項(xiàng)目名稱(chēng)：人胚胎生殖嵴干細(xì)胞的分化與組織干細(xì)胞的可塑性研究一、研究?jī)?nèi)容和課題設(shè)置1.項(xiàng)目計(jì)劃任務(wù)書(shū)原定內(nèi)容

研究?jī)?nèi)容主要從兩個(gè)方面考慮：（一）在ES和EG的研究方面著重于胚胎干細(xì)胞的全能性，以及分化調(diào)控方面的研究，具體的研究?jī)?nèi)容：1.建立胚胎干細(xì)胞系：使用體外人工受精技術(shù)，獲得胚胎干細(xì)胞，比較選擇最佳類(lèi)型的滋養(yǎng)細(xì)胞，建立我國(guó)第一個(gè)人胚胎干細(xì)胞系。2.建立篩選胚胎干細(xì)胞的技術(shù)平臺(tái)：在建系的基礎(chǔ)上，獲得大量的ES細(xì)胞，并根據(jù)胚胎干細(xì)胞分裂的特性，使用PKH-26,Hoechst等細(xì)胞熒光染料標(biāo)記細(xì)胞，利用流式細(xì)胞分選技術(shù)進(jìn)行單個(gè)胚胎干細(xì)胞的分選和體外培養(yǎng)，然后使用計(jì)算機(jī)熒光圖象掃描技術(shù)，對(duì)胚胎干細(xì)胞的早期分裂進(jìn)行連續(xù)的追蹤觀察，從中分離出非對(duì)稱(chēng)分裂的干細(xì)胞。3.在建立中國(guó)人胚胎干細(xì)胞系的基礎(chǔ)上，用差減雜交法（SSH法），DNA芯片篩選ES/EG細(xì)胞差異表達(dá)的細(xì)胞受體和分泌蛋白基因的差異，并建立相應(yīng)的數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)。雙向電泳與質(zhì)譜分析相結(jié)合，尋找二者表達(dá)蛋白的差異。4.通過(guò)研究上述相關(guān)基因?qū)ε咛ジ杉?xì)胞增殖和分化的影響，篩選和克隆調(diào)控胚胎干細(xì)胞分化的關(guān)鍵分子，探索運(yùn)用調(diào)控分子的分子作用機(jī)制和信號(hào)傳導(dǎo)途徑。5. 在不同6. 培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)它們向神經(jīng)干細(xì)胞分化。并通過(guò)調(diào)控bFGF的表達(dá)與否來(lái)研究bFGF在神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化中的作用。另一方面，7. 通過(guò)外源性bFGF的添加，8. 來(lái)研究bFGF能否誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞定向分化成神經(jīng)元，9. 以及使用表達(dá)差異法和基因芯片技術(shù)研究bFGF如何引起神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化的信號(hào)傳導(dǎo)。10. 使用原子力顯微鏡（AFM）技術(shù)，11. 對(duì)不12. 對(duì)成稱(chēng)分裂的胚胎干細(xì)胞的分裂過(guò)程和定向誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞分化為神經(jīng)干細(xì)胞的過(guò)程進(jìn)行連續(xù)追蹤觀察，13. 研究細(xì)胞的形態(tài)變化及膜表面受體分子的變化14. 利用細(xì)胞表面的熒光染料標(biāo)15. 記，16. 用近場(chǎng)光學(xué)顯微鏡（NSOM）對(duì)單個(gè)細(xì)胞的早期分裂進(jìn)行連續(xù)的追蹤觀察，17. 根據(jù)其表面熒光標(biāo)18. 記變化的特性和不同19. 細(xì)胞的表面標(biāo)20. 志，21. 尋找特定的受體。進(jìn)行干細(xì)胞在不同22. 時(shí)期特異表達(dá)膜蛋白的單克隆抗體的初步研究。23. 在單個(gè)細(xì)胞水平來(lái)觀察分泌的細(xì)胞因子、細(xì)胞與細(xì)胞的相互作用和整合素與細(xì)胞外基質(zhì)這三類(lèi)因素對(duì)胚胎干細(xì)胞調(diào)控的影響，24. 通過(guò)外源性因素的作用，25. 研究細(xì)胞內(nèi)源性因子的改變，26. 從而27. 闡明人胚胎干細(xì)胞的調(diào)控機(jī)理。（二）、在成體干細(xì)胞的方面，本項(xiàng)目著重于間充質(zhì)干細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞非分化增殖建系和誘導(dǎo)定向分化的研究，具體的研究?jī)?nèi)容：1.從早期人胚胎的腦部直接分離或從手術(shù)中獲得的成人腦組織中分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，利用流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)，利用誘導(dǎo)細(xì)胞增殖的培養(yǎng)基進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞的克隆和培養(yǎng)。2.利用我們已有的定向分化技術(shù)進(jìn)行神經(jīng)細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，并使相當(dāng)一部分誘導(dǎo)成為多巴胺能神經(jīng)元，利用分子生物學(xué)、免疫組化和神經(jīng)電生理等技術(shù)研究誘導(dǎo)的神經(jīng)干細(xì)胞的特性。3.建立神經(jīng)干細(xì)胞遷移動(dòng)物模型。觀測(cè)人神經(jīng)干細(xì)胞在動(dòng)物腦內(nèi)的遷移和分化過(guò)程，分析其與動(dòng)物干細(xì)胞遷移、分化的差異，探討神經(jīng)干細(xì)胞遷移、分化的可能機(jī)制。4.用早期人胚胎標(biāo)本研究腦不同發(fā)育期、不同分化狀態(tài)的神經(jīng)元的基因表達(dá)、細(xì)胞表面受體及分泌蛋白的差異，找到誘導(dǎo)人神經(jīng)干細(xì)胞分化的細(xì)胞因子和相關(guān)基因。利用基因芯片、免疫組化等技術(shù)研究與神經(jīng)干細(xì)胞遷移及分化相關(guān)的基因、細(xì)胞因子及體內(nèi)體外環(huán)境的相互影響。5.利用已有的體外分化技術(shù)對(duì)胚胎神經(jīng)干細(xì)胞和成體神經(jīng)干細(xì)胞和臍帶血及骨髓來(lái)源的干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的研究。從臍帶血和骨髓中分離純化間充質(zhì)干細(xì)胞及造血干細(xì)胞，在體外培養(yǎng)后，分別移植到脊髓損傷及外周神經(jīng)損傷的大鼠，觀察其功能恢復(fù)以及移植細(xì)胞向損傷部位遷移和向神經(jīng)細(xì)胞分化的程度。同時(shí)，探討間充質(zhì)干細(xì)胞及造血干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的調(diào)控機(jī)理。6.分離臍帶血及骨髓來(lái)源的干細(xì)胞，使用實(shí)驗(yàn)性大鼠肢體缺血損傷模型，進(jìn)行干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的研究。7.研究多能干細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞、造血細(xì)胞、成肌細(xì)胞的條件、微環(huán)境和分化調(diào)控機(jī)制。8.在建立神經(jīng)、造血和胰腺組織干細(xì)胞分離培養(yǎng)和功能檢測(cè)系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，利用已建立的功能表達(dá)克隆技術(shù)篩選調(diào)控組織干細(xì)胞維持自我更新、誘導(dǎo)定向分化的關(guān)鍵基因。9.為了克服組織干細(xì)胞數(shù)量少，無(wú)法用常規(guī)的手段分析基因表達(dá)譜這一困難，首先建立用少量細(xì)胞來(lái)分析基因表達(dá)的方法，并結(jié)合差減雜交法及DNA芯片技術(shù)比較不同來(lái)源的組織干細(xì)胞共表達(dá)的基因和差異表達(dá)的基因，以此尋求干細(xì)胞特征的內(nèi)在分子基礎(chǔ)。10.從血管內(nèi)皮細(xì)胞的cDNA文庫(kù)中篩選克隆控制組織干細(xì)胞增殖分化的相關(guān)基因。（具體說(shuō)明每個(gè)課題的主要研究?jī)?nèi)容、目標(biāo)、承擔(dān)單位、課題負(fù)責(zé)人及主要學(xué)術(shù)骨干、經(jīng)費(fèi)比例等）本項(xiàng)目從胚胎干細(xì)胞體外增殖、分化機(jī)理研究和組織干細(xì)胞的增殖分化和可塑性研究?jī)蓚€(gè)方面，設(shè)立了6個(gè)課題進(jìn)行研究，課題一、胚胎干細(xì)胞增殖及定向分化的研究課題承擔(dān)單位：北京大學(xué)干細(xì)胞中心/暨南大學(xué)課題負(fù)責(zé)人：李凌松主要學(xué)術(shù)骨干：周春燕侯緯敏韓梅洪岸蔡繼業(yè)、歐陽(yáng)健明、汪晨曦、楊培慧、經(jīng)費(fèi)比例：占總經(jīng)費(fèi)的15%研究?jī)?nèi)容和目標(biāo)：1.建立胚胎干細(xì)胞系：使用體外人工受精技術(shù)，獲得胚胎干細(xì)胞，比較選擇最佳類(lèi)型的滋養(yǎng)細(xì)胞，建立我國(guó)第一個(gè)人胚胎干細(xì)胞系。2.建立篩選胚胎干細(xì)胞的技術(shù)平臺(tái)：在建系的基礎(chǔ)上，獲得大量的ES細(xì)胞，并根據(jù)胚胎干細(xì)胞分裂的特性，使用PKH-26,Hoechst等細(xì)胞熒光染料標(biāo)記細(xì)胞，利用流式細(xì)胞分選技術(shù)進(jìn)行單個(gè)胚胎干細(xì)胞的分選和體外培養(yǎng)，然后使用計(jì)算機(jī)熒光圖象掃描技術(shù)，對(duì)胚胎干細(xì)胞的早期分裂進(jìn)行連續(xù)的追蹤觀察，從中分離出非對(duì)稱(chēng)分裂的干細(xì)胞。3. 通過(guò)gainfunction和lossfunction實(shí)驗(yàn)測(cè)定bFGF對(duì)細(xì)胞增殖分化的影響，4. 主要是轉(zhuǎn)導(dǎo)可調(diào)控表達(dá)bFGF基因的載體到富集了的神經(jīng)干細(xì)胞中，5. 通過(guò)調(diào)控bFGF的表達(dá)與否來(lái)研究bFGF在神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化中的作用。另一方面，6. 通過(guò)外源性bFGF的添加，7. 來(lái)研究bFGF能否誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞定向分化成神經(jīng)元，8. 以及使用表達(dá)差異法和基因芯片技術(shù)研究bFGF如何引起神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化的信號(hào)傳導(dǎo)。9. 使用原子力顯微鏡（AFM）技術(shù)，10. 對(duì)不11. 對(duì)成稱(chēng)分裂的胚胎干細(xì)胞的分裂過(guò)程和定向誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞分化為神經(jīng)干細(xì)胞的過(guò)程進(jìn)行連續(xù)追蹤觀察，12. 研究細(xì)胞的形態(tài)變化及膜表面受體分子的變化13. 利用細(xì)胞表面的熒光染料標(biāo)14. 記，15. 用近場(chǎng)光學(xué)顯微鏡（NSOM）對(duì)單個(gè)細(xì)胞的早期分裂進(jìn)行連續(xù)的追蹤觀察，16. 根據(jù)其表面熒光標(biāo)17. 記變化的特性和不同18. 細(xì)胞的表面標(biāo)19. 志，20. 尋找特定的受體。進(jìn)行干細(xì)胞在不同21. 時(shí)期特異表達(dá)膜蛋白的單克隆抗體的初步研究。課題二、人胚胎生殖嵴干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究。課題承擔(dān)單位：北京大學(xué)干細(xì)胞中心/北京大學(xué)附屬第一醫(yī)院課題負(fù)責(zé)人：李曉紅主要學(xué)術(shù)骨干：梁麗莉、林桂亭、陸愛(ài)麗、王嵩、孟芳茵、宋書(shū)娟經(jīng)費(fèi)比例：占總經(jīng)費(fèi)的20%研究?jī)?nèi)容和目標(biāo)：1. EG和ES細(xì)胞體外培養(yǎng)條件和生長(zhǎng)特性的比較研究。通過(guò)對(duì)不同2. 種系飼養(yǎng)層以及含不同3. 條件培養(yǎng)液的應(yīng)用摸索建立人EG和ES胚胎干細(xì)胞系的增殖和保持未分化狀態(tài)的培養(yǎng)條件，4. 并最終建成中國(guó)人的胚胎干細(xì)胞系；5. 在建立中國(guó)人胚胎干細(xì)胞系的基礎(chǔ)上，6. 用差減雜交法（SSH法），7. DNA芯片篩選ES/EG細(xì)胞差異表達(dá)的細(xì)胞受體和分泌蛋白基因的差異，8. 并建立相應(yīng)的數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)。9. 雙向電泳與質(zhì)譜分析相結(jié)合，10. 尋找二者表達(dá)蛋白的差異。11. 通過(guò)研究上述相關(guān)基因?qū)ε咛ジ杉?xì)胞增殖和分化的影響，12. 篩選和克隆調(diào)控胚胎干細(xì)胞分化的關(guān)鍵分子，13. 探索運(yùn)用調(diào)控分子的分子作用機(jī)制和信號(hào)傳導(dǎo)途徑。課題三、維持胚胎干細(xì)胞不分化的分子機(jī)理課題承擔(dān)單位：華中科技大學(xué)協(xié)和醫(yī)院干細(xì)胞研究中心中國(guó)科學(xué)院生殖生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室課題負(fù)責(zé)人：黃士昂主要學(xué)術(shù)骨干：宋善俊、鄒萍、陳燕、胡豫、高穎、盧光琇、肖紅梅、劉薇經(jīng)費(fèi)比例：占總經(jīng)費(fèi)的16%研究?jī)?nèi)容和目標(biāo)：目前，人胚胎干細(xì)胞在體外不分化狀態(tài)的維持依賴(lài)于鼠源性飼養(yǎng)層細(xì)胞，其機(jī)理并不清楚，本課題著重探索維持人胚胎干細(xì)胞不分化的機(jī)制。本課題擬在以下方面研究外源性因素對(duì)維持胚胎干細(xì)胞不分化狀態(tài)的影響：1、分泌的細(xì)胞因子2、細(xì)胞與細(xì)胞的相互作用3、整合素與細(xì)胞外基質(zhì)由于對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞多年研究后，體外小鼠胚胎干細(xì)胞已不依賴(lài)于飼養(yǎng)層細(xì)胞來(lái)維持其不分化狀態(tài)，提示我們經(jīng)過(guò)上述研究后，較清楚的解決人胚胎干細(xì)胞不分化狀態(tài)維持機(jī)理的科學(xué)問(wèn)題，最終逐步發(fā)展和健全一種無(wú)飼養(yǎng)細(xì)胞層或人源性飼養(yǎng)細(xì)胞層的培養(yǎng)系統(tǒng)，為人胚胎干細(xì)胞的臨床應(yīng)用和產(chǎn)業(yè)化提供一個(gè)堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。人胚胎干細(xì)胞基本生物學(xué)特性的具體表現(xiàn)是細(xì)胞的對(duì)稱(chēng)性分裂和非對(duì)稱(chēng)性分裂。人胚胎干細(xì)胞在發(fā)育過(guò)程中通過(guò)對(duì)稱(chēng)性分裂來(lái)擴(kuò)增數(shù)量并保持未分化狀態(tài)，通過(guò)非對(duì)稱(chēng)性分裂來(lái)完成自我更新和定向分化。因此本課題的研究特色和創(chuàng)新點(diǎn)是：根據(jù)人胚胎干細(xì)胞基本生物學(xué)特性及其表現(xiàn)出來(lái)的分裂類(lèi)型，在單個(gè)細(xì)胞水平來(lái)觀察上述三類(lèi)因素對(duì)胚胎干細(xì)胞調(diào)控的影響，通過(guò)外源性因素的作用，調(diào)查細(xì)胞內(nèi)源性因子的改變，從而闡明人胚胎干細(xì)胞的調(diào)控機(jī)理。課題四、不同腦區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的生物學(xué)特性課題承擔(dān)單位：首都醫(yī)學(xué)院附屬宣武醫(yī)院北京大學(xué)干細(xì)胞中心課題負(fù)責(zé)人：張愚主要學(xué)術(shù)骨干：沈麗、李勇杰、嚴(yán)漢民、莊平、盧光琇經(jīng)費(fèi)比例：占總經(jīng)費(fèi)的17.5%研究?jī)?nèi)容和目標(biāo)：本課題著重于神經(jīng)干細(xì)胞的研究，研究的內(nèi)容是：1. 體外神經(jīng)干細(xì)胞的克隆和培養(yǎng)1）細(xì)胞來(lái)源：①?gòu)脑缙谌伺咛サ哪X部直接分離神經(jīng)干細(xì)胞②從術(shù)中獲得的成人腦組織中分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞③利用已有的胚胎干細(xì)胞系。2）細(xì)胞培養(yǎng)：①利用組織細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞分離技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分離②利用流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)③利用誘導(dǎo)細(xì)胞增殖的培養(yǎng)基進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)。2．神經(jīng)干細(xì)胞的分化和橫向分化1）利用我們已有的定向分化技術(shù)進(jìn)行神經(jīng)細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，并使相當(dāng)一部分誘導(dǎo)成為多巴胺能神經(jīng)元；2）利用已有的體外分化技術(shù)對(duì)胚胎神經(jīng)干細(xì)胞和成體神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行體外橫向分化，并探索新的分化條件。3）利用分子生物學(xué)和免疫組化等技術(shù)對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的分化產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。4）利用神經(jīng)電生理研究誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞的活性。3.建立神經(jīng)干細(xì)胞遷移動(dòng)物模型。將動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞和已克隆的人腦內(nèi)不同部位的神經(jīng)干細(xì)胞，標(biāo)記后定向注射至動(dòng)物的室管下區(qū)。應(yīng)用免疫抑制劑減少動(dòng)物對(duì)人神經(jīng)干細(xì)胞的排斥反應(yīng)。觀測(cè)人神經(jīng)干細(xì)胞在動(dòng)物腦內(nèi)的遷移和分化過(guò)程，分析其與動(dòng)物干細(xì)胞遷移、分化的差異，探討神經(jīng)干細(xì)胞遷移、分化的可能機(jī)制。4.用早期人胚胎標(biāo)本研究腦不同發(fā)育期、不同分化狀態(tài)的神經(jīng)元的基因表達(dá)、細(xì)胞表面受體及分泌蛋白的差異，找到誘導(dǎo)人神經(jīng)干細(xì)胞分化的細(xì)胞因子和相關(guān)基因。5.利用基因芯片、免疫組化等技術(shù)研究與神經(jīng)干細(xì)胞遷移及分化相關(guān)的基因、細(xì)胞因子及體內(nèi)體外環(huán)境的相互影響。課題五、組織干細(xì)胞可塑性的研究課題承擔(dān)單位：北京大學(xué)人民醫(yī)院血液病研究所中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所課題負(fù)責(zé)人：劉開(kāi)彥、韓忠朝主要學(xué)術(shù)骨干：楊仁池、趙春華、李妍涵、高志勇、王婧經(jīng)費(fèi)比例：占總經(jīng)費(fèi)的16.5%研究?jī)?nèi)容和目標(biāo)：1、利用實(shí)驗(yàn)性大鼠脊髓損傷及外周神經(jīng)損傷模型模型，從臍帶血和骨髓中分離純化間充質(zhì)干細(xì)胞及造血干細(xì)胞的單一細(xì)胞群體，如CD34陽(yáng)性或其它表面特異性抗原陽(yáng)性的細(xì)胞群體，在體外培養(yǎng)擴(kuò)增后，以不同的組別進(jìn)行不同途徑的干細(xì)胞分別移植到脊髓損傷及外周神經(jīng)損傷的大鼠，觀察模型鼠的肌體運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)，并進(jìn)行移植細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的免疫組化研究和干細(xì)胞向病變部位遷移的機(jī)理研究。同時(shí)，以整個(gè)項(xiàng)目組建立的基因表達(dá)檢測(cè)平臺(tái)探討間充質(zhì)干細(xì)胞及造血干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化過(guò)程中的差異表達(dá)的基因，獲得間充質(zhì)干細(xì)胞或造血干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的分子調(diào)控機(jī)理。2、建立實(shí)驗(yàn)性大鼠肢體缺血損傷模型，從臍帶血和骨髓中分離純化單一表面標(biāo)記的間充質(zhì)干細(xì)胞或造血干細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)后分別移植到肢體缺血的模型大鼠，觀察大鼠肢體血供恢復(fù)情況，移植細(xì)胞向損傷部位遷移的監(jiān)測(cè)和移植細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的檢測(cè)。在獲得上述信息的基礎(chǔ)上，利用已經(jīng)建立的基因表達(dá)檢測(cè)平臺(tái)探討間充質(zhì)干細(xì)胞及造血干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化過(guò)程中的差異表達(dá)的基因，并進(jìn)行其調(diào)控機(jī)理的研究。3、以成體多能干細(xì)胞多向分化的條件和微環(huán)境為中心，對(duì)多能干細(xì)胞的可塑性進(jìn)行研究。成體干細(xì)胞選擇成體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和造血干細(xì)胞，以及臍帶血間充枝干細(xì)胞和造血干細(xì)胞，本課題將分別建立細(xì)胞模型深入研究這些干細(xì)胞橫向分化為神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成肌細(xì)胞的條件，并對(duì)相應(yīng)的分化微環(huán)境進(jìn)行研究；并通過(guò)對(duì)分化過(guò)程中基因表達(dá)差異的比較，進(jìn)行橫向分化控制基因的研究，研究多向分化的分子調(diào)控機(jī)制，以及成體多能干細(xì)胞原位異位修復(fù)時(shí)干細(xì)胞導(dǎo)向、趨化、定位的分子機(jī)制。課題六、組織干細(xì)胞增殖和分化的機(jī)制課題承擔(dān)單位：北京大學(xué)生命科學(xué)院課題負(fù)責(zé)人：鄧宏魁主要學(xué)術(shù)骨干：程紅、樊啟昶、高崇明、盧萍、張麗君、杜立穎、沈延經(jīng)費(fèi)比例：占總經(jīng)費(fèi)的15%研究?jī)?nèi)容和目標(biāo)：一．建立神經(jīng)、造血和胰腺組織干細(xì)胞分離、純化和體外培養(yǎng)、及細(xì)胞鑒定和功能檢測(cè)系統(tǒng)。在此基礎(chǔ)上，利用我們已建立的功能表達(dá)克隆技術(shù)(Deng,Nature,1997)篩選在調(diào)控神經(jīng)、造血和胰腺組織干細(xì)胞維持體外增殖能力、和相互定向分化的關(guān)鍵基因，并進(jìn)行分子調(diào)控機(jī)制的研究。二．為了克服組織干細(xì)胞數(shù)量少，無(wú)法用常規(guī)的手段分析基因表達(dá)譜這一困難，我們將首先建立用少量均一細(xì)胞來(lái)分析基因表達(dá)的方法，并結(jié)合我們建立的體外培養(yǎng)神經(jīng)、造血和胰島干細(xì)胞的基礎(chǔ)上，利用差減雜交法及DNA芯片技術(shù)比較不同來(lái)源的組織干細(xì)胞共表達(dá)的基因和差異表達(dá)的基因，目前我們的目標(biāo)是找到10個(gè)以?xún)?nèi)的相關(guān)基因。以此尋求成體干細(xì)胞增殖和分化的內(nèi)在分子調(diào)控基礎(chǔ)。三．目前已發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的因子可能對(duì)組織干細(xì)胞的增殖分化有重要影響，我們將從血管內(nèi)皮細(xì)胞的cDNA文庫(kù)中篩選克隆控制組織干細(xì)胞增殖分化的相關(guān)基因，建立相應(yīng)的載體，利用基因?qū)氲姆椒ㄞD(zhuǎn)入組織干細(xì)胞中，并進(jìn)行該基因?qū)Ω杉?xì)胞的特性影響的研究。2.后三年調(diào)整方案

在保持該項(xiàng)目總體研究方向和總體構(gòu)架基本不變的前提下，結(jié)合干細(xì)胞研究的新進(jìn)展和我們的自身優(yōu)勢(shì)，重新確定每一個(gè)子課題的主要研究?jī)?nèi)容，并相應(yīng)地改組了各個(gè)子課題的人員組成。具體方案如下：1、 胚胎干細(xì)胞增殖及定向分化的研究（課題編號(hào)2001cb510101）課題負(fù)責(zé)人：李凌松該子課題的主要研究方向確立在:a、 Pax6基因在誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向胰島干細(xì)胞分化以及干細(xì)胞向胰島細(xì)胞分化中的作用（李凌松）b、 胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的定向誘導(dǎo)（陳貴安）2、 人胚胎生殖嵴干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究（課題編號(hào)2001cb510102）課題負(fù)責(zé)人：李麗英該子課題的主要研究方向確立在:c、 人胚胎EG和ES細(xì)胞差異基因及特定基因甲基化的比較研究（李麗英）d、 EG細(xì)胞建系的培養(yǎng)條件研究（李麗英）3、 維持胚胎干細(xì)胞不4、 分化的分子機(jī)理（課題編號(hào)：2001cb510103）課題負(fù)責(zé)人更改為：周棋教授該子課題的主要研究方向確立在:e、 染色體修飾對(duì)于胚胎干細(xì)胞不f、 分化的調(diào)控（周棋）g、 胚胎干細(xì)胞特異因子PESCRG1對(duì)于干細(xì)胞自我復(fù)h、 制和分化的調(diào)控（盧光琇i、 j、 轉(zhuǎn)錄因子Oct-4和Nanog的對(duì)胚胎干細(xì)胞的調(diào)控（裴端清）5、 不同6、 腦區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的生物學(xué)特性（課題編號(hào)：2001cb510104）課題負(fù)責(zé)人：張愚該子課題的主要研究方向確立在:k、 不同l、 腦區(qū)來(lái)源的神經(jīng)干細(xì)胞表面受體、分泌蛋白的表達(dá)變化（張愚）m、 神經(jīng)干細(xì)胞和表皮干細(xì)胞的生物學(xué)性狀的比較（曹宇靜）n、 神經(jīng)干細(xì)胞分化過(guò)程中細(xì)胞表面分子的原子顯微鏡研究（蔡繼業(yè)）7、 組織干細(xì)胞可塑性的研究(課題2001cb510105)課題負(fù)責(zé)人更改為：韓忠朝教授該子課題的主要研究方向確立在:o、 HAPO對(duì)于內(nèi)皮干細(xì)胞的調(diào)控作用及其機(jī)制（韓忠朝）p、 間充質(zhì)干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞及雪旺氏細(xì)胞的分化研究及其在臨床中的應(yīng)用（韓忠朝、劉開(kāi)彥）8、 組織干細(xì)胞增殖和分化的機(jī)制(課題2001cb510106)課題負(fù)責(zé)人：鄧宏魁教授a、Hes1作為胰腺干細(xì)胞標(biāo)記及其功能的研究（鄧宏魁）b、一種促進(jìn)造血干細(xì)胞非分化增值的新因子克隆及功能研究（鄧宏魁）c、干細(xì)胞不對(duì)稱(chēng)分裂在單細(xì)胞水平的研究（黃士昂）

具體方案如下：1、 胚胎干細(xì)胞增殖及定向分化的研究（課題編號(hào)2001cb510101）承擔(dān)單位：北京大學(xué)干細(xì)胞中心研究隊(duì)伍增加了歸國(guó)留學(xué)人員文錦華博士（日本大坂大學(xué)）和張凌博士（美國(guó)馬里蘭大學(xué)）以及北京大學(xué)第三人民醫(yī)院輔助生育中心的陳貴安教授的研究隊(duì)伍。2、 人胚胎生殖嵴干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究（課題編號(hào)2001cb510102）承擔(dān)單位：北京大學(xué)干細(xì)胞中心研究隊(duì)伍增加了歸國(guó)留學(xué)人員李麗英副教授3、 維持胚胎干細(xì)胞不4、 分化的分子機(jī)理（課題編號(hào)：2001cb510103）承擔(dān)單位更改為：中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所研究隊(duì)伍由周棋教授，清華大學(xué)裴端清教授和中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院盧光琇教授為主體的研究隊(duì)伍。5、 不同6、 腦區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的生物學(xué)特性（課題編號(hào)：2001cb510104）承擔(dān)單位：首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院研究隊(duì)伍由張愚教授和中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所的段恩奎教授以及暨南大學(xué)蔡繼業(yè)教授為主體的研究隊(duì)伍。7、 組織干細(xì)胞可塑性的研究(課題2001cb510105)承擔(dān)單位：中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所研究隊(duì)伍由韓忠朝教授、北京大學(xué)人民醫(yī)院劉開(kāi)彥教授為主體的研究隊(duì)伍。8、 組織干細(xì)胞增殖和分化的機(jī)制(課題2001cb510106)課題負(fù)責(zé)人：鄧宏魁教授承擔(dān)單位：北京大學(xué)生命科學(xué)院研究隊(duì)伍9、 由北京大學(xué)生命科學(xué)院的鄧宏魁、華中科技大學(xué)的黃士昂教授組成。調(diào)整前調(diào)整后承擔(dān)單位數(shù)911總?cè)藬?shù)6661正高2218副高1915中初級(jí)1921博士后67研究生2660二、研究目標(biāo)1.項(xiàng)目計(jì)劃任務(wù)書(shū)原定內(nèi)容1. 建設(shè)若干具有自身特色的干細(xì)胞研究應(yīng)用中心。2. 建立一套進(jìn)行干細(xì)胞多學(xué)科研究合作攻關(guān)的管理方法