溫州醫科大學檢驗醫學院溫州醫科大學從屬第一醫院

臨床病原體檢測余方友P444病原微生物檢查第1頁臨床病原體檢驗目標明確感染是否發生以及病原體類型。提供體外微生物藥品敏感試驗結果。親密監視烈性傳染病與新傳染病發生，及時向行政主管部門匯報。配合相關機構進行流行病學調查。病原微生物檢查第2頁

本章主要內容一、標本采集、運輸和檢測方法二、細菌耐藥性檢驗三、臨床感染常見病原體檢驗四、院內感染病原微生物檢查第3頁一、細菌檢驗標本采集與送檢基本標準

1.注明被檢人姓名、性別、年紀、臨床診療、標本起源及檢驗目標、抗生素使用情況。2.盡可能在抗生素使用前采集標本。3.在采集血液、腦脊液、穿刺液等標本時，應嚴格執行無菌操作，防止雜菌污染。4.馬上送到試驗室，一些細菌還應注意保溫、保濕。5.盛標本容器須經滅菌處理，勿用消毒劑。

病原微生物檢查第4頁二、常見標本采集：血液與骨髓

1.采血部位多為肘靜脈，切忌在靜滴抗菌藥品靜脈處采集血標本，無菌操作。2.每次采血量為10～20ml左右，嬰幼兒1～5ml培養基與血液之比以10:1為宜，以稀釋血液中抗生素、抗體等殺菌物質。3.選擇發燒早期、發燒2小時或發燒高峰期采血。對已用抗菌藥品而又不能停藥者，應在下次用藥前采血。4.每例提議不一樣時間不一樣部位采血3次，注意區分感染菌和皮膚污染菌。病原微生物檢查第5頁尿液標本采集

1.中段尿采集：最慣用方法。采樣前須消毒尿道口將中段或近后段尿液留于無菌容器中。2.導尿管采集尿液：可降低污染，但易引發逆行感染。不可從集尿袋下端管口留取標本。3.膀胱穿刺采集尿液：病人恥骨上皮膚消毒后，以無菌針筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液厭氧菌培養或嬰幼兒。病原微生物檢查第6頁糞便標本采集1.挑取有膿血粘液部分新鮮糞便約2～3克盛于滅菌容器中送檢，也可用拭子挑取糞便插入Cary-Blair運輸培養基中送檢。2.對不易獲取糞便者，如嬰幼兒可用直腸拭子采集送檢。病原微生物檢查第7頁呼吸道標本采集

1.自然咳痰：清水重復漱口后用力咳嗽，從呼吸道深部咳出,以清晨第一口痰為好。2.氣管鏡下采集法、氣管穿刺法：下呼吸道病原學理想標本，可降低污染，但病人有一定痛苦，不易接收和推廣。3.應及時送檢和處理(<1小時)，放置時間長可造成肺炎鏈球菌，流感嗜血桿菌等檢出率顯著下降。

病原微生物檢查第8頁腦脊液等無菌體液標本采集

1.嚴格無菌條件下采集標本。2.盡可能采集多標本送檢。3.盡快送檢或床旁接種可提升陽性率，特殊標本需保溫送檢。如腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等。病原微生物檢查第9頁其它標本采集

(傷口、燒傷創面、膿腫等)1.無菌生理鹽水清洗病灶表面后，用無菌拭子取病灶深部膿液和分泌物，馬上送檢。2.對未潰破膿腫直接用碘酒、酒精消毒皮膚后，以無菌注射器抽取膿液送檢，也能夠切開排膿時用無菌拭子采樣。3.生殖道標本包含尿道口分泌物、外陰糜爛物、宮頸口分泌物、前列腺液等，應注意保溫。病原微生物檢查第10頁三、檢驗方法1.直接涂片、鏡檢：初步診療但陽性率低。如抗酸染色找結核桿菌。陰道毛滴蟲革蘭氏染色病原微生物檢查第11頁2.分離、培養、判定：金標準較費時（3天）,同時可進行藥品敏感試驗。3.病原體核酸檢測PCR、分子雜交、DNA測序等。4.血清學檢驗：如肥達氏試驗、軍團菌抗體檢驗等。抗體檢測應進行雙份血清檢測，兩次抗體效價相差4倍以上有現癥診療價值，但無早期診療意義。（但IgM有早期診療意義）病原微生物檢查第12頁本章主要內容一、標本采集、運輸和檢測方法二、細菌耐藥性檢驗三、臨床感染常見病原體檢驗四、院內感染病原微生物檢查第13頁耐藥性及發生機制

1.當前臨床分離常見細菌

(1)革蘭陰性菌大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、陰溝腸桿菌、不動桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌等，占70%。

(2)革蘭陽性菌葡萄球菌、腸球菌、肺炎鏈球菌等，占30%。濫用抗生素后果→耐藥病原微生物檢查第14頁2.耐藥機制(1)耐藥基因整合子系統(2)產生滅活抗生素水解酶或鈍化酶(3)改變抗生素作用靶位(4)細菌膜外排泵出系統(5)生物膜形成，提升耐藥性病原微生物檢查第15頁3、藥品敏感試驗

(1)K-B紙片瓊脂擴散法：最慣用，操作相對方便(2)稀釋法

包含瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法

可取得最小抑菌濃度（MIC），但較麻煩(3)E試驗：結合稀釋法和擴散法，價格昂貴病原微生物檢查第16頁4.重點耐藥菌株監測試驗☆

(1)耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)篩選(2)氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌(HLAR)篩選(3)耐青霉素肺炎鏈球菌(PRSP)篩選(4)染色體Ι型β-內酰胺酶AmpC酶檢測☆(5)超廣譜?內酰胺酶(ESBL)檢測病原微生物檢查第17頁2.重點監測耐藥菌株(6)連續高產染色體Ι型β-內酰胺酶(AmpC)陰溝腸桿菌、產氣腸桿菌、枸櫞酸桿菌(7)多重耐藥銅綠假單胞菌、不動桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌（8）泛耐藥菌株對現有抗菌藥品都耐藥（9）“超級細菌”如產NDM-1腸桿菌科細菌病原微生物檢查第18頁5.病原菌耐藥基因檢測(1)適全生長遲緩細菌如結核分枝桿菌(2)對病原菌耐藥含有確證意義(3)考評其它耐藥性檢驗方法金標準,可能成為未來耐藥性檢驗主導方法。病原微生物檢查第19頁

本章主要內容一、標本采集、運輸和檢測方法二、細菌耐藥性檢驗三、臨床感染常見病原體檢驗四、院內感染病原微生物檢查第20頁

一、流行病學和臨床類型流行病學特征新病原體不停被發覺，如SARS病毒、禽流感染病毒等。老傳染病死灰復燃如結核、梅毒、霍亂等

多重耐藥菌株不停出現器官移植、放/化療、侵入性醫療檢驗或治療造成醫院感染發生率不停增加病原微生物檢查第21頁二、檢驗項目和臨床應用1.細菌感染：細菌培養是最主要確實診方法2.病毒感染：慣用血清學檢驗，如HIV3.真菌和寄生蟲感染：形態學檢驗病原微生物檢查第22頁

本章主要內容一、標本采集、運輸和檢測方法二、細菌耐藥性檢驗三、臨床感染常見病原體檢驗四、院內感染病原微生物檢查第23頁醫院感染常見病原體檢測院內感染概念：入院時無癥狀，在入院48小時后發生感染，或出院后48小時發生感染。患者或陪護人員醫護人員環境或醫療器械三大步驟：傳染源，傳輸路徑，易感人群病原微生物檢查第24頁醫院感染特點①感染源和病原體：感染源主要是患者、醫務人員、醫院環境、醫療器械等。最常見病原體是細菌，以革蘭陰性桿菌為主②易感人群：常見于免疫力低下住院患者。多發生于含有基礎性疾病或接收侵入性治療患者。③常見臨床類型：下呼吸道感染（機械通氣）為最常見醫院感染類型，其它如尿路感染（插管）、手術切口感染、胃腸道感染、血液感染（靜脈留置和透析常見）、皮膚和軟組織感染等。④病原體：條件致病菌和機會致病菌⑤傳輸方式：接觸傳輸多見病原微生物檢查第25頁醫院感染常見細菌1.銅綠假單胞菌呼吸道和燒傷常見2.大腸埃希菌泌尿道、表淺切口感染、菌血癥常見3.鮑曼不動桿菌呼吸道感染常見4.肺炎克雷伯菌呼吸道感染5.金黃色葡萄球菌深部切口感染和皮膚、軟組織化膿病原微生物檢查第26頁掌握臨床常見病原體檢測標本采集運輸標準、要求及方法；熟悉病原體耐藥性發生機制、藥敏試驗及耐藥菌監測試驗；掌握院內感染。本章重點病原微生物檢查第27頁試驗診療學考試單項選擇題70個多項選擇題6題左右名詞解釋2個簡答題1個判斷題10個大課課件上課內容為主，試驗內容可能有部分牽涉。試驗操作不考評，試驗匯報成績占總分15%。

病原微生物檢查第28頁K-B法病原微生物檢查第29頁back病原微生物檢查第30頁E-試驗病原微生物檢查第31頁1.測定方法

OX紙片法：苯唑西林FOX紙片法：頭孢西丁2.MRS對全部β內酰胺類耐藥OXOXFOXFOXOXMRS篩選試驗FOX病原微生物檢查第32頁HLAR篩選CN120AMP1.測定方法紙片法2.CN120：高濃度慶大霉素AMP：氨芐西林病原微生物檢查第33頁ESBLs雙紙片確證試驗1.CTX/CA比CTX抑菌圈或CAZ/CA比CAZ>5mm即為陽性2.若ESBLs陽性,對青霉素類、全部頭孢菌素類及單環類抗菌素耐藥