地貧基因診斷詳解演示文稿當前第1頁\共有29頁\編于星期三\2點（優選）地貧基因診斷當前第2頁\共有29頁\編于星期三\2點我國和β地貧基因突變類型頻率ZhangJ,etal.Hemoglobin.2012Sep3.當前第3頁\共有29頁\編于星期三\2點地中海貧血基因攜帶率

地區攜帶率(%)

地貧β地貧

廣東8.532.54

廣西11.196.78

云南

四川14.71.9222.62.18

臺灣4.201.10

香港5.023.41Xu,etal.JClinPathol2004,57:517-22.

Cai,etal.ChiJEpidemiol2002,23:281-5.Zhao,etal.ChiJEpidemiol2011,32:352-6.當前第4頁\共有29頁\編于星期三\2點α地貧基因分子基礎缺失型：常見（約占60%）非缺失型：少見（約占40%）當前第5頁\共有29頁\編于星期三\2點α地貧基因分子基礎α1地貧（α

0地貧）：

16號染色體兩個α基因喪失;一個缺失，另一個點突變。

-α/-α或α

地α/α

地α

，--/αα。α2地貧（α+地貧）：

16號染色體一個α基因功能喪失。

-α/αα

或α地α/α

α。當前第6頁\共有29頁\編于星期三\2點血紅蛋白H病:由于α基因3個缺失/突變，使過量的β珠蛋白肽鏈形成β4多聚體（HbH）胎兒水腫：4個α基因全部缺失/突變非缺失型α地貧α地貧基因分子基礎當前第7頁\共有29頁\編于星期三\2點

我國非缺失型地貧常見基因類型：

2CD30GAG(Glu)UnstableHb2CD31AGGAAG(ArgLys)Splicingmutation2CD59GGCGAC(GlyAsp)UnstableHbHbWestmead2CD122CACCAG(HisGln)UnstableHb

HbQS2CD125CTGCCG(LeuPro)UnstableHbHbCS2CD142TAACAA(Gln)Terminatormutationα地貧基因分子基礎當前第8頁\共有29頁\編于星期三\2點α

地貧臨床類型與基因類型的關系臨床基因靜止型-α/αα輕型-

α

/-

α或--/αα中間型--/-

α

重型--/--當前第9頁\共有29頁\編于星期三\2點β地貧基因分子基礎基因缺失：少見(僅見于:41-42)點突變：常見（約占99.5%）當前第10頁\共有29頁\編于星期三\2點β地貧基因分子基礎當前第11頁\共有29頁\編于星期三\2點

β

地貧臨床類型與基因類型的關系臨床基因輕型β地/β（β雜合子）中間型β地/β地（β變異型純合子或雙重雜合子）重型β地/β地（β純合子或雙重雜合子）當前第12頁\共有29頁\編于星期三\2點地中海貧血基因診斷技術PCR：多重PCR，Gap-PCR，QR-PCR等位基因特異性性寡核苷酸雜交（ASO）反向點雜交（RDB）Southernblot限制性切酶譜分析多重連接酶依賴探針擴增技術(MLPA)多重引物延伸DHPLC基因測序當前第13頁\共有29頁\編于星期三\2點Genotypingofthe--SEAallelesbyGap-PCR

地貧基因診斷技術（Gap-PCR）當前第14頁\共有29頁\編于星期三\2點地貧基因診斷技術（ASO）當前第15頁\共有29頁\編于星期三\2點地貧基因診斷技術（ASO）當前第16頁\共有29頁\編于星期三\2點地貧基因診斷技術（RDB）當前第17頁\共有29頁\編于星期三\2點GenotypeFatherCDs41-42(CTTT)/NMotherIVS-2-654(CT)/NFetusCDs41-42/IVS-2-654NormalcontrolN/N地貧基因診斷技術（RDB）當前第18頁\共有29頁\編于星期三\2點地貧基因診斷技術（MLPA）當前第19頁\共有29頁\編于星期三\2點地貧基因診斷技術（DHPLC)當前第20頁\共有29頁\編于星期三\2點

α地貧(缺失型)的基因診斷

Southern印跡結合多重PCR結合缺口PCR(Gap-PCR)

多重連接酶依賴探針實時熒光定量限制性切酶譜分析溶解曲線分析結合片段大小分析擴增技術(MLPA)PCR(RQ-PCR)

優點可用于分析基因的簡潔，快速，污對儀器要求低，易推重復性好，特異性高確定cDNA拷貝大片段缺失與重復染降低，檢測單廣，檢測大片段缺失。，可同時檢測已知與數，可同時檢突變，結果可靠，個堿基突變及小未知大片段缺失或重測已知和未知穩定性高。片段缺失。復突變。大片段缺失缺點費時、費力、需用不能檢測未知缺失及成本高限制了其推廣放射性同位素。非缺失突變。應用

PCR診斷方法的可鑒定各種缺失廣泛用于地貧檢測，作為常見地貧基因篩作為補充實驗補充或佐證。類型。可區分雜合子及純陰性但高度懷疑地貧或產前篩查合子的補充實驗。各種α地貧基因診斷方法的優缺點及應用當前第21頁\共有29頁\編于星期三\2點α地貧(非缺失型)的基因診斷PCR結合限制性內切酶酶譜分析：簡便、快捷，但只限于涉及限制性內切酶位點改變的突變和小片段缺失的檢測多重擴增不應突變系統：簡便、快速，同Gap-PCR一樣，廣泛用于α地貧基因檢測聚合酶鏈反應結合寡核苷酸探針的反向斑點雜交:診斷效率高，廣泛用于常見非缺失型基因檢測

基因芯片：并行性、多樣性及自動化，同時診斷α及β地貧基因測序：可用于檢測未知的非缺失型地貧基因當前第22頁\共有29頁\編于星期三\2點β地貧基因診斷

點突變PCR-RDB基因測序當前第23頁\共有29頁\編于星期三\2點植入前基因診斷（羊膜穿刺取樣）

母體外周血分離胎兒細胞進行產前診斷

母體血漿或血清中胎兒DNA分析

地貧基因產前診斷新技術當前第24頁\共有29頁\編于星期三\2點地貧基因診斷臨床應用當前第25頁\共有29頁\編于星期三\2點評價基因診斷結果應注意的問題不同種族/地區地貧基因突變點有差別臨床貧血的嚴重程度（即臨床分型）與基因診斷的嚴重程度一致：確診當前第26頁\共有29頁\編于星期三\2點評價基因診斷結果應注意的問題臨床貧血嚴重程度與基因診斷不一致（1）臨床“重”，基因“輕”：①應作家系調查，找診斷證據(舉例:新疆籍的病例)；②重視Hb電泳結果；