第九章

血清學反應

5/24/20231一血清學反應的概念及一般特點

抗原及相應抗體在體內或體外均能發生特異性結合，在體外結合能發生可見免疫反應。由于抗體主要存在于血清中，故稱為血清學反應。血清學反應根據抗原性質、反應條件、參與反應物質，則表現出反應有多種多樣。其反應的一般特點是：

第一節概述5/24/20232（一）特異性和交叉性

血清學反應具有高度特異性。抗原只能與相應抗體結合，而不能與其他抗體相結合。生物體的組成是復雜的，包含有多種抗原成分，在進化過程中形成不同的種類，有各不相同的特異性抗原，在親緣種系中往往含有部分相同的抗原成分，能引起交叉反應。5/24/20233（二）結合的可逆性

抗原抗體結合是分子表面結合，這一結合受理化因素的影響，當溫度超過60?C或pH降至3以下時，則抗原抗體復合物又重新離群。離群后的抗原、抗體，其理化性質、免疫活性保留。5/24/20234

（三）最適比與帶現象

抗原與抗體結合，其比例適當時才可出現可見反應。比例最適合，出現反應最快，反應產物愈多。如果抗原或抗體過多，抗體和抗原結合點的聚合一開始時即達到飽和，形成小的復合物則不能繼續與相鄰抗原、抗體結合，不出現可見反應，謂之區帶現象或帶現象。為了避免血清學反應的帶現象，需要將抗原或抗體作適當的稀釋。5/24/20235

5/24/20236比例不適合—不能完成第二步反應—帶現象5/24/20237（四）反應的階段性

抗原與抗體進行結合，可分為兩個階段：第一階段為抗原與抗體的特異性結合階段，反應快，幾秒鐘至幾分鐘即完成，但無可見反應；第二階段為抗原與抗體的反應可見階段，表現為凝集、沉淀、補體結合等，反應進行較慢，需幾分鐘或更久。第二階段受電解質、溫度、pH值等影響。兩個階段在反應進行中無嚴格界限。5/24/20238（五）影響反應的因素1.電解質

血清學反應須在適當濃度的電解質參與下，才出現可見反應。在凝集、沉淀反應操作時，一般用生理鹽水或8%—10%高滲鹽水作稀釋，才出現較強反應。5/24/202392.溫度

溫度升高，可增加抗原與抗體分子運動而碰撞接觸，加速反應的出現，故通常將抗原抗體混合后，放置37?C溫箱或水浴箱中，保持一定時間，促進反應。溫度高，加速反應；溫度低，反應時間延長，但反應結合充分，故在補體結合反應、免疫吸附實驗中，采用低溫放置過夜。5/24/2023103.酸堿度

血清學反應通常用pH6～8，過酸或過堿都可使復合物離群，pH值在等電點時，可引起非特異凝集。5/24/202311二血清學反應的類型

沉淀、凝集、瓊脂擴散、中和、補體結合和免疫吸附試驗等。

5/24/202312三血清學反應的應用方式和目的

抗原抗體反應是特異性的，在應用時必須有一個是已知的，通過反應來鑒定另一個未知的。例如鑒定某一病原微生物時，多用已知抗體。診斷傳染病時，對慢性病可用已知的抗原檢測未知的特異性抗體；診斷急性病則用已知的抗體檢測未知的抗原（病原），如炭疽病等。

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（一）抗原與抗體的快速檢測

在診斷傳染病、寄生蟲病、變態反應、腫瘤、自身免疫疾病時，均已廣泛應用血清學方法檢查抗體或抗原（細菌、病毒）的存在，作為診斷疾病的手段。現已應用的間接血凝技術、對流電泳、標記抗體技術，均能快速、簡便的確診抗原或抗體。5/24/202314（二）生物活性物質的超微定量

應用酶聯免疫吸附實驗、放射免疫等技術，抗原抗體檢測的敏感度均大為提高，已達到能精確測出Pg的水平，其敏感度已大大超過了常規的化學分析。此類技術已應用于測定動物體內的激素、維生素、藥物及其他病理過程中的微量產物。

5/24/202315（三騙）抗良原或棉抗體可在細穴胞與匪亞細溪胞水羞平的斃定位用熒抽光抗藥體、鑼酶標掠抗體沫技術武，可延以檢地測病握毒或征細菌標在動戰物各交種組搜織細雨胞中起的分貴布。售應用郊免疫版酶組爽化法竹及鐵頂蛋白毀標記驚技術將進行喊免疫捧電鏡額觀察服，可斯以測權定病蠟毒在儀亞細揉胞水四平的鐵定位轟，也淋可測的定淋涌巴細尤胞表買面免鑼疫球社蛋白狼及抗黨體的赤產生勿情況艷。據堂此可法分析吉傳染層病發誼生的后機制頁及對顫免疫腐機理傻的探將討。5/達18優/2射02比316（四妨）微熔生物欠的鑒歡定與歸分析應用畢交叉老凝集堅實驗李、凝纖集吸懇收實夫驗、司沉淀薯實驗獻等血耗清學澆實驗斬，進眉行微每生物座的鑒薪定及翼區別拋微生抽物的您血清線型，稅從而抹確定忠微生抱物的閉類型養及其婚親緣曠關系宋。還較可應窩用瓊擠脂擴皮散實癢驗、正免疫眼電泳謙等技灑術，心對微姓生物銳的抗弊原組才分進手行分宴析。5/剩18申/2爺02粒317（五常）血貢型鑒恒定用細現胞直乞接凝洪集實庫驗、深血凝棗抑制帳實驗渡、溶向血實閉驗等腦技術闊，可膨作血愿型鑒甜定、煙親子癢關系絡的確檢定、眼新生箏兒和眉出生跨幼畜英溶血莫病的表診斷碑。5/稠18陪/2故02滅318第二暴節踩沉聾淀試欄驗可溶狠性抗鄰原與賭相應貨抗體碎結合足，在被適量鳳電解絲式質存權在下絡，形亞成肉掩眼可職見的道絮狀拜白色知沉淀寇，稱呆之為志沉淀扶試驗從（Pr太ec意ip沉it言at惰io壺nr輕ea湖ct究io咽nte嫂st）。可溶汗性抗物原+免疫綠血清唱出現俯沉淀儉現象(血清否蛋白某、病遣毒)（抗濟體）僚比堪例適智合沉淀絹原頓沉睛淀素抱比牲例不私適合食不蓬出現萬沉淀獎現象0.害85介%N屑aC伶l5/恭18揮/2說02拾319一兵液踐相沉板淀試躲驗1．環瘋狀沉多淀試寫驗原理艇：試哀管內僅，下技層沉萬淀素粒與上絞層沉淀濁原在賺液界畝面應泰形成接白色碰沉淀鈴環。用途洋：檢暗測皮翅毛中逃的炭牢疽桿菌模抗原急（As勉co賞li試驗羅）2．絮網狀沉坐淀試編驗抗原猜與抗句體在車試管火內混君合，輕在電掃解質適的存乳在下東抗原好抗體參復合謊物可窗形成打絮狀罰凝聚離物。壇此法梅多用騾于毒樂素和輕抗毒賠素測忽定。5/疼18懸/2坦02僚320二縱瓊脂決擴散探試驗瓊脂撒是一朗種含賀有硫壁酸基碑的多公糖，區加熱紋溶解遺于水息，冷蔑卻后攜凝固徹成凝爪膠，語瓊脂仍凝膠駁是一降種多侍孔結新構，爐其孔嗽徑大搬小與寬瓊脂廢含量屠有關躺，1%瓊脂火凝膠還孔徑它為85濟nm，能襲使許樂多可枯溶性廢抗原鵝與抗業體在漿凝膠庫中擴健散。擾當抗挎原與送抗體沒在凝驅膠中否的一嗎定位包置上玩相遇臟時，壤則兩吉者結殲合形燭成沉擁淀線受。沉碰淀線雙的位凳置與螺抗原它、抗惑體顆蠅粒的侮大小糕、濃飯度，洲沉淀灶線的浪數目姐和所尤含抗彎原組面分有香關。船瓊脂謝擴散役可分崇為單妖擴散君（抗鼠原或唉抗體量中一互種成筆分擴懶散）磚和雙擠擴散而。根據銀其擴蜓散的卷方向逗可分浸為單咬向單揭擴、拿單向吸雙擴蛾、雙悼向單炭擴、丹雙向北雙擴畫，其叮中雙砌向雙滲擴應展用最犯廣。5/賢18任/2店02準3211．單惠向單感擴散將0.求6%乳-1奇%瓊脂呢加熱更熔化英后，仇加入擺定量代經預戀熱的逆稀釋困抗血醬清，叼混合設均勻俊后，母加入陷小試絹管中搭，待透凝固諒后加炭入0.軍5m寒l抗原瞞于其筑上，抹直立惰，置繩于37傅?C中，2-反3h后出土現沉搜淀線宣。由在于抗士原的饅擴散這，使夏沉淀襪線不供斷向懷下推涼移，燭而最識初形忘成的鵲沉淀紐奉帶隨及抗原要的擴診散而陡向下祖推移先，最埋后穩倆定。陷沉淀降帶距守抗原療愈近憑，其掌濃度踐愈大肺，可攻作抗竊原濃蛋度測狀定。5/靈18寺/2四02負3222．單旬向雙怎擴散基本叔作法歲同上則，但肯在抗桿原與閉抗體宇之間漠加一蚊層不股含抗趴體的朱鹽水切瓊脂細，抗采原與標抗體包均向真中間掙瓊脂老擴散塘，形序成沉扭淀帶烘。主婆要用及于抗目原成塌分的擴分析偶。5/握18寄/2鉛02悠3233．雙會向單竄擴散亦稱冒輻射幕擴散怖。在非平皿臺或玻屬板上傻進行用。用2%緩沖爬瓊脂跳鹽水睬，加俊熱融看化，冒待冷牛后加宴入經槐預熱就的抗誰血清短（用1：5-蚊10倍稀藏釋）擾，混狡合后秒倒入盒平皿統或玻傾板上伶，厚2-苗3m炸m。凝增固后蟲在凝放膠板壇上打質孔，驚孔徑2-漢3m白m，孔捷內滴局加抗蓮原液近，放孤置濕你盒中37濟?C下擴楚散。岡抗原余在孔淹內向鑰四周內擴散緣瑞，與蓄凝膠宿中的假抗體節接觸犁，形棵成白員色沉演淀環瞎，白塌環的衣大小離隨抗且原的泥濃度尚而增具大。苗此法晚在獸轎醫臨跌床上隨用于顆蛋白里質定丸量實湊驗。5/盜18洋/2班02獻3244．雙地向瓊懲脂擴烤散（昆瓊擴補）此法鑼系采川用1%瓊脂味倒于堪平皿建或玻負片上販，制瘡成凝杏膠板旺，可喬按需城要打舍孔。月將抗刊原、纖抗體遇分別拐滴入飲孔內律，放手置濕仿盒中款，在37蔽?C濕箱界中24地-7洲2h后觀藏察。衫在抗踐原與豎抗體庸孔間勵形成秋沉淀份帶。煤每一春種抗恢原成糧分出刺現一坡條沉槽淀帶敏。5/慮18啦/2扔02型325結果辰判斷御：如兩疫個相植鄰孔柜之間稀抗原脾相同循，則魚沉淀囑帶融筒合；吵抗原缸則不虹同，案則互呆相交爆叉；效部分障相同篩則部魂分融鄭合，奴另外誤不同脅部分鑼則交鑰叉。5/包18垂/2迎02掉326特點歷：簡便院、敏毅感性犬低、版耗時心、應糾用最絡廣用途犧：常用峽于細周菌、點病毒么的鑒界定，敬抗血織清效斧價的規測定個，抗針原組援分的喂分析園及傳肥染病煩的診象斷等跌，如捕馬傳詠染性漁貧血憶病的用診斷骨。5/懶18淚/2藥02凝327第三堂節垃凝集索試驗細菌辛、紅澇細胞謎等顆閃粒狀錦態的篩抗原鵲與相罰應的線抗體首結合纖后，由在電航解質氣存在臘時相狡互凝傷集成半絮片街狀團牽塊，襪這種額試驗彎稱為剛凝集帝試驗希（Ag賊gl荷ut債ia瓜ti扭onte議st）。參與聰反應襪的抗委原叫活凝集租原；欣參與沃反應倍的抗功體稱亂為凝識集素驗，主畫要有Ig婆G、Ig壘M。凝段集實爆驗有市直接阿凝集煮試驗闖和間兆接凝發集試思驗兩灑種。5/羊18裳/2拼02逆328基本瀉原理捕：生理識鹽水顆粒餓性抗效原+相應幻玉抗血壩清視顆粒團凝集(細菌泄、紅封細胞)比例申適合凝集撓原結凝集閑素過多質后搏帶現衛象（稀癥釋血窩清）5/糖18禾/2醉02說329一、狀直接梯凝集館試驗顆粒施性抗因原與津相應貝抗體擺在電臣解質慢的參棒與下指，直分接結尊合，精凝集有成團串的現嗚象，贏稱直策接凝憐集試警驗。剃按其全操作恭方法競可分羞為玻印片發殿和試卷管法謎。5/振18特/2閃02削3301．玻才片凝亞集試久驗將已婆知的媽抗血恐清1-勵2滴，鳴滴于理清潔挑玻片源上，寒取待偏檢菌艘液（哈抗原碼）加僻于其佛上，悄混合令均勻悲，數土分鐘冒后可狂出現賴顆粒限狀或細絮片憑狀凝芳集，小謂之符陽性征反應示。特點：簡單坊、快穿速用途：定性噸，細保菌鑒悉定、飯血型捆鑒定咳。如隸用已抹知的翅沙門禮氏菌莊血清印，鑒叨定沙會門氏輝桿菌揭的抗凳原組殺分以呢定型斬。此慌法也很用于團畜禽舟傳染冬病診蠅斷，漁如用館已知賢的雞消白痢遷有色諒平板該抗原瘡，檢傾查雞是血清雁中有換無相沃應抗擋體，各進行斤雞白卸痢檢罰疫5/除18濁/2禮02姻3312．試走管凝萌集試籠驗是一旅種定則性與姓定量扭相結他合的房誠方法計。試些驗時供用一抱列試缸管，情將待癥檢血襖清用0.閱5%石炭伐酸生事理鹽態水作10倍遞傻進稀概釋，寬每管冊維持械量為0.溉5m脫l，一拐管不越加血壓清作的對照噴。每捎管中北加入燒一定企濃度酸的抗狼原0.再5m鮮l，混告合均襖勻，上在37趟?C或室尼溫下座靜置倒數小盆時，收觀察蓄液體摟的亮撒度及做沉淀吸物，恭視不樓同的毅凝集滅程度大記錄巡壽為++液++（10暴0%菌體敬凝集味），++名+（75產%凝集突），+（25聾%凝集捆）。5/碼18全/2梳02任332凡能頸與一壘定量苗抗原蚊發生50熱%凝集忙（++）的惑血清予最高剪稀釋貧度，槐為血綁清的假凝集蟻價或隨效價饅（滴復度）鵲。在服試驗膨時，泡必須別建立渡陰性定、陽距性血劣清對鑼照管昏。特點蔽：準確倘、耗咱時用途們：診斷雕布氏昆桿菌死病，酷測定柜抗體共的凝笛集價(定量)5/提18宇/2龍02駕333二、泰間接始凝集長試驗基本牲原理倘：可溶議性抗投原+惰性他載體逝（聚揚苯乙啟烯乳嶄膠微足粒、憲炭粒童、綿詢羊紅宗細胞幣等）元抗原礙致敏叛載體抗原刮致敏憑載體+相應茶免疫吃血清(抗體)電解煤質被動筑載體載凝集(間接萬乳膠牲凝集票、間駝接炭翁素凝吵集、泰間接延紅細頌胞凝竄集等)5/俗18竹/2歪02夏334特點瞎：敏感(在微毅量反濫應板彎中進兔行試雙驗)、快湖速。用途艙：用已廉知抗拾原致導敏的捉載體滿可檢墻測血渠清中屈的特她異抗炒體及刷其效盜價。若用震已知芝免疫蒙血清退（Ab）致疼敏的接紅細宋胞，槐則可液檢測斃病毒體等可昏溶性弊抗原——稱為匪反向陽間接稈血凝衡試驗熱。5/廉18車/2頓02括3355/地18費/2顛02窯336（正卸向）在間接盈凝集御反應踢原理疼示意炎圖5/宰18呀/2寄02焦337（反琴向）圍間接門凝集晝反應送原理有示意魄圖5/桿18趣/2種02從338間接跑凝集拘抑制牌反應傻原理澡示意故圖A：標柏本中征含抗踏原B：標紛本中轉不含雖抗原5/紗18仗/2室02賴339第四擊節待與奏補體震有關氣的試產驗一、堅補體則的性漏質補體枯是存刃在于罷正常權動物殺血清貸中的陽一組炮蛋白忙質。補體午沒有丘特異狗性，來它能技與任惜何抗派原抗奏體復鳥合物漿相結無合，裁但不按能與槳游離妄的抗率原或雙抗體互相結服合。補體口與抗花原抗業體的霞復合宰物結攝合后坑，可膛出現胸溶血場反應念、溶后菌反浩應、姨補體涌結合晴反應權、凝鴿集反夸應、塑免疫碌黏膜星試驗蓋等。嫩由于達補體技具有悄這一酷特性窗，故課常用蛙其來干檢驗掉抗原降或抗字體是遞否發統生特繳異性困結合貝，特流異性秤抗原潔或抗攏體是治否存頸在。5/演18毯/2鋼02史340二、堆溶解伸試驗1.溶血汁試驗紅細歇胞與汁相應羞的抗序體（枯溶血狀素）蝕相結帖合后還，在址補體臟的參包與下彼，可紗發生手溶血熄反應剛（直玩接溶結血反煤應）腎，以嫌作補疾體結率合反蹄應的尚指示尾系統權。吸附桿抗原供的紅岔細胞田與抗輕體結閱合后藏，在亦補體經存在認下可擱以引辮起溶棋血反妥應，足這種平反應卻稱為貝間接碰溶血有反應昂。間魄接溶肆血反畏應只作能用禮新鮮肥紅細鵲胞，止而新帆鮮紅柏細胞般不易盈保存腎，限助制了昂本法凡的應警用。5/訓18室/2招02弄3412.溶菌抬試驗某些師細菌直（如淋霍亂網弧菌邪）與剩抗體滔結合廊后，壯如有死補體拿存在升，可暗發生似細菌姓溶解削或被助殺死澆，這虜種反氣應稱胳為溶莖菌反在應或阿殺菌遙反應樓。5/拳18忠/2組02伶342三．哈補體狡參與缺的試綿驗—補體眨結合居試驗補體環結合德試驗躁是應沾用可賄溶性告抗原城與相飼應抗送體結怎合,其抗弱原抗巨體復漆合物堤可以良結合肚補體,但這接一反眾應肉諸眼看評不到,如再票加入閘致敏批紅細泊胞,即可穴根據魔是否鎖出現恥溶血此反應溫判斷再反應飾系統孩中是比否存跌在相良應的抓抗原登和抗腔體.5/叨18腿/2孝02斧3431．參擾與反賽應：抗原允抗體酸反應窄系統男、補衫體（稀豚鼠欣血清蕩）、護指示邀系統廁（綿膜羊紅蛋細胞憐、溶軍血素村）。2．反榮應原總理：（如屬下圖滑所示翅）。3．特妹點：敏感膽性特蝦異性辰高。正式攪試驗錦前要師進行畢下列戒測定花，操慚作較坑繁（爽溶血易素效聲價、闖補體爺效價將、抗額原效膚價）訪。4．用它途：用于溜牛肺呀疫、派副結柴核、蜂布氏字桿菌祖病、葵錐蟲滅病、施馬傳隸貧、勞鼻疽女等的墨檢疫蹈。5/菜18拒/2趴02砌3445/井18寶/2滾02努345中和野試驗（病絲式毒、南毒素統中和就試驗罰）原理：病屢毒與抗抗血柱清中叫抗體他特異格結合啦后失黨去感栗染易攻感嶺動物棋、雞晴或雞開胚、及細胞加活性均。例1ND拌V9～11扭d雞胚24～48競h雞胚冷死亡ND禿V+抗血吊清9～11淚d雞胚廚雞胚旋不死致亡第四隸節臣中胞和試晝驗5/繡18毅/2臂02厲346例2口蹄瓶疫病桑毒(F緣瑞MD混V)壺4～7d乳鼠廳乳槐鼠死瞇亡FM炭DV擦+抗血李清4～7d乳鼠陪乳鼠怨不死仙亡用途欲：1.用已置知血醬清鑒彩定病欺毒——診斷渴病毒阿病2.用已委知病驗毒檢黃測血慈清抗推體——診斷魂病毒凱感染勸，測現定病舌毒免旱疫血毀清效披價（其中和債價）愁。5/佛18臭/2股02松347第六進節百免疫目標記而技術免疫咱標記雄技術千即是工將某跟一個檢特定必的易鼠于檢領測的向分子軟或原邁子，瘦聯結膽在抗楚體或態抗原衛上，沸利用呆抗體扇（或紛抗原填）能催與相冬應的航抗原果（或挖抗體銜）結橡合的讓特性惑，從志而檢恢測抗舌原或餓抗體毫的存避在及穗所在取部位玻（定薪位）噸。免疫賭標記江技術索是近縱年來橫研究方血清辛學反口應的福一項害新技別術。驕它不患僅可憂以用橡于抗湖原抗跌體的妻定性挑、定均量，易還可塘用于構抗原斤抗體慎的定告位。黎由于案其反夏應的香特異碰性敏尿感性沒高，房誠不但況在診倦斷疾禮病時謊廣為蘋應用河，亦潑可應廣用于績生物釘領域儀其他是方面浸。5/次18巷/2墊02畜3481.熒光束標記豆抗體做技術嘴（免德疫熒壘光技耗術）免疫你熒光艦技術見是將仿熒光立染料光標記聯在抗族體球酬蛋白舉分子看上，午制成肆熒光王抗體胃。當柱熒光錫抗體羽與相陡應抗設原結押合時騙，就課形成排帶有先熒光稅的抗渠原抗笨體復跳合物萬，在燦熒光旺顯微球鏡下銹，可際觀察漂到此頃復合仗物發爬出的概熒光盡。可疾檢測襪標本哀中某割種抗綁原的叼存在塘或抗射原所滿在的斬部位極（定術位）乎。原理鋸：熒光怒素（F）+AbAbF(寒FI桑TC）)AbF+煤AgAg-AbFAg剩-AbF用途夸：用AbF檢測頂抗原晉（疑定性俗、定傍位）特點爆：敏感逆，需鵝熒光班顯微苗鏡紫外爭光5/翅18沿/2秘02峽349方法超：直接倡法F間接版法FAgAg比較測：隊檢既測一腐種抗舉原安標為記一多種動菊物的攪免疫就須巡壽標記噴特異條球蛋奴白AbF，就追能的一鋼種AbF檢測帖多種訊抗原較特夏異離較敏豈感5/咱18安/2藍02語3502.酶標拔記抗燙體技陪術（誰酶免慶疫測犬定技微術）（1）獄間接喉法縮慧（2）雙攻抗體旺夾心掌法原理斗：用途：已殊知抗臺原、鵲酶標義已知樸血清抹抗體臺、酶抗體評測血淋清抗糠體造標拳抗體束測抗孩原5/恐18肆/2律02盞3513.放射繼免疫窮測定鮮法原理橫：Ag終+A鑼bRAg滴-AbR或AgR+A咽bAgR-A役b用液丑相閃騎爍儀乓測R放出付的射鍋線量特點維：敏感貍性極惕高，混需高窗級閃披爍儀同位冊素對班人有化放射可性危徐害用途催：用于恰藥物況、激淺素、羽酶、扛腫瘤煙抗原赴等測勾定5/倘18愁/2贊02康352四、痰其他足免疫李標記賀技術（一鞋）免圈疫電京鏡技荒術（二股）生燥物素-親和煤素標界記技奶術（三舒）核罪酸探瓣針技欄術5/用18品/2觀02詢353第七炸節盛葡份萄球坦菌A蛋白請及其卷應用葡萄活球菌A蛋白續是大例多數龍金黃害色葡童萄球特菌細燃胞壁仰上所焦含的丈一種娃成分歲，