實驗六微生物大小及數量的測定第一頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二鏡臺測微尺目鏡測微尺第二頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二目鏡測微尺每格實際代表的長度隨物鏡的放大倍數而改變，也會因使用不同的顯微鏡而產生誤差，因此在使用前必須用鏡臺測微尺進行校正。第三頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二目鏡測微尺的校正第四頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二三、操作步驟l．目鏡測微尺的標定把目鏡的上透鏡旋開，將目鏡測微尺輕輕放在目鏡的隔板上，使有刻度的一面朝下。將鏡臺測微尺放在顯微鏡的載物臺上，使有刻度的一面朝上。先用低倍鏡觀察，調焦距，待看清鏡臺測微尺的刻度后，轉動目鏡，使目鏡測微尺的刻度與鏡臺測微尺的刻度相平行，并使兩尺左邊的一條線重合，向右尋找另外一條兩尺相重合的直線。2．標定公式：計算兩刻度間目鏡測微尺的格數和鏡臺測微尺的格數。由于鏡臺測微尺的刻度每格長10μm，所以可得：

目鏡測微尺每格長（μm）=

兩條重合線間鏡臺測微尺的格數×10兩條重合線間目鏡測微尺的格數

第五頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二三、操作步驟3．菌體大小的測定將鏡臺測微尺取下，換上釀酒酵母玻片標本，分別在低倍鏡和高倍鏡下找到目的物，測量10～20個菌體的長和寬占目鏡測微尺的格數，再以目鏡測微尺每格的長度計算出菌體的長和寬。記錄結果,求出平均值。鏡臺測微尺的玻片很薄，如需標定油鏡頭時，要格外注意，以免壓碎鏡臺測微尺或損壞鏡頭。思考題為什么不同放大倍數的目鏡和物鏡必須分別進行標定？第六頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二酵母菌數量的測定

一、目的要求1．明確血球計數板計數的原理。2．掌握使用血球計數板進行微生物計數的方法。二、基本原理用血球計數板在顯微鏡下直接計數是一種常用的微生物計數方法。該計數板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，各列有一個方格網，中間的大方格即為計數室。計數室的刻度一般有兩種規格，一是大方格分成25個中格，而每個中格又分成16個小格；另一種是大格分成16個中格，而每個中格又分成25個小格，每個大格中的小格都是400個。每一個大格邊長為lmm，面積為lmm2，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.lmm，故計數室的容積為0.lmm3。

第七頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二第八頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二血球計數板計數第九頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二

計數時，通常數五個中格的總菌數，然后求得每個中格的平均值，然后再換算成lml菌液中的總菌數。如果是25個中方格的計數板,1mL菌液中的總菌數=A/5×25×104×B=50000A·B（個）

A為五個中方格中的總菌數，B為菌液稀釋倍數.如果是16個中方格的計數板，1mL菌液中的總菌數=A/5×16×104×B=32000A·B（個）第十頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二（三）器材1．菌種釀酒酵母2．儀器或其他用具血球計數板，顯微鏡，蓋玻片，無菌毛細滴管。（四）操作步驟l．菌懸液制備以無菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當的菌懸液。2．鏡檢計數室在加樣前，先對計數室進行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進行計數。3．加樣品將清潔干燥的血細胞計數板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣凹槽滴加,菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自動進入計數室，一般計數室均能充滿菌液。取樣時先要搖勻菌液；加樣時計數室不可有氣泡產生。

第十一頁，共十二頁，編輯于2023年，星期二4．顯微鏡計數加樣后靜止5min，然后將血球計數板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計數室所在位置，然后換成高倍鏡進行計數。每個計數室選5個中格(可選4個角和中央的一個中格)中的菌體進行計數。壓線的菌體一般記上不記下,記左不記右。如遇酵母出芽，芽體大小達到母細胞的一半時，即作為兩個菌體計數。計數一個樣品要從兩個計數室中計得的平均數值來計算樣品的含菌量。5．清洗血球計數板使用完畢后，將血球計數板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風機吹干。鏡檢，觀察每小格內是否有殘留菌