生化實驗(五)-(綜合性實驗一) 血糖的測定 - (葡萄糖氧化酶法)(對比法、標準曲線法)_第1頁
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文檔簡介

血糖的測定實驗五

(葡萄糖氧化酶法)（綜合性實驗一）一、實驗目的和要求：掌握酶聯法測定血糖含量的基本原理。熟悉分光光度計的操作。掌握血糖正常水平及其測定的臨床意義。復習血糖的來源、去路及其調節的有關理論知識。

葡萄糖為一含醛基的已糖，在pH7.0條件，葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase,GOD）可催化血樣中葡萄糖氧化生成葡萄糖酸及過氧化氫。后者在過氧化物酶（peroxidase,POD）的作用下與苯酚，4-氨基安替毗啉氧化縮合成紅色醌式物質，在505nm處有最大吸收峰。標本中葡萄糖含量與吸光度成正比，可求得血樣中葡萄糖的含量。二、基本原理：β-D葡萄糖+O2+H2Oβ-D葡萄酸+H2O2葡萄糖氧化酶(GOD)H2O2

+4-氨基安替吡啉+苯酚H2O+紅色醌式物質過氧化物酶(POD)原理505nm有最大吸收峰

正常血糖水平為80—120毫克／100ml，在糖尿病及腎上腺皮質機能亢進和腦下垂體機能亢進的患者血中葡萄糖含量可顯著升高，饑餓時，血糖水平可下降。【器材】硬質中試管容量瓶、燒杯、玻璃棒電子天平微量移液器【試劑】工作液（酶酚混合試劑）葡萄糖雙蒸水待測樣品三、實驗器材與試劑：取硬質中試管三支，分別標以1、2、3號，按下表操作：混勻后同時將三支試管置于37℃水浴中，保溫10分鐘，在波長505nm處比色。以空白管調零，讀取標準管及測定管吸光度。（即測得A樣和A標）四、實驗操作：葡萄糖氧化酶法測定血糖的含量原理：步驟：空白管標準管樣品管工作液1.5mL1.5mL1.5mL蒸餾水0.03mL標準液（10mM）0.03mL樣品0.03mL

取3根試管，分別加入試劑混合均勻后，37攝氏度孵育10min，505nm比色，以空白管試劑調零，分別讀取標準管和樣品管的吸光值，并計算樣品的實際濃度。葡萄糖+O2+H2O葡萄糖氧化酶葡萄糖酸+H2O22H2O2+4-氨基安替吡啉+酚過氧化物酶

醌亞胺+4H2O結果：請記錄實驗數據并列出計算公式葡萄糖標準溶液的配制配制10mmol/L葡萄糖溶液：

準確稱量0.18g葡萄糖粉末；

用雙蒸水溶解，充分溶解后，定容至100ml。標準曲線試管編號012345610mmol/L葡萄糖標準液（ml）00.0050.010.0150.0200.0250.030雙蒸水（ml）0.0300.0250.0200.0150.0100.0050酶酚混合液（ml）1.501.501.501.501.501.501.50【計算】待測樣品中葡萄糖濃度（mmol/L）＝——————×10

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