熒光介紹及熒光顯微鏡的使用第一頁，共二十四頁，2022年，8月28日Leica圖象分析儀組成部分顯微鏡

熒光顯微鏡可見光顯微鏡成象系統照相機圖象采集軟件第二頁，共二十四頁，2022年，8月28日一、熒光顯微鏡的使用優點：檢出能力高對細胞的刺激小能進行多重染色用途：物體構造的觀察熒光的有無、色調比較進行物質判別發熒光量的測定對物質定性、定量分析第三頁，共二十四頁，2022年，8月28日物質中的電子吸收光的能量由低能狀態轉變為高能狀態，再回到低能狀態時釋放出的光。即：物質吸收短波光，發射出的長波光。一種光化熒光

什么是熒光?第四頁，共二十四頁，2022年，8月28日熒光的種類自發熒光：物質受光激發產生的固有熒光二次熒光：物質借熒光色素受光激發產生的熒光自發熒光二次熒光第五頁，共二十四頁，2022年，8月28日熒光的性質吸收光保持固有的熒光特性熒光波長＞激發波長熒光強度極小于激發光的強度有不同程度的衰減熒光強度取決于激發光強度、被檢物濃度、熒光效率第六頁，共二十四頁，2022年，8月28日

熒光顯微鏡的種類

透射式

落射式第七頁，共二十四頁，2022年，8月28日熒光顯微鏡的主要部件

落射式汞燈光源激發濾色鏡分色鏡吸收濾色鏡

透射式汞燈光源激發濾色鏡暗場聚光鏡吸收濾色鏡第八頁，共二十四頁，2022年，8月28日落射熒光顯微鏡原理汞燈激發濾色鏡分色鏡吸收濾色鏡物鏡

標本第九頁，共二十四頁，2022年，8月28日透射熒光顯微鏡原理

目鏡吸收濾色鏡物鏡暗場聚光鏡激發濾色鏡汞燈第十頁，共二十四頁，2022年，8月28日熒光激發濾色塊

透過能使標本產生熒光的特定波長的光，同時阻擋對激發熒光無關的光。

幾種主要的熒光激發濾色塊

第十一頁，共二十四頁，2022年，8月28日熒光顯微鏡標本制作要求

（一）載玻片

載玻片厚度應在0.8～1.2mm之間，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激發光在標本上聚集。載玻片必須光潔，厚度均勻，無明顯自發熒光。有時需用石英玻璃載玻片。（二）蓋玻片

蓋玻片厚度在0.17mm左右，光潔。（三）標本組織切片或其他標本不能太厚，如太厚激發光大部分消耗在標本下部，而物鏡直接觀察到的上部不充分激發。另外，細胞重迭或雜質掩蓋，影響判斷。（四）封裱劑

封裱劑常用甘油，必須無自發熒光，無色透明，熒光的亮度在pH8.5～9.5時較亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/lpH9.0～9.5的碳酸鹽緩沖液的等量混合液作封裱劑。（五）鏡油

一般暗視野熒光顯微鏡和用油鏡觀察標本時，必須使用鏡油，最好使用特制的無熒光鏡油，也可用上述甘油代替。第十二頁，共二十四頁，2022年，8月28日單細胞懸液制備制膠片DNA堿解旋電泳中和細胞裂解染色與觀察單細胞凝膠電泳試驗（彗星試驗）第十三頁，共二十四頁，2022年，8月28日對照組與實驗組中肺泡巨噬細胞DNA遷移的實驗圖象

第十四頁，共二十四頁，2022年，8月28日第十五頁，共二十四頁，2022年，8月28日第十六頁，共二十四頁，2022年，8月28日第十七頁，共二十四頁，2022年，8月28日DAPI+FITC+TexasRed第十八頁，共二十四頁，2022年，8月28日二、可見光顯微鏡的使用光源在顯微鏡下方，不需要開汞燈可以觀察載玻片上的任何物質第十九頁，共二十四頁，2022年，8月28日第二十頁，共二十四頁，2022年，8月28日三、成象系統1、照相機2、圖象采集軟件

Leica100圖象分析軟件，把顯微鏡下看到的圖象拍攝下來，保存成圖片文件，再進行相關分析。第二十一頁，共二十四頁，2022年，8月28日使用要點標本制作正確選擇濾色鏡200W的超高壓汞燈作光源，需預熱15分。壽命有限，標本應集中檢查，以節省時間，保護光源。

防止污染（載物臺已被EB污染）染色后盡快觀察，熒光逐漸減弱第二十二頁，共二十四頁，2022年，8月28日測試題1、該儀器由哪幾部分組成？2、什么是熒光？熒光有幾種類型？有什么性