惑H的啊選擇軋配制眼不同槐pH葉值的普硼酸廚緩沖企液作雷為洗哈脫液托，吸近取鐵芽、銅友、錳黨、鋅趴標準艦溶液輝并調贏整其忘pH陸，分啦別過步柱，稅洗脫胞、定住容得戶C液損。加護入E醫DT亭A溶夢液，困用p誤H=燦7的沒緩沖終液作很為洗織脫液柄，洗壇脫，擁得D氏液，錫分別曬測定植C液枯、D灶液中削金屬惡離子宇濃度盟，測丙定過桶柱后叼的溶葉液回嶺收率成。以物確定怨分離汽可溶魔性螯適合元歌素及嶺游離停態金公屬離排子的環最佳古pH丑。逼表1卵不設同p芳H值塑時的忠分離橡效果明（以迫回收甚率表津示%最）御項惰目叨ph歸值煉6.壽0交6.谷4漏7.勝0悉7.里4災8.旺0嗓8.尼4姨9.首0灘9.排4欄10懷.0雪10暑.4廁Fe厘C液咬40另.6誼7.五8走3.料9旋1.寫5怎0牌0援0姻0辟1.腿0鋒2.險5夸D液式60訴.1援92制.6蓬96孝.3榆98成.9殲10桂0.愚2欣99塵.8獸10質0.支9棍10挺0.淹6慌99先.1尤98災.5傾Cu筍C液證20喉.9融11讓.8欺3.容6嘩1.叔1順0.抱8惡0籃0萌0碰0傻2.躬0鋤D液狼80摟.3頓88碗.6暫96奴.8筐99京.2厚99因.3譯10浴0.超6情10代0.寸5素10定1.偉0壇10腰0.牙8躲99鋤.5宵Mn方C液晶70總.1六66替.2傷63撿.1巨50徹.2劑22瘋.5豐11惕.3俊6.著8銅0件0紡2.蝕3真D液廳30蠻.6選33秋.5派36芳.6心50帶.3模78攤.8猾88絕.4竭94雕.3低99隊.8用10乏0.緊0錢98傻.1服Zn希C液菊65哪.3夸49嚷.9幻14脖.6貓3揀.9科3.梯3濕2.努4不0日0陳0庭2.洲9掃D液沿35頭.0踩50邊.6煮86捏.3胳96另.9邊97盯.2話98奴.6封10贈0.弦7勺99婚.6蘇99跑.3斜95盲.5瓦由表蜓1可輛知，糾在合陵適的奏酸度秤條件濕下，款金屬嘉離子向基本讓被凝羞膠柱問吸附劫，游惑離金六屬離物子不日能通捉過分懶離柱拖。加利入E著DT踏A溶罪液后離，金輕屬離貌子可馬全部賣洗出唐。帆7.送3遍方法枝的適臂用性檔抵測定黑不同殘生產折廠家惱的產肢品，情考察避方法挎的適羅用性藍。泛南螺割弄級擺甩表2釘不同組廠家昨的產捧品螯脂合率凡測定土值（尼n=妨3）感汗試恢樣名攀稱主測定屑平均若值獨羥基證蛋氨芹酸鐵切2#綠94挽.0網羥基辯蛋氨侵酸銅寺99迷.4艇羥基冊蛋氨欠酸鐵劫1#值91纖.9蘋羥基節蛋氨狀酸錳坐86店.2妨羥基很蛋氨扎酸鋅閘94動.3慎7.裕4論精密辰度測覆定稍代分奶別取銹氨基知酸鰲誦合物供試樣葡平行典測定宴6次獸，結想果如鼻下：膊兄凈纏聯束胞表綢3意氨用基酸釣鰲合流物螯呢合率天精密踐度測夏定司試樣白測定貌值（雹%）擦平均鳥值（盯%）義標準桌差家變異褲系數蚊（%懲）錢羥基柳蛋氨眨酸鐵拿93軟.6大,9繼5.咬2,林92旬.7伯1.速30栽64野1.事41柄90級.5雁,9歡2.替6,貫93塊.5司,9備2.羅1,擊羥基共蛋氨嗓酸銅經99弓.9乳,9鍋9.俗8,鵲99注.4宣0.宵41歉47改0.饞47呼99染.5漆,9攪8.插7,港99床.2隆,9糕9.俊4,郊羥基屯蛋氨程酸錳爸86轉.2葉,8詞8.腫5,遺87倉.8共0.悶90遣94橫1.購04博87響.9瑞,8先7.院5,掠88灘.6箭,8窄8.頭4逝羥基南蛋氨栗酸鋅逼93物.8煌,6敲4.榆5,壤94課.3公0.倚69虜40董1.遼08屈93不.3秒,6況4.逗7,鋤95桃.2捏,6益4.骨5問7.炒5粗方法協準確頑度研啞究猴在已框知螯臟合率近的樣浸品中底加入歷相應糾的金他屬離乏子溶脫液，野測定隊其螯梯合率拍，以糊考察妥方法劃的準倒確度沃，每所個梯革度重籌復五逃次，具測定自結果千見表梁4。諸姐虧罩悅劣咸貝表4宅金岡屬離談子對莖氨基飼酸螯密合物悔螯合泊率測油定的軟影響糕（n堅=5解）過項軟目嶼理論脫螯合胖率(飲%)略實測雪螯合科率（甘%）臺相對瘡偏差擱（%艙）貸羥基勉蛋氨溜酸鐵稈92柱.7旗90監.2著1.它37饞羥基決蛋氨睜酸銅旗99企.4奸98思.2鋸0.蜜61框羥基認蛋氨糠酸錳他87超.8漏88畝.9間0.隔62炊羥基轟蛋氨鞏酸鋅箏94年.3貨95婚.7聚1.場08援由表表4可睛知，田測定繩值基棉本不飛受外店加金鐮屬離妙子的戴影響謝。俯7.超6民實驗鎖資料滑統計四分析這本中帆心及鹿另外錢二個朱質量艱控制亡良好但的實腹驗室比對相浮同的好樣品閃進行位比對尚試驗研，測紛定結覆果見暖表5昏、6廣。各國實驗能室測禿定資勿料根霉據G墓B6往37振9-卻19幟86醬進行機統計焦分析銅，以喬確定吵測定麗方法獨的精嚷密度繁。屋表5棚羥有基蛋摘氨酸熔螯合張物各塘實驗凈室測腹定資微料統熱計贏項目瞧羥基觀蛋氨興酸鐵兔羥基縣蛋氨鑒酸銅滾羥基披蛋氨鹽酸錳弓羥基百蛋氨辨酸鋅森原始獸數據塔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