基因治療概念美國的聯邦食品與藥品管理局(FDA)于1993年給出的定義是:“基于修飾活細胞遺傳物質而進行的醫學干預。細胞可以體外修飾,隨后再注入患者體內；或將基因治療產品直接注入患者體內,使細胞內發生遺傳學改變。這種遺傳學操縱的目的：預防、治療、治愈、診斷或緩解人類疾病”1、體細胞基因治療(somaticgenetherapy)治療基因轉移到體細胞內使之表達基因產物,以達到治療目的；只影響受試者本人,而與后代無關。2、生殖細胞基因治療(germlinegenetherapy)

將治療基因轉移到患者的生殖細胞或早期胚胎內的一種基因療法；永久地改變后代的遺傳組成,其目的是要預防后代患特定的遺傳疾病。生殖細胞基因治療是體細胞基因治療的延伸與擴展；各國均禁止將生殖細胞基因治療用于臨床；我國于1993年制定了《人的體細胞治療和基因治療臨床研究質控要點》，明確規定僅能進行體細胞基因治療。特點

技術路線的多樣性；學科的交叉性；高風險性；高度的靶向性。基因治療發展經歷的3個階段第一階段：70年代－80末，準備時期又被稱為“禁錮時期”第二階段：1989－1995年，狂熱時期FDA于1989年批準基因治療正式臨床試驗第三階段：1996－現在，理性時期目前中國有“B型血友病治療”、“腦瘤自殺基因治療”和“Ad－P53”已通過國家藥審進入臨床試用基因治療的3Y原則安全性(safety)有效性(efficacy)穩定性(stability)倫理原則1、最后選擇原則某種疾病在所有的療法均無效或微效時。2、安全原則安全不僅僅針對個體，更重要的是針對人類。3、知情同意原則基因治療尚處于實驗階段，必須讓患者認識到基因治療可能的危害4、公正原則目前，基因治療只能用于治病救人5、保密原則患者的遺傳信息，尤其是基因缺陷不泄露給外界基因治療中存在的技術難點①突變基因定位與定點修復技術未解決,不能去除或糾正異常基因。②目前的基因導入系統尚不成熟,存在結構不穩定、影響基因組的功能以及治療基因難以到達靶細胞等隱患；③轉導的外源性基因在細胞內表達難以控制,有一定的隨機性，有激活致癌基因或產生野生型病毒的潛在危害；④無法保障干預生殖細胞基因而不對后代產生醫源性的傷害。常用病毒載體系統反轉錄病毒腺病毒腺相關病毒單純皰疹病毒（1）反轉錄病毒載體RNA病毒,基因組大小在8～11kb之間；以基因組RNA為模板反轉錄出雙鏈DNA；雙鏈DNA能夠隨機整合到寄主細胞的染色體上,隨著寄主細胞的復制而復制。1981年，Wei等構建了第1個反轉錄病毒載體；臨床上應用最多的以小鼠白血病病毒為基本骨架構建的反轉錄病毒載體。優點:宿主細胞廣泛,能夠感染不同生物種類的多種類型細胞;能高效的感染分裂細胞,感染率高達100%;能使外源基因整合到宿主細胞染色體上。不足之處：1)不能感染非分裂的細胞;2)可能產生具有復制能力的病毒;3)由于是隨機整合,可能引起“插入誘變”;4)包裝外源DNA能力有限,小于8kb;5)要求靶細胞表面要具有反轉錄病毒的相應受體。新進展1)慢病毒載體的研究和應用（HIV-1)基因組中存在核定位信號序列,它能夠有效感染并整合到非分裂細胞和最終分化的細胞(除G0期)2)人泡沫病毒目前為止，尚未發現有疾病與人泡沫病毒相關2）腺病毒載體線性雙鏈的DNA病毒,基因組為36kb；不整合到宿主細胞染色體上,而是以染色體外成分存在；上皮細胞、角膜和消化道上皮細胞具有天然的嗜性；與臨床疾病相關的腺病毒通常較溫和,很少危及生命。基因組結構優點缺點第一代1.缺失E1/或和E3區，以便插入外源基因；2.克隆最大容量8.5kb；3.E1或/和E3區由輔助293細胞提供。1.產生野生型病毒率低；2.避免了E1對細胞的轉化作用；3.比較安全。1.重組病毒效率低；2.目的基因表達快速衰退；3.產生炎癥反應，低水平病毒蛋白表達誘發宿主免疫反應。第二代1.缺失E1-E4；2.改造了293細胞，以包裝改進后重組病毒。1.載體容量↑（11kb）；2.細胞毒性、免疫原性↓1.未延長目的基因表達時間2.病毒滴度僅為第一代1/10-1/100。第三代刪除病毒全部E、L基因，只保留ITR和包裝信號，又稱微小Ad（MiniAd）。1.載體容量↑↑（28kb）；2.目的基因表達時間↑↑；3.細胞毒性、免疫原性↓。29偽3細卵胞是由特人胚燥腎細仔胞經Ad夾5煉DN謠A片段昏轉染蛙后發撿生轉件化而汪形成險的細斤胞，睬該基禁因組賺中整致合有Ad躲E1區的晌片段宋，可熄持續帶表達E1區蛋壁白。優點:1)人類燭是腺吉病毒熔的天藍然宿腰主,所以新比較安全;2)該病意毒在有體外穩定,易于弓制備證與純晝化;3)宿主候范圍燭廣,既可先感染犁分裂尼細胞,又可灘感染筍非分立裂細蝦胞;4)可原駕位感劉染,特別炎是肺,可經蔑口服,噴霧,氣管配內滴漁注等多途輛徑進共行治肌療;5)外源竭基因表達勺水平味較高。不足蔬之處:1)它幾常乎可同以感迅染所堤有的青細胞,因此缺乏那特異恩性;2)不能悟整合束到宿謀主染講色體腳上,所以梯不能拔持續胸表達棒所需倡產物,表達銷時間矩短暫,需重歐復給棗予載峰體制融劑治趕療;3)因可披能刺激級免疫前反應,使反仆復治紅療的匹效果字會逐律漸降邪低。（3傍）腺速相關仗（腺帽伴隨奧)病嬸毒載寒體線性崗單鏈堅的DN鋒A病毒,基因貌組在4.械6kb;繁殖養依賴潮于輔乳助病桌毒-腺病消毒和母皰疹消病毒德。生活碗周期充有兩芬個不獵同的桿胞內擱期:1)缺乏諷輔助恐病毒社時,腺相缸關病須毒感博染宿暫主細烤胞,其基妙因組潛會整衰合到峽宿主繼細胞免染色盆體上,形成想潛伏棕感染邪狀態;2)當有捉輔助擇病毒浴感染走同一毫個細稱胞時,腺相葡關病牙毒基驅因組DN宵A就會西復制騰。優點:目前鼻尚未騙發現喘該病梁毒在課人體呼中致覆病,所以憲比較安全;感染宿主控細胞劣廣泛,包括蠶非分輔裂細多胞和材分裂挖細胞,特別少是能因夠感承染神騰經元蒜和神槍經膠壞質細山胞;能特異詢整合于人郵的第19號染皺色體鉛長臂囑末端,減少標了插典入突來變的鄭可能黨性;外源睡基因表達勉穩定,第3個月錘至1.坐5年。不足給之處燙：難以子大量繞生產復制君需要磚輔助切病毒包裝襖外源機基因閑的能輝力有改限,小于5kb臨床萌的應蘿用受澡到一柄定限如制亟需仇建立緩穩定駱表達re撫p和ca兇p的細技胞系抖，但re增p表達暑的毒土性可尚能是光其困笑難所密在（4娘）單卡純皰轟疹病模毒載孤體基因雕組長填約15停2kb的雙趨鏈DN挑A病毒則；不整份合；對非剝分裂綱細胞繪具有客天然魔的親蹲和力；對神床經系乖統細耍胞具確有嗜棋向性。多用傳于帕疼金森你或腦帶瘤等錢神經排性疾富病的萬治療菌；用作爛基因譜轉移皆載體例的單謙純皰湊疹病顏毒主皺要來早源于I型單翻純皰通疹病肥毒（HS粱V-兔1）。優點:宿主范圍蒸廣,包括駕大量特哺乳粒動物香和鳥爹類的挎分裂勝細胞適和非桑分裂侮細胞;載體易于相操作;包裝解外源揭基因些的能蓮力大,可插宿入長熟達50kb的外插源基張因。不足漁之處律：野生慨型單違純皰桌疹病確毒對繁人類京具有震明顯毒的致臣病性劉,減能夠趴從潛扎伏狀蓮態激器活,崗所眾以目點前僅添限于禁某些把惡性非腫瘤歲的臨旱床治旗療試末驗。桿狀健病毒迅侵入毅哺乳剃動物中細胞:內吞HB更V肝靶燒向性噴基因費治療肉載體用外藏源目界的基鉛因取銷代一足個或扔多個HB只V編碼周基因掛:S/陳C/公P/算X;復制字需要充通過泛輔助孫病毒甚（包裝鋒信號ε缺失訊）基因忙組的違反式則互補烈來實蓄現。血友夏病的喜基因望治療血友今病B:人凝謙血因春子IX隙:Ad禿-FI乓X；愁AA纏V－扔hF菌IX；反轉是錄病要毒臨閑床試回驗(復銹旦薛賺京倫罷）血友稀病A：人凝件血因癢子VI攪II?地中欣海貧夢血的撿基因等治療?珠蛋橡白基搜因及須其調吸控序咸列突充變造血愛干細挨胞帕金獸森病幅（PD蔥）的基趨因治陽療酪氨終酸羥綿化酶角基因延:L-酪氨具酸轉糧換成L-私do姨pa神經凳營養津因子棍基因早老余性癡酷呆（AD占)的基喊因治批療?淀粉抵樣蛋輛白?-由am脈il弦oi甚dpr剩ec名ur盟so煙r納pr求ot錦ei店nAP串P神經亮營養獨因子嗚基因腫瘤茫基因纏治療考的基敞本策翁略1.聲癌惱基因且表達毛的反潤義抑備制策嗚略利用勉反義DN牽A、反義RN溜A、核酶像(Ri爹bo冒zy通me)技術孝，抑龍制癌谷基因豬的表砌達，災可以廣抑制候腫瘤猾。c-疾my壟c的反惑義核著酸在壩淋巴杯瘤細歪胞中計有抗抓增殖爆活性隙。以反午向K-ra怒s質粒席轉染盟小細淹胞肺捎癌細膽胞株迎，抑損制了K-ra潑s的表通達，或并且麥抑制商腫瘤閘在裸窮鼠體幼內的呢生長織,采桐用ra漏s癌基犯因特聰異的悄核酶左，用嘉逆轉非錄病金毒導催入膀安胱癌EJ細胞英，發踩現腫饑瘤細瘡胞的擱致癌河性和社轉移籌性均岔降低貝了5郵0％距。腫瘤需基因勇治療杏的基姿本策仁略2煩抑癌熔基因借克隆芹和表匯達策算略在目橋前已英分離義克隆劫的抑哄癌基糕因中鍵，對RB跪、p鞭53郊、n調m2餃3等在瘡腫瘤斃治療韻方面脫的作泡用研番究最茫為深斯入。恢復奮視網板膜母艱細胞辦瘤、辱小細訪胞肺晃癌等攏腫瘤臭細胞犧中RB基因英的表豪達對底于這途類腫擊瘤的鑰治療元具有笛一定心的臨姻床價敞值；以野慌生型p5垂3基因秒替換案腫瘤聰細胞縫中突睛變的p5壘3基因徒是p5父3基因汽治療雜最基頑本的膚應用鑒策略；恢復朱腫瘤牌細胞稼中nm鴨23基因慨的表蕉達對款于防獲止腫卡瘤的泛轉移鏟具有址積極桶意義斜。腫瘤嘩基因薯治療孕的基籃本策蓮略3.憐宿主要免疫嚴功能膠增強弄策略向腫約瘤細詢胞和網腫瘤運浸潤宵淋巴紡細胞汗(TI嫁L)中導售入細鍵胞因望子基遞因或狡腫瘤捏相關昆性抗蹦原基估因、B7共刺旁激分膊子基怪因等光，可意以增勺強宿夏主抗張腫瘤嚷免疫距功能用。目前誦用于延臨床垂的細到胞因撥子有IL畝-2永、T令NF炎-、I致FN祝-、G良M-許CS桂F等。腫瘤部細胞伴逃逸養機體戰免疫墾反應叨的原預因之屑一是閉許多吸腫瘤處細胞鮮缺乏B7共刺挑激分牙子，被將B7基因酬導入擇腫瘤茂細胞榮中，著再還籃輸小螺鼠體隸內。鍬無B7的小終鼠1戒月后新半數且致死昆，導齊入B7的小疊鼠全舅部度夸過3宇月的順實驗首期。腫瘤僑基因扣治療峰的基撕本策胡略4雜.腫安瘤治旅療藥督物前注體的麥轉換秀策略又稱躬自殺垮基因夜(su共ic兄id紫e輝ge寧ne蛾)療法馬。將斃自殺身基因方導入捧細胞程中，鉆這些端基因創的產慢物可坑將無帽害的庭藥物莖前體追轉變謠為有盛毒的船產物格，從破而將圣細胞弟殺死餡。目前廊常用榆的自洽