學必求其心得，業必貴于專精學必求其心得，業必貴于專精PAGEPAGE1學必求其心得，業必貴于專精專題十五生物技術實踐1．(河北省衡水中學2017屆高三一模)為了分離和純化高效分解石油的細菌，科研人員利用被石油污染過的土壤進行如圖A所示的實驗。請回答下列問題：（1）配制好的培養基通常使用___高壓蒸汽滅菌__法滅菌。步驟③與步驟②中培養基成分相比，最大的區別是___步驟③的培養基中石油是唯一碳源__。（2)同學甲進行步驟④的操作，其中一個平板經培養后的菌落分布如圖B所示。該同學的接種方法是___稀釋涂布平板法__,出現圖B結果可能的操作失誤是___涂布不均勻__。(3)同學乙也按照同學甲的接種方法進行了步驟④的操作：將1mL樣品稀釋100倍,在3個平板上分別接入0.1mL稀釋液；經適當培養后，3個平板上的菌落數分別為56、58和57。據此可得出每升樣品中的活菌數為___5。7×107__個。（4)步驟⑤需要振蕩培養，原因是___使石油分布均勻，與細菌充分接觸，有利于細菌的繁殖(答案合理即可）__.(5)步驟⑤后取樣測定石油含量的目的是___篩選出分解石油能力最強的細菌__.[解析］(1）培養基的滅菌方法常采用高壓蒸汽滅菌法。步驟③：的培養基中石油是唯一的碳源，步驟②會有其他有機物作為碳源.（2)圖B中的菌落不是呈線形分布,所以采用的接種方法應是稀釋涂布平板法。圖B中的菌落分布不均勻,應是操作中涂布不均勻引起的。（3)三個平板中的菌落數分別是56、57、58,取平均值得57,每升樣品中的活菌數目＝57×10×100×1000＝5.7×107（個）。(4)步驟⑤應進行振蕩培養，其目的是使加入的石油分布均勻，石油與細菌充分接觸，有利于細菌的繁殖。(5）步驟⑤后取樣測定石油的含量，可以得到被細菌分解的情況，如果含石油越少，則說明細菌分解的石油越多，這樣可以篩選出分解石油能力最強的細菌。2．(山西省2017屆高三一模)石油污染土壤的微生物修復技術以效率高、治理費用低和現場可操作性強的特點得到廣泛研究和應用?；卮鹣嚓P問題：（1）土壤中含有分解石油的多種微生物,向多孔結構的污染土壤中通入空氣，可使微生物的___代謝(或有氧呼吸）__增強,同時由于石油主要含有碳和氫,因此還需加入適量含___氮和磷__元素的物質促進微生物的生長繁殖，進而加快石油污染物的降解。(2)為了得到能夠分解石油的單一假單胞菌(細菌的一種），所用的培養基只能以___石油__為唯一碳源；純化菌株常用___平板劃線法__或___稀釋涂布平板__法.（3)土壤中分解石油的微生物數量直接影響治理的效果，因此常開展計數工作。實際操作中通常選用一定稀釋范圍的土壤樣品液進行培養，目的是保證獲得菌落數為___30～300__的平板進行計數，這種方法統計的結果___〈__（填“﹥”或“＝”或“﹤”）活菌的實際數目，原因是___兩個或多個細菌細胞連在一起時，平板上只能觀察到一個菌落__。3．（2017年東北三省三校高考生物一模）為了對柑橘綜合利用,某研究人員做以下實驗：請回答以下問題：（1)橘皮精油___無__色,主要成分是___檸檬烯__。本實驗用到的植物芳香油提取方法為___水蒸氣蒸餾和壓榨__.（2)若要計算提取精油的出油率，需要稱量___芳香油和原料__的質量。對比發現方法1的出油率稍低,但是發現其香氣、色澤更接近于鮮橘,原因是方法2會使___原料焦糊和有效成分水解__,所以通常先采用方法1提取,并將方法1之后的殘渣用方法2進一步提取。（3)通常使用方法1時，可以提前使用___石灰水__浸泡。浸泡的時間通常是___10h__以上。(4）使用方法2提取時發現,柑橘皮的破碎度越高，即顆粒越小,出油率越高，原因是___原料（相對表)面積大，隨水蒸汽蒸餾速度快。(與溶劑接觸的面積越大)(橘皮香精油從果皮內部逐漸擴散至固體表面所通過的距離越短，故容易滲出。）__.[解析](1）橘皮精油無色，主要成分是檸檬烯.本實驗用到的植物芳香油提取方法為水蒸氣蒸餾和壓榨。(2）若要計算提取精油的出油率，需要稱量芳香油和原料的質量。對比發現方法1的出油率稍低，但是發現其香氣、色澤更接近于鮮橘，原因是方法2會使原料焦糊和有效成分水解。(3)通常使用方法1時，用石灰水浸泡檸檬皮可破壞細胞結構，分解果膠，防止壓榨時滑脫,提高出油率。浸泡的時間通常是10h以上。(4）使用方法2(水蒸氣蒸餾法）提取時發現，柑橘皮的破碎度越高,即顆粒越小，出油率越高，原因是原料（相對表)面積大，隨水蒸汽蒸餾速度快.4．（2017年廣東省韶關市生物一模)某研究性學習小組同學為了調查北江河中細菌的污染情況進行了實驗.實驗包括制備培養基、滅菌、接種及培養、菌落觀察計數。請回答與此實驗相關的問題。(1）實驗中制備的牛肉膏蛋白胨培養基的部分成分列表如下：成分牛肉膏蛋白胨NaCl蒸餾水含量0.5g1g0.5g100ml表中各成分含量的比例確定的原則是___根據所培養微生物對各營養成分的需求量(比例）__。（2）對培養基進行滅菌，通常采用的方法是___高壓蒸汽滅菌(答蒸氣不得分）__。為了使培養基達到良好的滅菌效果,一般在壓力為l00kPa，溫度為___121℃__℃（3)為了更好的對細菌計數，一般采用的接種方法是___稀釋涂布平板法__，該方法的操作是將菌液進行一系列的___梯度稀釋__,然后再分別___涂布__到瓊脂固體培養基的表面。(4)接種后放在恒溫箱培養一段時間后，為保證結果準確，選擇菌落數在___30～300__的平板進行計數。該組同學在菌落計數時發現,統計的菌落比實際數目要低,可能的原因是___由于某些菌落可能是由兩個或多個細菌連在一起形成__。［解析](1）培養基配置的過程中，成分含量的比例確定的原則是根據所培養微生物對各營養成分的需求量（比例).(2）對培養基進行滅菌,通常采用的方法是高壓蒸汽滅菌。即將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內,為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100kPa，溫度為121℃5．（2017年貴州省貴陽市高考生物一模）某研究小組嘗試制作藍莓果酒和藍莓果醋，并探討提取花青素的方法。請回答下列問題:(1)為提高果酒的品質，需先獲得純凈的酵母菌菌種。吸取1mL酵母菌樣液，在105稀釋倍數下統計各平板上生長的平均菌落數為32，涂布時所用稀釋液體積為0。1mL，則每mL樣液中的菌株數＝___3.2×107__個.（2）釀制藍莓果酒前不需要對藍莓進行嚴格的消毒以除去雜菌，這是因為在___缺氧、呈酸性__條件下，絕大多數微生物因無法適應這一環境而受抑制.發酵時一般要先通氣,其目的是___酵母菌可在有氧條件下大量繁殖__.果汁發酵后是否有酒精產生，可在酸性條件下用橙色的___重鉻酸鉀__進行檢驗，若溶液顏色變成___灰綠色__證明有酒精存在。(3）釀制成功的藍莓果酒如果暴露在空氣中酒味會逐漸消失而出現酸味,尤其是氣溫高的夏天，其原因是___醋酸菌在有氧條件下,產生大量醋酸（合理敘述給分）__。（4)查閱資料得知，花青素是水溶性色素。在pH小于3。0條件下比較穩定，在60℃以下熱穩定性較好。溶劑萃取法是最常用提取方法，萃取劑宜選用___乙醇__(乙醇/乙醚），將萃取相關過程的pH控制在___3[解析]（1）為提高果酒的品質，需先獲得純凈的酵母菌菌種.吸取1mL酵母菌樣液,在105稀釋倍數下統計各平板上生長的平均菌落數為32,涂布時所用稀釋液體積為0。1mL，則每mL樣液中的菌株數＝32÷0.1×105＝3.2×107個。(2）釀制藍莓果酒前不需要對藍莓進行嚴格的消毒以除去雜菌,這是因為在缺氧、呈酸性條件下，絕大多數微生物因無法適應這一環境而受抑制.發酵時一般要先通氣,其目的是酵母菌可在有氧條件下大量繁殖。果汁發酵后是否有酒精產生,可在酸性條件下用橙色的重鉻酸鉀進行檢驗,若溶液顏色變成灰綠色證明有酒精存在.（3）釀制成功的藍莓果酒如果暴露在空氣中酒味會逐漸消失而出現酸味，尤其是氣溫高的夏天，其原因是醋酸菌在有氧條件下,產生大量醋酸。(4)花青素是水溶性色素。在pH小于3。0條件下比較穩定，在60℃6．(2017年山西省太原市高考生物一模)玉米秸稈含有大量的纖維素，用纖維素酶分解秸稈后的產物可以生產酒精。研究人員用硝酸鹽、磷酸鹽以及微量元素配制培養基，成功地篩選到能產生纖維素酶的微生物。請分析回答：（1)纖維素酶至少包括___C1酶__、___Cx酶__、___葡萄糖苷酶__三種組分，在這三種酶的作用下，纖維素最終被水解成___葡萄糖__。(2）培養基中加入的化合物A是___纖維素__，為微生物的生長提供碳源，這種培養基屬于___選擇__培養基，對培養基進行滅菌時常用的滅菌法為___高壓蒸汽滅菌__。（3)在篩選纖維素分解菌的過程中,通常用___剛果紅__染色法;如果培養基某部位出現___透明圈__現象，則說明存在纖維素分解菌.(4)用獲得的糖液發酵生產乙醇，常用的微生物是___酵母菌__，在___酸性且缺氧__發酵液中，該菌可以生長繁殖，而絕大多數其他生物受到抑制。常用___稀釋涂布平板法（其它答案正確均給分)__法對該菌進行計數，檢測是否產生酒精的常用試劑是___重鉻酸鉀__，會變為___灰綠色__色。(5)實驗結束后，使用過的培養基應該進行___滅菌__處理后才能倒掉，這樣做的目的是保護環境。[解析](1）纖維素酶至少包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，在這三種酶的作用下，纖維素最終被水解成葡萄糖。(2)根據題干信息可知，實驗目的是篩選到能產生纖維素酶的微生物,因此培養基應以纖維素作為唯一碳源，這種培養基屬于選擇培養基，對培養基進行滅菌時常用的滅菌法為高壓蒸汽滅菌。(3）在篩選纖維素分解菌的過程中,通常用剛果紅染色法；如果培養基某部位出現透明圈，則說明存在纖維素分解菌。(4）用獲得的糖液發酵生產乙醇，常用酵母菌，在酸性且缺氧發酵液中，該菌可以生長繁殖，而絕大多數其他生物受到抑制。微生物的分離與純化過程中常用稀釋涂布平板法法對該菌進行計數，檢測是否產生酒精的常用重鉻酸鉀，會變為灰綠色.（5）實驗結束后，使用過的培養基應該進行滅菌處理后才能倒掉，這樣做的目的是保護環境.7．（2016·全國卷Ⅱ）蘋果醋是以蘋果汁為原料經發酵而成的,回答下列問題：(1)酵母菌的呼吸代謝途徑如圖所示。圖中過程①和②是蘋果醋生產的第一階段，在酵母菌細胞的___細胞質基質__中進行，其產物乙醇與___重鉻酸鉀__試劑反應呈現灰綠色，這一反應可用于乙醇的檢驗；過程③在酵母菌細胞的___線粒體__中進行，與無氧條件相比，在有氧條件下，酵母菌的增殖速度___快__。（2）第二階段是在醋酸桿菌的作用下將第一階段產生的乙醇轉變為醋酸的過程，根據醋酸桿菌的呼吸作用類型,該過程需要在___有氧__條件下才能完成。(3)在生產過程中，第一階段和第二階段的發酵溫度不同，第一階段的溫度___低于__(填“低于”或“高于”)第二階段的。(4）醋酸桿菌屬于___原__核生物，其細胞結構中___不含有__（填“含有”或“不含有”）線粒體.[解析](1)酵母菌有氧呼吸第一階段及無氧呼吸全過程都在細胞質基質中進行；酒精與酸性重鉻酸鉀試劑反應呈灰綠色。圖示過程③為細胞有氧呼吸第二、三階段，在線粒體中進行。與無氧條件相比，在有氧條件下,酵母菌的增殖速度快。(2）醋酸桿菌的呼吸作用類型為有氧呼吸,所以將乙醇轉變為醋酸的過程需在有氧條件下進行。（3）酒精發酵時一般將溫度控制在18～25℃,醋酸發酵時一般將溫度控制在30~358．(2013·海南卷)根據相關知識，回答胡蘿卜素提取和酶應用方面的問題.(1)從胡蘿卜中提取胡蘿卜素時，通常在萃取前要將胡蘿卜粉碎和___干燥__，以提高萃取效率;水蒸氣蒸餾法___不適合__（填“適合”或“不適合”)胡蘿卜素的提取,原因是___水蒸氣蒸餾法適用于分離揮發性物質，而胡蘿卜素為非揮發性物質，不能隨水蒸氣蒸餾出__；鑒定萃取物中是否含有胡蘿卜素時，通常可采用___紙層析__法，并以___標準的胡蘿卜素__樣品作為對照.（2）若要提高衣物上血漬的去除效果,可在洗衣粉中加入___堿性蛋白(或蛋白）__酶,因為該酶能將血紅蛋白水解成可溶性的___氨基酸__或___小分子肽__；若要提高衣物上油漬的去除效果，洗衣粉中可添加___脂肪__酶；使用加酶洗衣粉時，水溫過低或過高時洗滌效果不好的原因分別是___水溫過低時酶活性較低，水溫過高會使酶變性失活__。[解析](1）萃取是將粉碎、干燥的植物原料用有機溶劑浸泡，使芳香油溶解在有機溶劑中。水蒸氣蒸餾法是植物芳香油提取的常用方法，它的原理是利用水蒸氣將